ISOGEN II

总RNA及小RNA提取试剂

离心后的沉淀	ISOGEN II 100 mL

　　ISOGEN II 是从动物组织和培养细胞中提取总RNA和小RNA的试剂。本品是含有苯酚和胍的均匀液体，根据与细胞成分的相互作用，能一步分离RNA。

　　使用旧产品（ISOGEN和ISOGEN-LS）需要添加氯仿，要进行液相分离，而本产品则无需此步骤。在样品中加入ISOGEN II溶解或是均质之后，添加水， DNA、蛋白质、多糖类等沉淀（不溶化），进行离心分离后可以去除（右图）。用酒精沉淀、洗净、溶解上清液之后，能分离出高纯度的RNA。若配合ISOGENOME 使用，也能够跟ISOGEN一样从同一样本中提取DNA。

◆特点

　　•　无需使用氯仿分离RNA

　　•　相比旧产品（ISOGEN等），小RNA的提取率更高

　　•　可以把高分子RNA（＞200 bases）和小RNA（＜200 bases）分离（也有不分离的方案）

　　•　混入的DNA较少，提取的RNA可以直接使用RT-PCR和定量RT-PCR

　　•　约一小时内可提取出RNA

◆用途

　　从活体组织提取RNA等等

◆产品列表

运输方法

　　本品在室温下运输。产品到达后，在2~10℃条件下保存即可正常使用。

◆使用案例

操作流程

・除了本产品，根据需准备RNase free water、乙醇、4-溴甲氧基苯异丙醇。
・可使用聚丙烯管，使用前确认是否能够承受离心强度（12K × g）及ISOGEN II（苯酚）。
・离心操作建议在4-28℃进行。

实验数据

1. 提取的RNA的电泳

2. 检验出miRNA
3. RT-PCR
4. RNA提取共沉淀剂效果（测定吸光度）
5. RNA取量的基准
6. 使用ISOGEN II从植物提取总RNA
7. 使用ISOGEN II从植物提取高分子RNA及小RNA分离＜改变流程＞

Data 1：提取的RNA的电泳

　　按照ISOGEN及ISOGEN Ⅱ的操作顺序，提取RNA，进行电泳。

　　▶　道1、2中，ISOGENⅡ与ISOGEN一样，可提取全DNA。

　　▶　道3、4中，ISOGENⅡ可区分200bases以上的高分子RNA及10~200bases的小RNA。

Data 2：检验miRNA

Data 3：RT-PCR

　　使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ从Hela细胞提RNA作为模板。通过RT-PCR检测出β-actin基因。同时，进行不产生RT反应的控制组实验。

　　▶　使用ISOGEN Ⅱ提取的RNA比使用ISOGEN抽提的RNA混入DNA较少。

Data 4：RNA提取共沉淀剂效果（测定吸光度）

　　ISOGEN Ⅱ的使用指南中分离小RNA时，对使用共沉淀剂Ethachinmate（Nippon Gene 产品编号：312-01791）或者Glycogen（和光纯药工业 产品编号：077-05311）时提取到小RNA情况进行了比较。

　　▶　使用Glycogen作为共沉淀剂回收小RNA时的回收量较多，变异较少。

Data 5：RNA取量的基准

Data 6：使用ISOGEN II从植物提取总RNA

从植物抽提全RNA例子 (PDF 222KB)

Data 7：使用ISOGEN II从植物抽提高分子RNA及小RNA分离＜变化流程＞

从植物抽提高分子RNA及小RNA离析例子 (PDF 218KB)

◆注意事项

　　•　本品是实验研究用的试剂，不能作为医药品或其他目的使用。另外，如果您对试剂的基本的知识不了解，请不要使用。

　　•　ISOGEN II是非医疗用剧毒物（苯酚制剂），请小心操作。

　　•　使用时请穿着适当的防护设备（手套、眼镜等）。

　　•　操作场所保持通风，以免吸入蒸汽。

　　•　如果接触皮肤或眼睛，请用大量的水冲洗15分钟或以上，并及时就诊。

　　•　请按照说明书进行操作。

　　•　对于因不按照说明书操作而导致的事故，Nippon Gene不负任何责任。

◆备注

　　本产品是实验研究用试剂，请勿用作医疗用途。

◆资料 Data Sheet

产品说明书

　　•　ISOGEN II　产品说明书第三版（100 mL产品小冊子） (PDF 195KB)

　　•　(内容与册子相同） (PDF 168KB)

SDS(Safety Data Sheet)

　　•　ISOGEN II 　安全数据图表(PDF)

宣传单

　　•　册子（PDF 2MB）

◆相关产品

　　 •　RNA抽提用试剂　ISOGEN、ISOGEN-LS

　　 •　RNA抽提用试剂　ISOGEN with Spin Column

　　 •　酒精沉淀用共沉淀剂　Ethachinmate

　　 •　缓冲器　ddWater, TE（pH 8.0）

Q：可以从全血等血液样本中抽提RNA吗？

A：ISOGEN II 难以提取出高纯度的RNA，建议使用ISOGEN-LS。

Q：可以提取DNA或蛋白质吗？

A：旧法使用 ISOGEN，可以从同一样本回收DNA及蛋白质，但由于此次研发的是提取RNA的方法，ISOGEN II 中混入的DNA较少，无法提取DNA

     及蛋白质。不过，配合使用DNA提取试剂 ISOGENOME，可回收DNA样本。

参考文献

ISOGEN II RNA抽提试剂

ISOGEN II

从动物组织和培养细胞中高效分离纯化含有小 RNA 的总 RNA

◆原理

      ISOGEN II 是从动物组织和培养细胞中总 RNA 和小 RNA 的抽提试剂。本品是含有苯酚和胍的均相液体，根据与细胞成分的相互作用，能单一地分离 RNA 。
      使用旧产品（ISOGEN 和 ISOGEN-LS）需要添加氯仿，要进行液相分离，而本产品则无需此步骤。在样品中加入 ISOGEN II 溶解或是均质化之后，再添加水，因为 DNA、蛋白质、多糖类等会形成不溶性沉淀，进行离心分离后可以去除。用乙醇沉淀并洗涤、溶解得到上清之后，能分离出高纯度的 RNA 。

◆优点・特色

●　不需使用氯仿分离 RNA
●　比起旧产品（ ISOGEN 等），小RNA 的抽提效率更高
●　可以把大 RNA（>200 bases）和小 RNA（<200 bases）分离（同时提供不分离的方案）
●　DNA 污染少，抽提的 RNA 可以直接用于 RT-PCR 和 RT-qPCR 上
●　约 1 h 可完成 RNA 的抽提

内容和保存条件

冷藏保存
请在购买日起６个月内使用
本品可在室温下运输。产品到达后，在２~１０℃条件下保存即可正常使用

产品安全数据图表（MSDS）
ISOGEN II MSDS

使用手册
ISOGEN II 手册

◆案例・应用

操作流程

◆使用例子

Data 1 抽提得到的 RNA 电泳

根据 ISOGEN 和 ISOGEN II 的方案抽提 RNA，进行电泳

ISOGEN II 能抽提和 ISOGEN 同等的总 RNA

ISOGEN II 能对 200 base 以上的高分子 RNA 和 10~200 base 的小 RNA 进行分离

Data 2 ISOGEN 和 ISOGEN II 抽提的总 RNA 用“3D-Gene”Human miRNA Oligo chip（东来株式会社）分析。

ISOGEN II 比 ISOGEN 能更完整地抽提 miRNA

Data 3 RT-PCR

用 ISOGEN 和 ISOGEN II 从 HeLa 细胞中提取出 RNA 并定性，再用 PT-PCR 检测出 β-Actin 基因。同时进行没有经过 RT 反应的对照实验。

1：模板RNA量 500 ng
2：模板RNA量 100 ng
3：模板RNA量 20 mg
M：Gene Ladder 100

实验证明以ISOGEN II抽提的RNA与以ISOGEN抽提的RNA相比，DNA残留更少。

Data 4 RNA 提取量的参考值

分别用 “大 RNA 的提取”和“总 RNA 的提取”方案得到的 RNA 的提取量的参考值如下：

◆注意事项

●　本品是实验研究用的试剂，不能作为医药品或其他目的使用。另外，如果您对试剂的基本的知识不了解。请不要使用。

●　因为 ISOGEN II 是医药用外有害物质（苯酚制剂），所以请小心操作。
●　使用时请穿着适当的防护设备（手套、眼镜等）。
●　请不要吸入蒸汽，进行充分的通风。
●　如果接触皮肤或眼睛，请用大量的水冲洗至少15分钟，并前往医院就诊。
●　本品的操作请按照手册记载的内容进行
●　对于和手册记载内容不同的操作带来的事故，日本基因不负任何责任。

ISOGENII 使用说明书

参考文献