BioThema*专注于萤火虫荧光素酶反应的分析应用，无论是检测细胞，测量酶活性还是其他东西。在该反应中，用ATP（三磷酸腺苷）活化虫荧光素，然后氧化成氧化虫荧光素和CO 2。氧化虫荧光素以激发态形成，并在进入其基态时发光。通常在所谓的发光计中测量光。
ATP +虫荧光素+ O 2 –荧光素酶 – > AMP +焦磷酸+氧化虫荧光素+ CO 2 +光
在ATP的测定中，光发射可以基本上恒定或快速衰减。因此，基于萤火虫荧光素酶反应，存在稳定的光和闪光型ATP试剂。在荧光素酶水平低的情况下，每分钟消耗的ATP比例可以忽略不计，然后光可以几乎恒定但也很低。在高水平的荧光素酶下，ATP被消耗是不可避免的，导致光迅速减少，但初峰值光很高。实际上，峰高和衰减率都与荧光素酶活性成比例。BioThema开发了三种ATP试剂
BioThema 266-111说明书
SKU：266-111
Intracellular ATP Kit HS
细菌细胞内ATP的测定
该试剂盒的灵敏度允许在各种情况下测定低ATP水平，条件是降解体细胞中的ATP并不重要：
1。液体的细菌控制（例如饮用水，工艺用水，饮料和啤酒）
2。药品和化妆品
3.细胞与表面的粘合
4.洗衣的质量保证
5.细菌生长。
6.对细菌的抗生素作用
应用
该试剂盒用于测定活细胞中的细胞内ATP（三磷酸腺苷）。样品中的细胞外ATP被酶促降解。如果样品还含有体细胞并且目的是确定微生物ATP，我们建议使用266-112微生物ATP试剂盒，包括用于大多数动物细胞的细胞裂解试剂。如果样品中只有一种类型的细胞且没有细胞外ATP，则可以使用266-311 ATP生物质试剂盒。所有活细胞都含有ATP，它在不同细胞过程之间起着能量货币的作用。当细胞死于自然原因时，ATP通常会降解。在所有类型的细胞中，小心地将ATP的细胞内浓度调节至相似水平。因此，ATP是细胞内总体积的良好估计。大多数细菌细胞含有大约。2×10-18 mol ATP /细胞，而大多数真核细胞由于其较大的尺寸，含有10-15 mol或更多的ATP。ATP生物质试剂盒HS，细胞内ATP试剂盒HS和微生物ATP试剂盒HS含有具有高荧光素酶活性的ATP试剂HS（高灵敏度）。ATP试剂HS中的荧光素酶活性实际上非常高，如果在重构过程中受到污染，它将每38分钟将ATP背景降低一个数量级。混合样品和ATP试剂HS后，光强度衰减约。每分钟6％。这足够慢以允许手动混合，并且可以使用没有试剂分配器的管发光计。试剂的检出限为10×10 -18使用灵敏的光度计测量ATP。这相当于5个细菌细胞。我们必须在这里区分细菌细胞和CFU，因为一个CFU可能由几个细胞组成。如果检测限不足，则可以通过微滤浓缩样品，该过程也将除去大部分细胞外ATP。
仪器
可以使用任何管或微孔板发光计。应该注意的是，管发光计比微孔板发光计灵敏度大约一个数量级。如果使用微孔板发光计，它应该至少有两个分配器，并且应该能够混合微孔板。
分析程序
详细描述的程序可在“使用说明”中找到，该说明书随每个套件一起提供。
产品特性
该试剂盒包含用于150-375测定的试剂（每个小瓶ATP试剂HS足以在管发光计中进行25次测定，在微孔板发光计中进行62.5次测定）。
检测限：
使用灵敏的发光计1，试剂的检出限为10×10-18 mol ATP 。
参考
1 Lundin，A。（2000）在生物量，酶和代谢物的ATP相关测定中使用萤火虫荧光素酶。方法Enzymol。305,346-370。
2 Lundin，A。（1999）ATP检测生物污染。在“30th R3-Nordic Contamination Control Symposium”（Eds.G.Wirtanen，S.Salo and A. Mikkola），VTT，Espoo，Finland，pp.337-352。
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