jembio KlenTaq1说明书

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jembio KlenTaq1是一种热稳定性 DNA 聚合酶，从该基因的 5' 缺失表达，编码水生栖热菌 DNA 聚合酶，留下高活性和更热稳定的 DNA 聚合酶活性。在反应缓冲液 PC2 中反复暴露于 980°C 似乎不会降低酶活性。即使在暴露于 990 C 后仍保持显着活性。全长酶不能耐受这些处理。               

jembio KlenTaq1    ™ 酶缺少野生型全长 Taq DNA 聚合酶的 N 端部分。这部分蛋白质与大肠杆菌 DNA 聚合酶 1 的 5' – 外切核酸酶区域同源。  因此， KlenTaq1 ™ 与 Hoffman LaRoche 的 Stoffel 片段相似但又不同。               

对于不含甘油的KlenTaq1 （Cat# 1001 NGKT）：将酶和缓冲液储存在 4°C。储存缓冲液为 50 mM 硫酸铵、20 mM Tris-HCl pH 8.55、0.1 mM EDTA、10 mM 巯基乙醇、无明胶和 0.5% Thesit。               

对于50% 甘油中的KlenTaq1 （货号 1001）：将酶储存在 -200 C，缓冲液在 40 C。储存缓冲液中的甘油可防止在 -20°C 下冻结，但 Thesit 在此温度下会导致一些增稠。它是可选的，但建议在分配前在冰上加热至 0°C。对于长期储存，可以使用 -70°C 或 -80°C，但我们建议不要将酶冷冻一次以上。重新冷冻和解冻会导致酶的活性降解。储存缓冲液为 50% 甘油（v/v；63% w/v）、50 mM 硫酸铵、20 mM Tris-HCl pH 8.55、0.1 mM EDTA、10 mM 巯基乙醇、无明胶和 0.5% Thesit。                

 浓度：5   KlenTaq1™单位（在 72°C 下 30 分钟内掺入 60 nmole）。活化的鲑鱼精子DNA是模板；PC2（见下文）是缓冲区。NB 这些单位比标准单位大 6 倍。在标准单位（10 nmole/30 分钟）中，这里的酶浓度约为 30 单位/ml。                   

尽管该酶在各种条件下都能很好地发挥作用，但推荐的反应缓冲液 PC2 为：50 mM Tris-HCl pH 9.1、16 mM 硫酸铵、3.5 mM MgCl2 和 150 mg/ml BSA（按订单提供） . 请注意，与热稳定 DNA 聚合酶的其他缓冲液相比，不含 KC1 和明胶。dNTP 浓度可以从每个 50 µM 到每个 1.2 mM 不等，但通常使用 200 µM。如果 DNA 掺入量超过 500 bp，您将需要比 Taq 蛋白更多的KlenTaq1™蛋白。KlenTaq1™ 以 25-30 u/µl 的浓度运输，因此如果使用与全长 Taq DNA 聚合酶相同的数量（罗氏推荐），它可以很容易地掺入 2000 bp。

                    1 DNA 掺入单位 = 10 nmoles / 30 min ='标准单位'。罗氏的酶每微升含有 5 个“标准单位”。KlenTaq1™每微升含有 25-30 个“标准单位”。                    

罗氏推荐每 100 微升反应 0.5 微升；也就是说，1微升将催化2个反应。进行反应所需的KlenTaq1™的量取决于掺入的长度。对于KlenTaq1™ ，在 100 微升反应中，1 微升将催化 15-20 个 500 bp 的反应和 8-10 个 1 kb 的反应和 3-5 个 2kb 模板 DNA 的反应。由于过量的 KlenTaq1™ 是无害的，我们保守地建议每次反应 0.50 微升，以确保 2.5 kb 以内的所有内容都能正常工作。这就是我们检查和滴定酶的方式。

货号：1001