BioThema*专注于萤火虫荧光素酶反应的分析应用，无论是检测细胞，测量酶活性还是其他东西。在该反应中，用ATP（三磷酸腺苷）活化虫荧光素，然后氧化成氧化虫荧光素和CO 2。氧化虫荧光素以激发态形成，并在进入其基态时发光。通常在所谓的发光计中测量光。

ATP +虫荧光素+ O 2 –荧光素酶 – > AMP +焦磷酸+氧化虫荧光素+ CO 2 +光

在ATP的测定中，光发射可以基本上恒定或快速衰减。因此，基于萤火虫荧光素酶反应，存在稳定的光和闪光型ATP试剂。在荧光素酶水平低的情况下，每分钟消耗的ATP比例可以忽略不计，然后光可以几乎恒定但也很低。在高水平的荧光素酶下，ATP被消耗是不可避免的，导致光迅速减少，但初峰值光很高。实际上，峰高和衰减率都与荧光素酶活性成比例。BioThema开发了三种ATP试剂

BioThema 266-111说明书 

SKU：266-111

Intracellular ATP Kit HS

细菌细胞内ATP的测定

该试剂盒的灵敏度允许在各种情况下测定低ATP水平，条件是降解体细胞中的ATP并不重要：
1。液体的细菌控制（例如饮用水，工艺用水，饮料和啤酒）
2。药品和化妆品
3.细胞与表面的粘合
4.洗衣的质量保证
5.细菌生长。
6.对细菌的抗生素作用

应用

该试剂盒用于测定活细胞中的细胞内ATP（三磷酸腺苷）。样品中的细胞外ATP被酶促降解。如果样品还含有体细胞并且目的是确定微生物ATP，我们建议使用266-112微生物ATP试剂盒，包括用于大多数动物细胞的细胞裂解试剂。如果样品中只有一种类型的细胞且没有细胞外ATP，则可以使用266-311 ATP生物质试剂盒。所有活细胞都含有ATP，它在不同细胞过程之间起着能量货币的作用。当细胞死于自然原因时，ATP通常会降解。在所有类型的细胞中，小心地将ATP的细胞内浓度调节至相似水平。因此，ATP是细胞内总体积的良好估计。大多数细菌细胞含有大约。2×10-18 mol ATP /细胞，而大多数真核细胞由于其较大的尺寸，含有10-15 mol或更多的ATP。ATP生物质试剂盒HS，细胞内ATP试剂盒HS和微生物ATP试剂盒HS含有具有高荧光素酶活性的ATP试剂HS（高灵敏度）。ATP试剂HS中的荧光素酶活性实际上非常高，如果在重构过程中受到污染，它将每38分钟将ATP背景降低一个数量级。混合样品和ATP试剂HS后，光强度衰减约。每分钟6％。这足够慢以允许手动混合，并且可以使用没有试剂分配器的管发光计。试剂的检出限为10×10 -18使用灵敏的光度计测量ATP。这相当于5个细菌细胞。我们必须在这里区分细菌细胞和CFU，因为一个CFU可能由几个细胞组成。如果检测限不足，则可以通过微滤浓缩样品，该过程也将除去大部分细胞外ATP。

仪器

可以使用任何管或微孔板发光计。应该注意的是，管发光计比微孔板发光计灵敏度大约一个数量级。如果使用微孔板发光计，它应该至少有两个分配器，并且应该能够混合微孔板。

分析程序

详细描述的程序可在“使用说明”中找到，该说明书随每个套件一起提供。

产品特性

该试剂盒包含用于150-375测定的试剂（每个小瓶ATP试剂HS足以在管发光计中进行25次测定，在微孔板发光计中进行62.5次测定）。

检测限：

使用灵敏的发光计1，试剂的检出限为10×10-18 mol ATP 。

参考

1 Lundin，A。（2000）在生物量，酶和代谢物的ATP相关测定中使用萤火虫荧光素酶。方法Enzymol。305,346-370。
2 Lundin，A。（1999）ATP检测生物污染。在“30th R3-Nordic Contamination Control Symposium”（Eds.G.Wirtanen，S.Salo and A. Mikkola），VTT，Espoo，Finland，pp.337-352。

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上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1：强大的进口辐射能力，血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2：产品种类齐全，经营超过700多品牌，基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3：提供加急服务，货品一般1-2周到货。

4：富有竞争良好的信誉，大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、国药、fisher等知药企。

6：我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,BioThema,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7：我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批发，欢迎合作。

BioThema*专注于萤火虫荧光素酶反应的分析应用，无论是检测细胞，测量酶活性还是其他东西。在该反应中，用ATP（三磷酸腺苷）活化虫荧光素，然后氧化成氧化虫荧光素和CO 2。氧化虫荧光素以激发态形成，并在进入其基态时发光。通常在所谓的发光计中测量光。

ATP +虫荧光素+ O 2 –荧光素酶 – > AMP +焦磷酸+氧化虫荧光素+ CO 2 +光

在ATP的测定中，光发射可以基本上恒定或快速衰减。因此，基于萤火虫荧光素酶反应，存在稳定的光和闪光型ATP试剂。在荧光素酶水平低的情况下，每分钟消耗的ATP比例可以忽略不计，然后光可以几乎恒定但也很低。在高水平的荧光素酶下，ATP被消耗是不可避免的，导致光迅速减少，但初峰值光很高。实际上，峰高和衰减率都与荧光素酶活性成比例。BioThema开发了三种ATP试剂

BioThema 28-101说明书

ATP Biomass Kit HS

ATP生物质试剂盒HS

用于测定样品中ATP的总量（细胞外和细胞内）量。

ATP生物质试剂盒适用于几乎所有类型的样品。

该试剂盒的灵敏度允许在各种情况下测定低ATP水平：
1液体（如饮用水，工艺用水，环境样品，饮料和啤酒）
2药品和化妆品
3细胞与表面的粘附（例如生物相容性研究）
4质量洗衣保证
5细菌生长。
6对细菌的抗生素作用

SKU：266-311

应用

该试剂盒用于测定含有活细胞的样品中的总ATP（三磷酸腺苷）。如果目的是确定细胞内ATP，则应考虑使用266-111细胞内ATP试剂盒HS或266-112微生物ATP试剂盒HS。这些试剂盒包括用于降解细胞外ATP的ATP消除试剂，后者试剂盒还包括用于裂解大多数动物细胞的细胞裂解试剂。所有活细胞都含有ATP，它在不同细胞过程之间起着能量货币的作用。当细胞死于自然原因时，ATP通常会降解。在所有类型的细胞中，小心地将ATP的细胞内浓度调节至相似水平。因此，ATP是细胞内总体积的良好估计。大多数细菌细胞含有大约。2×10 -18每个细胞的摩尔ATP，而大多数真核细胞由于其较大的尺寸，含有10-15摩尔ATP或更多。ATP生物质试剂盒HS，细胞内ATP试剂盒HS和微生物ATP试剂盒HS含有具有高荧光素酶活性的ATP试剂HS（高灵敏度）。ATP试剂HS中的荧光素酶活性实际上非常高，如果在重构过程中受到污染，它将每38分钟将ATP背景降低一个数量级。混合样品和ATP试剂HS后，光强度衰减约。每分钟6％。这足够慢以允许手动混合，并且可以使用没有试剂分配器的管发光计。试剂的检出限为10×10 -18使用灵敏的光度计测量ATP。这相当于5个细菌细胞。我们必须在这里区分细菌细胞和CFU，因为一个CFU可能由几个细胞组成。如果检测限不足，则可以通过微滤浓缩样品，该过程也将除去大部分细胞外ATP。

仪器

任何管或微孔板发光计。应该注意的是，管发光计的灵敏度大约一个数量级。如果使用微孔板发光计，它应该至少有两个分配器，并且应该能够混合微孔板。

分析程序

详细描述的程序可在“使用说明”中找到，该说明书随每个套件一起提供。

产品特性

该试剂盒包含用于150-375测定的试剂（每个小瓶ATP试剂HS足以在管发光计中进行25次测定，在微孔板发光计中进行62.5次测定）。

检测限：

使用灵敏的发光计，试剂的检出限为10×10 -18 mol ATP。这相当于5个细菌细胞。

参考

1 Lundin，A。（2000）在生物量，酶和代谢物的ATP相关测定中使用萤火虫荧光素酶。方法Enzymol。305,346-370。

BioThema2019年价格表

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1：强大的进口辐射能力，血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2：产品种类齐全，经营超过700多品牌，基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3：提供加急服务，货品一般1-2周到货。

4：富有竞争良好的信誉，大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、国药、fisher等知药企。

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BioThema*专注于萤火虫荧光素酶反应的分析应用，无论是检测细胞，测量酶活性还是其他东西。在该反应中，用ATP（三磷酸腺苷）活化虫荧光素，然后氧化成氧化虫荧光素和CO 2。氧化虫荧光素以激发态形成，并在进入其基态时发光。通常在所谓的发光计中测量光。

ATP +虫荧光素+ O 2 –荧光素酶 – > AMP +焦磷酸+氧化虫荧光素+ CO 2 +光

在ATP的测定中，光发射可以基本上恒定或快速衰减。因此，基于萤火虫荧光素酶反应，存在稳定的光和闪光型ATP试剂。在荧光素酶水平低的情况下，每分钟消耗的ATP比例可以忽略不计，然后光可以几乎恒定但也很低。在高水平的荧光素酶下，ATP被消耗是不可避免的，导致光迅速减少，但初峰值光很高。实际上，峰高和衰减率都与荧光素酶活性成比例。BioThema开发了三种ATP试剂

BioThema2019年价格表

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1：强大的进口辐射能力，血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2：产品种类齐全，经营超过700多品牌，基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3：提供加急服务，货品一般1-2周到货。

4：富有竞争良好的信誉，大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、国药、fisher等知药企。

6：我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,BioThema,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7：我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批发，欢迎合作。

BioThema*专注于萤火虫荧光素酶反应的分析应用，无论是检测细胞，测量酶活性还是其他东西。在该反应中，用ATP（三磷酸腺苷）活化虫荧光素，然后氧化成氧化虫荧光素和CO 2。氧化虫荧光素以激发态形成，并在进入其基态时发光。通常在所谓的发光计中测量光。

ATP +虫荧光素+ O 2 –荧光素酶 – > AMP +焦磷酸+氧化虫荧光素+ CO 2 +光

在ATP的测定中，光发射可以基本上恒定或快速衰减。因此，基于萤火虫荧光素酶反应，存在稳定的光和闪光型ATP试剂。在荧光素酶水平低的情况下，每分钟消耗的ATP比例可以忽略不计，然后光可以几乎恒定但也很低。在高水平的荧光素酶下，ATP被消耗是不可避免的，导致光迅速减少，但初峰值光很高。实际上，峰高和衰减率都与荧光素酶活性成比例。BioThema开发了三种ATP试剂

BioThema 266-112说明书

Microbial ATP Kit HS微生物ATP试剂盒HS

用于测定哺乳动物细胞中细菌细胞中的细胞内ATP

该试剂盒的灵敏度可以在各种情况下测定低ATP水平：
1。液体的细菌控制（如饮用水，工艺用水，饮料和啤酒）
2。药品和化妆品
3.细胞与表面的粘附
4.质量保证洗衣
5.细菌生长。
6.对细菌的抗生素作用

SKU：266-112

应用

该试剂盒用于测定微生物细胞中的细胞内ATP（三磷酸腺苷）。大多数类型的体细胞，例如血细胞用中性洗涤剂裂解。样品中释放的ATP和其他形式的细胞外ATP被酶促降解。如果目的是确定细菌和体细胞中的细胞内ATP，我们建议不含裂解剂的266-111细胞内ATP试剂盒。所有活细胞都含有ATP，它在不同细胞过程之间起着能量货币的作用。当细胞死于自然原因时，ATP通常会降解。在所有类型的细胞中，小心地将ATP的细胞内浓度调节至相似水平。因此，ATP是细胞内总体积的良好估计。大多数细菌细胞含有大约。2×10 -18每个细胞的摩尔ATP，而大多数真核细胞由于其较大的尺寸，含有10-15摩尔ATP或更多。ATP生物质试剂盒HS，细胞内ATP试剂盒HS和微生物ATP试剂盒HS含有具有高荧光素酶活性的ATP试剂HS（高灵敏度）。ATP试剂HS中的荧光素酶活性实际上非常高，如果在重构过程中受到污染，它将每38分钟将ATP背景降低一个数量级。混合样品和ATP试剂HS后，光强度衰减约。每分钟6％。这足够慢以允许手动混合，并且可以使用没有试剂分配器的管发光计。试剂的检出限为10×10 -18使用灵敏的光度计测量ATP。这相当于5个细菌细胞。我们必须在这里区分细菌细胞和CFU，因为一个CFU可能由几个细胞组成。如果检测限不充分，可以通过微滤浓缩样品，这一过程也可以去除细胞外ATP（请联系BioThema获取更多信息）。

仪器

可以使用任何管发光计。应该注意的是，管发光计比微孔板发光计灵敏度大约一个数量级。如果使用微孔板发光计，它应该至少有两个分配器，并且应该能够混合微孔板（参见测定程序）。

分析程序

详细描述的程序可在“使用说明”中找到，该说明书随每个套件一起提供。

产品特性

该试剂盒包含用于150-375测定的试剂（每个小瓶ATP试剂HS足以在管发光计中进行25次测定，在微孔板发光计中进行62.5次测定）。

检测限：

使用灵敏的发光计，试剂的检出限为10×10 -18 mol ATP。

参考

1 Lundin，A。（2000）在生物量，酶和代谢物的ATP相关测定中使用萤火虫荧光素酶。方法Enzymol。305,346-370。
2 Lundin，A。（1999）ATP检测生物污染。在“30th R3-Nordic Contamination Control Symposium”（Eds.G.Wirtanen，S.Salo and A. Mikkola），VTT，Espoo，Finland，pp.337-352。

BioThema中国代理,BioThema上海代理，BioThema北京代理，BioThema广东代理，BioThema江苏代理BioThema湖北代理,BioThema天津代理,BioThema黑龙江代理,BioThema湖南代理BioThema内蒙古代理,BioThema吉林代理,BioThema福建代理,BioThema江苏代理,BioThema浙江代理,BioThema四川代理,BioThema代理，

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1：强大的进口辐射能力，血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2：产品种类齐全，经营超过700多品牌，基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3：提供加急服务，货品一般1-2周到货。

4：富有竞争良好的信誉，大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、国药、fisher等知药企。

6：我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,BioThema,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

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发光法支原体检测试剂盒说明书

产品详情

产品描述

《发光法支原体检测试剂盒》通过检测支原体含有的特异性 ATP 合成相关酶的活性以达到检测体外培养的哺乳动物细胞是否被支原体污染的目的。

在支原体裂解后，该支原体特异性的酶，在底物存在下，具有将 ADP 转化成 ATP 的功能。由于荧光素酶（Luciferase）催化底物荧光素（Luciferin）产生光的反应需要 ATP 的参与，支原体特异性酶催化产生的 ATP 含量，可以通过该反应转化成生物发光（Bioluminescence）信号，该信号可以使用专门的发光检测仪（Luminometer）或具有发光检测功能的多功能酶标仪进行检测，发光的强度与 ATP 的含量成正比。

具体的反应如下：通过比较细胞培养上清和未用于细胞培养而成分相同的培养液二者的支原体特异性酶的含量，即可知道培养的细胞是否被支原体污染。

产品特点

《发光法支原体检测试剂盒》具有如下显著的优点：

1. 检测时间短。整个检测过程只需 30 分钟左右。

2. 《发光法支原体检测试剂盒》检测的是活支原体，只有样品中存在活的支原体，才会生产阳性结果，可以区分支原体的死活。而《一步法恒温支原体检测试剂盒》、《PCR法支原体检测试剂盒》和《探针法支原体检测试剂盒》都是检测支原体的DNA，不论支原体的死活，样品中只要有支原体DNA的存在，就会生产阳性结果，所以无法区分支原体的死活。细胞培养中，最关心的是细胞培养液上清或者血清、胰酶等成分中，是否有活的支原体。而如果仅有死的支原体或者一些残存的支原体 DNA，是无关紧要的。

3. 不存在假阳性。由于《一步法恒温支原体检测试剂盒》、《PCR法支原体检测试剂盒》和《探针法支原体检测试剂盒》都需要对支原体 DNA 进行大量的扩增，检测过程中，只要有微量的支原体 DNA 或者扩增产物的污染，就会出现假阳性。而《发光法支原体检测试剂盒》只检测活的支原体，不存在扩增产物污染样品的问题。

4. 不存在因反应被抑制导致的假阴性。由于细胞培养数天后，培养液中经常含有严重抑制PCR扩增的代谢物， 所以使用《PCR 法支原体检测试剂盒》经常会出现假阴性的问题。该问题在《发光法支原体检测试剂盒》不存在。

5. 《发光法支原体检测试剂盒》对支原体的识别率高：由于本试剂盒依赖的支原体特异性酶普遍存在，其具有广谱的识别能力。

产品组分

（1） 支原体检测溶液：5.5 mL

（2） 试剂 A(已冻干)：2.5 mL（50 次检测）

（3） 试剂 B(已冻干): 2.5 mL（50 次检测）

使用方法

使用方法

1. 检测试剂的分装和保存

收到的产品为冻干品，溶解前，请放-80 ℃冰箱低温保存。第一次使用前，在冰上操作，分别用 2.5 mL 支原体检测溶液溶解试剂 A 和试剂 B（注意：因为试剂 A 和试剂 B 的离心管容量不足 2.5 mL，可以分别先用 1 mL 支原体检测溶液将冻干的试剂 A 和试剂 B 溶解后，转移到一个 5 mL 或 10 mL 的离心管中，再各补加 1.5 mL 支原体检测溶液）, 按每管 50 μL 分别分装到 50 个 1.5 mL 离心管中，立即放-80 ℃冰箱低温保存。

2. 阴性对照的设置

本试剂盒每次检测都必须设置阴性对照。阴性对照必须使用配制完后放于 4℃冰箱，未用于细胞培养但成分相同的培养液，包括其中的血清、抗生素等含量也必须相同。特别是其中的血清含量和批次，对发光的本底值影响很大，作为阴性对照的培养液，其中添加的血清，必须与用于细胞培养的血清批次相同且含量相同。例如：如果用于细胞培养的培养液为含有 10%的胎牛血清的高糖 DMEM，那么阴性对照也应该使用含有相同批次的 10%的胎牛血清的高糖 DMEM。如果用于细胞培养的培养液为无血清培养液，那么阴性对照也应该使用无

血清但成分相同的培养液。

上述阴性对照的选取是按照严格的方式进行的。如果确实没有成分相同的培养液，也可以使用成分接近的培养液作为阴性对照。如果有些样品实在没有合适的阴性对照或者不知道样品原来的培养基组成，可以尝试使用含10%血清的 DMEM 培养基作为阴性对照。

3. 阳性对照的设置

如果您实验室拥有经其他支原体检测方法（比如本公司的《一步法恒温支原体检测试剂盒》或者《PCR 法支原体检测试剂盒》和《探针法支原体检测试剂盒》等）检测为阳性的细胞系，其培养 3 天后的上清即可以直接按照后文的样品准备方法，自己制备阳性对照。

如果您没有上述阳性样品，那么阳性对照也可以从我们公司单独购买（货号：LPC10）。如果第一次使用《发光法支原体检测试剂盒》，建议购买一支本公司的《发光法支原体检测试剂盒阳性对照》。

4. 待测样品的准备

为了准确判断细胞是否有支原体的污染，待测的细胞培养液样品最好来源于至少培养 2-3 天且汇合度在 70-90% 左右的细胞培养液上清（贴壁细胞）。悬浮培养的细胞也需要在换液传代后，至少让细胞生长 2-3 天再取培养液进行检测。具体操作如下（请严格按照相应的体积进行操作）：

（1）根据浓缩倍数，可以取 180-1500 μL 上述待测样品到 1.5 mL 离心管内，在普通台式离心机上 1000 rpm (大约 150 g)低速离心 5 minutes，将离心后的上清转移到另一个离心管内（注意：转移离心上清时，请保留底部 60 μL 左右的液体，以防止将底部细胞沉淀吸走！），丢弃含细胞沉淀的原有离心管。

（2）将含有上清的新的 1.5 mL 离心管，在普通台式离心机上 16000 g （大约 13000 rpm）高速离心 5 分钟， 沿离心管内壁离心时的内侧面将离心后的上清小心缓慢全部吸走并丢弃（注意：勿让吸头碰到离心管内壁的底部 外侧，因为底部外侧可能含有支原体的沉淀！）。往离心管内，加入 120 μL 作为阴性对照的培养液。

（3）将上述经过离心清洗一次的样品， 再次在普通台式离心机上 16000 g （大约 13000 rpm）高速离心 5 分钟【离心时注意保持离心管放置的方向与上述步骤（2）相同】，同样小心吸走 115 μL 离心后的上清并丢弃（注意：同样勿让吸头碰到离心管内壁的底部外侧。留下大约 5 μL 培养液的目的也是为了防止吸头碰到离心管底部外侧而将可能含有支原体的沉淀吸走）。往离心管内，加入 115 μL 作为阴性对照的培养液（此时，总体积仍然为 120 μL）。

（4）将上述经过离心清洗两次的样品，用移液枪上下吹吸 10-20 次，将可能含有支原体的沉淀吹打均匀。至此，该样品方可用于后续的支原体检测（够两次检测使用）。

（5）吸取 50 μL 阴性对照、阳性对照或者已经经过低速离心去除细胞和经过高速离心替换成阴性对照的培养液的待测样品，放入黑色（优先选择）或者白色不透明的 96 孔板内，加入 50 μL 冰上放置的试剂 A，室温反应 15 分钟。

（6）室温反应 15 分钟后，加入 50 μL 冰上放置的试剂 B，无需等待，立即在具有发光检测功能的多功能酶标仪或者单独的发光检测仪（Luminometer）上，以仪器默认的萤火虫荧光素酶（Luciferase）的发光检测参数进行发光值的检测，5 分钟内，连续测 5 次阴性对照和待测样品的发光值，计算各自的平均值。

注意事项

1、 本试剂盒只在 96 孔板进行过测试。因为发光值会随时间略有变化，如果使用单管的发光检测仪，尽量保证阴性对照和待测样品加入试剂 A 后的反应时间和加入试剂 B 后到发光值检测的反应时间相同。

2、 问：如果配制完后放于 4℃冰箱未用于细胞培养且成分相同的培养液本身有支原体污染（比如加入的血清本身含支原体），是否仍然可以用作阴性对照？

答：可以。因为：即使作为阴性对照的培养液本身有支原体污染，其中的含量也是极其微量的。而待测样品是经过培养 3 天以上的，其支原体在这 3 天培养过程中，会大量繁殖，用《发光法支原体检测试剂盒》检测的发光值，肯定比阴性对照的发光值高得多。

叶绿体ATP合酶相关抗体（植物抗体专家PhytoAB）

引自-植物科学z前沿

ATP合酶在光合作用过程中通过电子传递链释放的能量，将质子穿过膜至ATP合成。其中ATP合酶包括9种蛋白：AtpA, AtpB, AtpC, AtpD, AtpE, AtpI, AtpF, AtpG, AtpH。它由两个复合物组成：CF1, CF0。其中，CF1包含α, β, γ, δ, ε五个亚基，分别由atpA,atpB, atpC, atpD, atpE基因编码；CF0包含IV/a, I/b, II/b’, III/c 四个亚基，分别由atpI, atpF, atpG, atpH基因编码。

在高等植物叶绿体中，atp基因定位于质体基因组和核基因组，并且被分为两个不同的clusters，分别是：the large atp operons 和 the small atp operons。

一、针对AtpA, AtpB, AtpC蛋白研究，我们研发了以下植物抗体：

注：Western Blot结果如上。PHY0010为AtpA抗体，免疫原为拟南芥AtpA (ATCG00120)靠近C端的多肽序列。上样蛋白：拟南芥类囊体膜蛋白；1-3泳道上样量分别是0.1 μg, 0.25 μg, 0.5 μg，用15% SDS-Urea-PAGE电泳。

PHY0311为AtpA抗体，免疫原为拟南芥AtpA (ATCG00120)全长的重组蛋白。上样蛋白，上样量以及PAGE胶与PHY0010相同。

注：Western Blot结果如上。PHY0011A为AtpB抗体，免疫原为拟南芥AtpB (ATCG00480)靠近N端的多肽序列。上样蛋白：拟南芥类囊体膜蛋白；1-3泳道上样量分别是0.25μg, 0.5μg, 0.75μg，用15% SDS-Urea-PAGE电泳。

PHY0312为AtpB抗体，免疫原为拟南芥AtpB (ATCG00480)全长的重组蛋白。上样蛋白：拟南芥类囊体膜蛋白；1-3泳道上样量分别是0.1μg, 0.25μg, 0.5μg；用15% SDS-Urea-PAGE电泳。

注：Western Blot结果如上。PHY0161为AtpC抗体，免疫原为拟南芥AtpC1 (AT4G04640)靠近N端的14个氨基酸多肽，此序列与AtpC2 (AT1G15700)同源性为93%。上样蛋白：1-3泳道为野生型拟南芥类囊体膜蛋白，4泳道为拟南芥突变体的类囊体膜蛋白；1-3泳道上样量分别是0.1μg, 0.25μg, 0.5μg，4泳道上样量为0.5ug，用15% SDS-Urea-PAGE电泳。

PHY0359为AtpC2抗体，免疫原为拟南芥AtpC2 (AT1G15700)靠近C端的多肽序列。上样蛋白：拟南芥类囊体膜蛋白；1-3泳道上样量分别是0.1μg, 0.25μg, 0.5μg；用15% SDS-Urea-PAGE电泳。

二、针对AtpD, AtpE, AtpG, AtpF, AtpH, AtpI蛋白研究，我们研发了以下的植物抗体：

注：Western Blot结果如上。PHY0314为AtpD抗体，免疫原为拟南芥AtpD (AT4G09650)全长的重组蛋白。上样蛋白：拟南芥类囊体膜蛋白；1-3泳道上样量分别是0.1μg, 0.25μg, 0.5μg，用15% SDS-Urea-PAGE电泳。

PHY0315为AtpE抗体，免疫原为免疫原为拟南芥AtpE (ATCG00470)全长的重组蛋白。上样蛋白：拟南芥类囊体膜蛋白；1-3泳道上样量分别是0.5μg, 1.25μg, 2μg；用15% SDS-Urea-PAGE电泳。

PHY0170S为AtpG抗体，免疫原为拟南芥AtpG (AT4G32260)靠近N端的多肽序列。上样蛋白：1-3泳道为野生型拟南芥类囊体膜蛋白，4泳道为拟南芥突变体的类囊体膜蛋白；1-3泳道上样量分别是0.1μg, 0.25μg, 0.5μg，4泳道上样量为0.5ug；用15% SDS-Urea-PAGE电泳。

注：Western Blot结果如上。PHY0316为AtpF抗体，免疫原为拟南芥AtpF (ATCG00130)全长的重组蛋白。上样蛋白：拟南芥类囊体膜蛋白；1-3泳道上样量分别是0.1 μg, 0.25 μg, 0.5 μg，用15% SDS-Urea-PAGE电泳。

PHY0114A为AtpH抗体，免疫原为拟南芥AtpH (ATCG00140)的多肽序列。上样蛋白：拟南芥类囊体膜蛋白；1-3泳道上样量分别是0.25 μg, 0.5 μg, 1 μg，用Tricine-SDS-PAGE电泳。