胶原蛋白的分析

新鲜、冷冻和福尔马林固定的组织

介绍

从组织中提取胶原的效率较低且可变，可能是由于成熟胶原中存在交联。因此，定量分析胶原蛋白的

一种常用方法是对组织进行酸水解，然后用HPLC或比色法测定羟脯氨酸。该方法适用于组织和组织提取物。

然而，组织储存的主要方式是作为石蜡包埋的福尔马林固定组织。到目前为止，组织学染色和图像分析是分析石蜡包埋组织的方法。这种方法确实提供了关于组织中胶原蛋白定位的定性信息，但只是半定量的。

我们设计了一种定量和易于分析福尔马林固定石蜡包埋的组织或组织切片中的胶原蛋白的方法。不需要用二甲苯等有毒溶剂去除石蜡，也不需要使用特殊设备。该方法的灵敏度是，仅适用于少量10µm组织切片定量胶原。

在这个应用说明中，我们展示了在新鲜或冷冻组织、福尔马林固定组织和石蜡包埋组织中易于进行每个蛋白分析的数据和方法。

图1.

不同类型组织中总胶原和总蛋白分析示意图

方法

.1该程序的表示形式如图所示。将5-10个10µm组织切片（或相应数量的新鲜或福尔马林固定组织）转移到萨斯特管中，加入150µl6M盐酸，在95时通过o/n孵育水解oC在热块中。

水解后，在不进行任何预处理的情况下，35µl用于胶原定量测定(测定时间90min)， 15µl用于快速酶蛋白测定(测定时间30min)，这是专门用于酸水解物中的蛋白质分析的方法开发的。蛋白质数据被用作用于水解的未知数量的组织的归一化。结果在冷冻组织、石蜡化和脱亲和的组织切片中，胶原蛋白和蛋白质的比例相似样品处理，如甲醛固定、石蜡包埋和二甲苯处理脱除样品，不影响胶原蛋白和蛋白质分析（图2）。

图2.

以不同方式处理的组织中的胶原蛋白/蛋白质比例 在甲醛固定石蜡包埋的人动脉组织中分析胶原蛋白。将冷冻组织、10µm石蜡包埋组织切片或10个经二甲苯预处理的10µm组织切片 水解，并使用快速酶总胶原试验和快速酶蛋白试验进行进一步分析

每个蛋白质的胶原蛋白的结果与每个湿重分析的胶原蛋白相似

每毫克组织湿重的胶原蛋白和每毫克蛋白质的胶原蛋白给出了类似的结果(见表1A和表1B)。因为并不是针对所有的应用程序(例如。当使用福尔马林固定的组织时)，可以确定湿重或干重，酸水解酸中的蛋白质分析为组织中的胶原蛋白分析提供了新的机会。

表1A。不同小鼠组织的每湿重胶原蛋白分析机构

表1B。不同小鼠组织的胶原蛋白分析

从不同类型的（纤维化）组织的切片中提取的胶原蛋白和蛋白质分析从组织切片开始，例如小鼠肾纤维化(UUO)、肺纤维化（博莱霉素诱导）和肝纤维化(NASH)。从10个10µm石蜡包埋切片中测定总胶原蛋白/总蛋白。3)，并被发

现在纤维化条件下增加。

图3在各种纤维化和非纤维化组织中处理的组织中的胶原/蛋白比例

在小鼠肾纤维化(UUOvsSham)肺纤维化(博莱霉素vsPBS)和饮食诱导的NASH(西 方饮食加胆固醇vs对照组)的甲醛固定石蜡包埋组织中分析总胶原蛋白/总蛋白。对10个10µm组织切片进行水解，并使用快速酶总胶原分析和蛋白分析

结论

在新鲜、冷冻或福尔马林固定石蜡包埋组织中，胶原蛋白和总蛋白的定量现在可以以一种快速和简单的检测格式进行，而不需要HPLC或其他特殊设备。QuickZyme生物科学公司开发了一套用于分析任何物种的胶原蛋白的分析方法，每一种都有不同的应用领域胶原蛋白 相关的 化验 可用的 在 激酶 生物科学激酶可溶性胶原蛋白测定

快速Zyme总胶原检测

激酶羟脯氨酸测定

快速zyme蛋白测定

激酶可溶性胶原蛋白测定

该检测方法可识别可溶性或（酸/胃蛋白酶）可溶性胶原蛋白。

该检测方法是比色法，有96孔板格式，并基于胶原蛋白与天狼星红的沉淀。这种染料可以结合碱性氨基酸残基的侧链基团。染料在高pH下从沉淀配合物中释放，然后进行比色检测。基于天狼星红的检测可以识别胶原蛋白，但也有其他一些基质相关蛋白可能共同沉淀。

应用：该测定方法用于测定（可溶性）胶原蛋白。细胞培养基，以及（酸或酸/胃蛋白酶）溶解的胶原蛋白e。g.从 细胞提取物。

quickzyme 总胶原检测

该方法可识别所有类型的胶原蛋白，无论其形式如何（成熟、未成熟、前胶原蛋白、降解胶原蛋白、交联胶原蛋白、来自不同来源的胶原蛋白）。

该检测方法是比色法，具有96孔板格式，并基于羟脯氨酸的定量，这是一种只存在于胶原蛋白中的氨基酸。羟脯安酸在含胶原样品的酸水解后释放出来。水解在95点进行0C，该产品可直接用于羟脯氨酸分析，无需进步洗涤或干燥步骤。该分析是基于已建立的氯胺T/DMBA方法。

应用范围：该测定方法用于测定总胶原蛋白。由于一是样品的*水解，胶原蛋白的提取困难没有任何作 用。该检测方法适用于所有类型的样本，包括组织。

激酶羟脯安酸测定

该测定方法与总胶原测定方法相似，不同之处在于没有包括胶原水解的方案和材料，而没有提供胶原标准

，而是羟脯安酸标准。

应用：该方法与总胶原检测具有相同的应用区域，但适用于有自己的水解方法或有水解样品进行分析的客户。

quickzyme蛋白测定

该方法测定蛋白质水解产生的游离氨基酸。该方法采用比色法，可直接对酸水解物进行。

应用：该方法旨在测量酸水解物中的总蛋白，当不可能进行基于重量的归一化、不方便或变化太大时，提供总 胶原蛋白和羟脯安酸值的归一化。

Jinpan 组织解离液

组织解离液是由多种生物酶组成的混合物，可温和、快速、高效地将组织中的结缔组织酶解并释放出细胞，形成细胞悬液。组织解离液适用于脾脏、肝脏、肾脏、胰腺、胃黏膜组织、肿瘤组织等多种组织的细胞分离。解离组织获得的细胞具有高活性，可保留细胞的表面抗原等特点，细胞可用于细胞培养、细胞分选、药物筛选、单细胞测序等。

活组织冻存试剂盒说明书

产品详情

产品描述

用于新鲜组织及病理学分析样本的冷冻保存。活组织冻存试剂盒玻璃化冻存组织，可有效维持组织的形态结构和功能，组织活性从分子水平到组织水平均可得到高效保存，实现组织活性的长期高效保存，适用于动物组织和肿瘤组织的冷冻保存。活组织复苏试剂盒配合冻存试剂盒使用，即时复苏，可高效复苏保存组织活性。

产品性质

1.   外观：红色澄清溶液。

2.   PH值：7.0-7.6（25±2℃）。

3.   无菌：应无菌生长。

4.   支原体：应符合规定。

产品特点

玻璃化冻存技术 ：活性组织与高浓度冻存液充分反应后经快速降温转变为玻璃样半透明状，并予以低温保存。组织在冻存过程中细胞内外无冰晶形成，避免了细胞的结构破坏，可高度保存组织活性。

•玻璃化冻存技术，无需程序降温

•复苏后组织活性可保存80%以上，可用于构建PDX/PDC模型，药敏试验及单细胞测序等

•无细菌、无真菌，无支原体

产品组分

含有蔗糖和二甲基亚砜等成分的水溶液。

使用方法

使用方法

【样本要求】

实验应选用形态规则的组织，避免使用糜烂或坚硬组织。

【使用方法】

1.   检查组织，确定待处理和冻存的部位，清除坏死、多余组织及残余的凝结块与粘膜。如有血液，应用生理盐水或PBS冲洗干净。如标本为肿瘤组织，应充分冲洗以避免可能的微生物污染。

2.   使用组织切片模具(LT2603)和刀片(LT2604)将组织切成1mm厚的组织片，若组织松散呈糜烂状切成1mm厚度不易保持完整，可切成2mm厚。

3.   选取形态较完整的组织片浸入V1中处理10min，在5min时上下颠倒3～5次。

4.   将组织片从V1移入V2中处理 20min，在10min时上下颠倒3～5次。

注意：V2处理结束后，组织片沉于管底或半悬浮于V2液中。如果组织漂浮于V2液面上，说明组织片中非细胞成分较多，可增加V1、V2处理期间混匀的次数。

5.   将组织支架平铺于无菌纱布上，然后将处理好的组织片移到组织支架上，避免重叠和折叠，用纱布吸去多余的液体。

6.   将放有组织片的支架迅速浸入液氮中静置至少5min。

注意：在组织支架移入组织冻存管前，检查组织切片是否透明，透明的组织切片意味着组织切片成功被玻璃化。

7.   拧开冻存管盖，将冻存管液氮预冷10秒，快速将组织支架移入冻存管内，旋上管盖。

8.   将冻存管移入液氮罐中长期保存。

实验案例分析

注意事项

1.   本产品不可用于临床治疗。

2.   贮存期间应密封保存，发现内包装破损后慎用。

3.   使用后产生的废弃物应按照使用者所在单位、实验室管理规定处理；如果产品接触过传染性细胞样本，应当遵守相应法规，不得随意丢弃。

运输及保存方法

2-8℃密封保存，有效期1年。

组织解离液 说明书

产品描述

组织解离液是由多种生物酶组成的混合物，可温和、快速、高效地将组织中的结缔组织酶解并释放出细胞，形成细胞悬液。组织解离液适用于脾脏、肝脏、肾脏、胰腺、胃黏膜组织、肿瘤组织等多种组织的细胞分离。解离组织获得的细胞具有高活性，可保留细胞的表面抗原等特点，细胞可用于细胞培养、细胞分选、药物筛选、单细胞测序等。

相关货号

产品性质

外观：淡黄色澄清液体

无菌：无菌生长

支原体：阴性

使用方法

【所需试剂、耗材、器械与仪器】

试剂：细胞培养基，红细胞裂解液（选用）

耗材：离心管，一次性无菌过滤器（70µm）

器械：眼科剪、眼科镊

仪器：恒温摇床，离心机

【使用方法】

1.  取新鲜组织100mg左右加至无菌离心管中，用眼科剪将组织che底剪碎至1-2mm³，加入组织消化液1 mL。

2.  将离心管置于恒温摇床上，37℃、180rpm震荡孵育10-30min消化组织，可根据组织的不同适当缩短或延长消化时间。

3.  孵育结束后将离心管内的组织匀浆用70µm无菌过滤器过滤，然后加入细胞培养基冲洗过滤器，用离心管收集滤液。

4.  将细胞悬液1200rpm离心5min，弃上清。

5.  再加入适量培养基，1200rpm离心5min，弃上清。

6.  用细胞培养基重悬细胞，取少量细胞镜下观察消化情况。

7.  根据需要将细胞用于后续实验。

8. （可选）可使用红细胞裂解液去除组织解离过程中的红细胞或死细胞。

注意事项

1.  拿到组织解离液后应根据实际使用量进行分装，置于-20℃保存，随用随取，避免反复冻融。

2. 组织解离液2-8℃保存应不超过48h，2-8℃长时间保存会降低产品的解离效果。

3. 若组织解离获取的细胞用于细胞培养，应保证所有操作均在无菌条件下完成。

运输及保存方法

-20℃保存，有效期6个月。