ChromoTek产品

发表于2024-03-13由上海金畔生物科技有限公司

德国ChromoTek公司成立于2008年，致力于细胞生物学和蛋白质组学的研发与研究，公司拥有强大的研发团队，有先进的生物制剂，主要主要使命是花费较少的时间和成本，使客户获得得高质量的实验数据。

ChromoTek产品分类：

一、Nano-Trap系列；以产品结合物为标准，包含磁珠系列和琼脂糖珠子系列，还有96板系列；抗体结合物包括GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap

二、 Booster系列；含GFP booster RFP booster；

三、可用于HCA 实验的Chromobodies(质粒或细胞系形式)；

四、高品质抗体（标签蛋白抗体和普通抗体）；

产品一：

GFP-Trap —— 值得信赖的科研工具：

Nano-Trap：与agarose beads或者magnetic beads结合，在免疫沉淀或蛋白质相互作用的实验中，可抓取或纯化GFP或RPF融合蛋白。（优点：三好三多）

优点一：抗体好———Nano-Traps采用的抗体是基于alpaca的单域抗体片段（VHHS）；具有分子量小（15Kda）、稳定（70℃仍保持稳定），高亲和力（高特异性性结合GFP蛋白），无普通抗体轻链与重链污染等一系列优点等优点；GFP抗体可以特异性结合绿色荧光蛋白的衍生物，如eGFP, wtGFP, GFP S65T，TagGFP，不与RFP衍生蛋白结合。

优点二：形式好——-抗体结合了agarose beads（琼脂糖珠子）或者magnetic beads（磁珠），在IP实验，COIP ，pulldown，Chip实验中可以直接取代特异性GFP 抗体+proteinA/G 琼脂糖珠子；

优点三：效果好——孵化时间短（只需5-30min），能够更好与结合，从细胞提取物或细胞器中定量分离GFP融合蛋白及结合因子

优点四：实验应用多：被广泛用于免疫沉淀、质谱分析、酶活测定、生物大分子相互作用/亲和力实验、染色质免疫沉淀（ChIP）、蛋白质相互作用分析；

优点五：产品多：有GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap NEW!更多Trap 新品，给您提供更多的科研工具！GFP，RFP，GST Trap作为标签蛋白的特异性纯化方法，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap 是用于纯化目的蛋白。

优点六：样品类型多：mammalian cells（哺乳细胞）；tissues/ organisms（组织/器官样本）；bacteria（细菌）；yeast （酵母）；plants （植物样本）

仅需六个步骤，30min 仅需6个步骤，30min 实验，Chromotek GFP-Trap?_A的5大实验应用：

→→ →收集细胞 细胞裂解 平衡beads 结合蛋白 ,加入裂解的细胞 → 清洗beads → 洗脱蛋白

	免疫沉淀	酶活测定	Co-IP	Pull down	ChIP
后期实验	Western blot	酶活测定	沉淀的蛋白质复合物采用SDS-Page 跑胶，western blot鉴定预测作用蛋白Y，或样品利用质谱后续分析。	洗脱的复合物；同时进行GFP和第二标签的western blot 实验。	交联反应逆转，DNA纯化，DNA鉴定（如用QPCR 或者chip实验），同普通CHIP 实验
nano trap替代的产品	GFP单克隆/多克隆抗体+Protein A/G琼脂糖微珠	GFP单克隆/多克隆抗体+Protein A/G琼脂糖微珠	GFP单克隆或多克隆抗体+Protein A/G琼脂糖微珠	GST 标签蛋白的亲和层析柱或琼脂糖微珠	GFP单克隆或多克隆抗体+Protein A/G琼脂糖微珠
目的	弱GFP蛋白样品的富集；或后期实验	可以用beads直接测定酶活	蛋白-蛋白相互作用，一般验证体内的蛋白互作	蛋白-蛋白相互作用，一般验证体外的蛋白互作	蛋白-DNA相互作用

（1）实验不同，裂解的细胞不同；pulldown 加入的是GFP融合蛋白和第二标签融合蛋白的裂解物；chip实验为细胞固定步骤，染色质断裂步骤；

实验不同，加入的裂解物不同；chip实验加入的为断裂的DNA-蛋白复合物；

（2） GFP-Trap 用于IP 实验（Immunoprecipitation）（免疫沉淀）和Co-IP 实验（免疫共沉淀） ：

Co-IP 实验（Co-Immunoprecipitation）（免疫共沉淀）原理图

	传统IP	GFP-Trap用于IP	传统Co-IP	GFP-Trap用于Co-IP
	A	B	C	D
实验原理	抗体与细胞裂解液或上清中相应蛋白结合后，再与蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶联的agarose珠子孵育，得到蛋白复合物，洗脱蛋白。	细胞裂解液或上清中的GFP融合蛋白与GFP-Trap孵育，得到蛋白复合物，洗脱蛋白。	细胞非变性条件下裂解，完整胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。结合的实验原理同A/B
目的	得到纯化的蛋白或进行后期实验	同A	研究蛋白质相互作用
后期实验	洗脱的蛋白采用SDS-Page 跑胶，采用GFP 抗体western blot进行鉴定。		沉淀的蛋白质复合物采用SDS-Page 跑胶，western blot 鉴定，也可利用质谱进行后续分析。
时间	长，超过一天	短，30min	同A	同B
步骤	多，超过20个步骤	少，仅需6个步骤	同A	同B
特异性	普通抗体特异性不高	羊驼抗体，特异性高	同A	同B
使用产品	可选用特异性抗体或GFP单克隆或多克隆抗体+Protein A/G琼脂糖微珠	GFP抗体-琼脂糖珠子，RFP-Trap，GST-Trap，Dnmt1-Trap	同A	同B
适用性	通用方法，适合面宽	有GFP，RFP，GST，Dnmt1-Trap等4个品种的标签蛋白Trap 可选	同A	同B
产物	纯度不高	纯度高，对比见下左图

Nano-Traps主要产品见表：

	品牌	货号	品名	规格	价格
GFP-Trap?	Chromo tek	gta-10	GFP-Trap?, coupled to agarose	10 rxns	2000
	Chromo tek	gta-20	GFP-Trap?, coupled to agarose	20 rxns	6700
	Chromo tek	gta-100	GFP-Trap?, coupled to agarose	100 rxns	27090
	Chromo tek	gta-200	GFP-Trap? coupled to agarose	200 rxns	48240
	Chromo tek	gta-400	GFP-Trap? coupled to agarose	400 rxns	84330
	Chromo tek	gtak-20	GFP-Trap? coupled to agarose kit	20 rxns	8400
	Chromo tek	gtm-20	GFP-Trap? coupled to magnetic beads	20 rxns	6700
	Chromo tek	gtm-100	GFP-Trap? coupled to magnetic beads	100 rxns	27090
	Chromo tek	gtm-200	GFP-Trap? coupled to magnetic beads	200 rxns	5360
	Chromo tek	gtp-96	GFP-multiTrap?, black 96 well plate	1 pc	4100
	Chromo tek	gtp-96	GFP-multiTrap?, black 96 well plate	5 pc	15600
	Chromo tek	gtm-400	GFP-Trap? coupled to magnetic beads	400 rxns	84330
	Chromo tek	gtmk-20	GFP-Trap? coupled to magnetic beads kit	20 rxns	8400
	Chromo tek	gt-250	GFP-Trap? free protein	250 μg	4500
RFP-Trap?	Chromo tek	rta 10	RFP-Trap?, coupled to agarose	10rxns	2000
	Chromo tek	rta 20	RFP-Trap?, coupled to agarose	20rxns	6700
	Chromo tek	rta 100	RFP-Trap?, coupled to agarose	100 rxns	27090
	Chromo tek	rta200	RFP-Trap?, coupled to agarose	200rxns	5360
	Chromo tek	rta 400	RFP-Trap?, coupled to agarose	400rxns	84330
	Chromo tek	rtak-20	RFP-Trap?, coupled to agarose,	20 rxns	8400
	Chromo tek	rt-250	RFP-Trap?, free protein	250 μg	4500
GST-Trap	Chromo tek	stm-10	GST-Trap?, coupled to magnetic beads	10 rxns	2000
	Chromo tek	stm-20	GST-Trap?, coupled to magnetic beads	20 rxns	6700
	Chromo tek	stm-100	GST-Trap?, coupled to magnetic beads	100 rxns	27090
	Chromo tek	stm-200	GST-Trap?, coupled to magnetic beads	200 rxns	48240
	Chromo tek	stm-400	GST-Trap?, coupled to magnetic beads	400 rxns	84330
	Chromo tek	stmk-20	GST-Trap?, coupled to magnetic beads, kit	20 rxns	8400
	Chromo tek	st-250	GST-Trap?, free protein	250 μg	4500
Dnmt1-Trap	Chromo tek	dta-10	Dnmt1-Trap, coupled to agarose	10 rxns	2000
	Chromo tek	dta-20	Dnmt1-Trap, coupled to agarose	20 rxns	6700
	Chromo tek	dta-100	Dnmt1-Trap, coupled to agarose	100 rxns	27090
	Chromo tek	dta-200	Dnmt1-Trap, coupled to agarose	200 rxns	48240
	Chromo tek	dta-400	Dnmt1-Trap, coupled to agarose	400 rxns	84330
	Chromo tek	dtak-20	Dnmt1-Trap, coupled to agarose, kit	20rxns	8400
	Chromo tek	dt-250	Dnmt1-Trap,freeprotein	250μg	4500
Binding Controls	Chromo tek	bab-20	Blocked agarose beads (binding control)	500 μl (20 rxns)	1500
Binding Controls	Chromo tek	bmp-20	Blocked magnetic particles ( binding control)	500 μ l ( 20 rxns)	1500

产品二：

Nano-booster是利用Atto公司的荧光素共价结合到特异性GFP抗体上；当GFP 融合蛋白信号比较弱的时候，或者荧光蛋白变性后，具有再激活的作用。

在研究活细胞中蛋白定位和动力学的过程中是不是会有如下的困惑：

1.固定样品中细胞表达的荧光融合蛋白信号强度在生理表达水平通常很低？

2.荧光蛋白的耐光性和量子效率达不到超分辨显微镜的要求（如：3D-SIM, STED或 STORM/ PALM）？

3.许多细胞生物学方法如Hcl处理的BrdU检测，EdU-Click-It处理或者热变性的荧光原位杂交（FISH）会干扰荧光融合蛋白信号的检测，需要重新激活GFP 信号？

优点：

优点一：抗体好———Nano-Boostern 采用的抗体是基于alpaca的单域抗体片段（VHHS）；具有分子量小（15Kda）、稳定（70℃仍保持稳定），高亲和力（高特异性性结合GFP蛋白），无普通抗体轻链与重链污染等一系列优点等优点；GFP抗体可以特异性结合绿色荧光蛋白的衍生物，如eGFP, wtGFP, GFP S65T，TagGFP，不与RFP衍生蛋白结合。

优点二：Atto公司的荧光素，具有增强荧光的作用；

优点三：作用效果好：

1、作为荧光增强剂使用；

2、对变性荧光蛋白具有再激活作用；

3、不仅能够增强信号，还能够增加荧光蛋白荧光稳定性。

优点四：产品多：不仅有GFP booster，还有RFP booster；

Nano Booster 产品应用：

1、产品实验方法：免疫荧光（IF）,免疫组化（IHC）；

2、产品使用材料：细胞系，组织切片；

3、产品应用方向：荧光显微镜，激光共聚焦显微镜，超分辨率显微镜（3D-SIM，PALM, STED,STORM）；

实验结果改进示例：

实验应用：

上图：比较 HeLa 细胞系核表达的GFP-融合蛋白，GFP 信号增强（G FP-Booster_Atto488使用前和使用后）由用户确定适当的稀释倍数。

EdU-Click-iT? 处理会导致GFP 信号的毁坏。 GFP-Booster标记了GFP 融合蛋白，因此有激活和加强荧光信号的作用(稀释比例 1/200, 1 h at RT) (GFP-Booster with EdU-Click-iT? protocol)。下图：GFP-Dnmt1 融合蛋白，三色荧光检测，同时检测红色：5’ EdU-Click-iT? Alexa Fluor 594信号；绿色，结合了GFP Booster 信号；蓝色，DAPI 信号（在EdU-Click-iT? 处理后GFP Booster）

Nano-booster主要产品见下表：

		货号	品名	规格	价格
GFP-Booster	Chromo tek	gba488-TS	GFP-Booster_atto488-TS	50 μg	2500
	Chromo tek	gba488	GFP-Booster_atto488	100 μg	5400
	Chromo tek	gba-647N	GFP-Booster-Atto 647N	100 μg	询价
	Chromo tek	gbdl-650-TS	GFP-Booster- Atto 647N	50 μg	询价
	Chromo tek	gba-594	GFP-Booster-Atto 594	100 μg	询价
RFP-Booster	Chromo tek	rba594-TS	RFP Booster atto594 TS	50u g	2500
	Chromo tek	rba594	RFP-Booster_atto594	100 μg	5400
	Chromo tek	rbdl-650-TS	RFP-Booster- Atto 650ts	50 μg	询价
	Chromo tek	rba-700	RFP-Booster-Atto 700	100 μg	询价
	Chromo tek	rba-488	RFP-Booster-Atto 488	100 μg	询价

备注：Invtrogen新推出的Click-iT? EdU检测也是以检测新合成DNA中掺入的核苷类似物为基础，但该方法所采用的核苷类似物是EdU，而且不是通过抗体检测，而是基于一个click反应 –铜催化的叠氮化物和炔烃之间的共价反应。Click-iT检测避免了BrdU检测所需的苛刻处理条件，可避免DNA变性，维持样本的形态，因而提供了一种更可靠且更简单的方法进行细胞增殖检测。

DAPI，是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，常用与荧光显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。当DAPI与双股DNA结合时，大吸收波长为358nm，大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。所以不会影响绿色荧光蛋白的观测。

产品三：Chromobodies

ChromoTek公司的Chromobodies^?是一种新的极其微小的细胞内功能抗体。它是基于融合有荧光蛋白(e.g.Tag GFP or Tag RFPfrom Evrogen)的来自羊骆抗体重链的抗原结合域结构(V_HH)。和普通抗体不同的是，这些创新的荧光纳米探针可以使活细胞的结构和进程实时分析和可视化。因此，Chromobodies^?是做研究细胞内研究包含高含量分析（HCA）的一种新的理想试剂。

除了稳定细胞株，你也可以得到Chromobody?质粒，它允许你创建自己的细胞系或瞬时表达Chromobody?。

所有Chromobody?结合域都是经过精心挑选，以不干扰内源性蛋白质的功能，并提供了*的机会来标记活细胞中天然蛋白。

产品形式：质粒或者细胞系产品。

Chromobodies系列产品见下表：

Actin Chromobody

货号	Chromo tek	品名	规格	价格
dcg	Chromo tek	Dnmt1-Chromobody?plasmid,αDnmt1-GFP	20μg	14900
dcr	Chromo tek	Dnmt1-Chromobody?plasmid,αDnmt1-RFP	20μg	14900
ccg	Chromo tek	Cell Cycle Chromobody? plasmid αPCNA GFP	20 μg	14900
ccr	Chromo tek	Cell Cycle Chromobody? plasmid PCNA RFP	20 μg	14900
lcg	Chromo tek	Lamin Chromobody? plasmid, αLamin-GFP	20 μg	14900
lcr	Chromo tek	Lamin Chromobody? plasmid, αLamin-RFP	20 μg	14900
acg	Chromo tek	Actin Chromobody? plasmid, αActin-GFP	20 μg	14900
acr	Chromo tek	Actin Chromobody? plasmid, αActin-RFP	20 μg	14900

产品系列四：

ChromoTek推出一系列高质量常见抗体见下表：

荧光标签抗体

货号	品牌	品名	规格	价格
3f5	Chromo tek	RFP antibody mouse monoclonal	100 μg	3900
5f8	Chromo tek	RFP antibody rat monoclonal	100 μg	3900
3h9	Chromo tek	GFP antibody, rat monoclonal	100 μg	3900

标签抗体

货号	品牌	品名	规格	价格
6g9	Chromo tek	GST antibody, rat monoclonal	100 μ l	3900
6f7	Chromo tek	FLAG antibody, rat monoclonal	100 μg	3900
9E1	Chromo tek	c-Myc antibody, rat monoclonal	100 μg	3900
7c9	Chromo tek	HA antibody, rat monoclonal	100 μg	3900

目的蛋白抗体

货号	品牌	品名	规格	价格
2e8	Chromo tek	Dnmt1antibody,ratmonoclonal	500μl	4900
2e8ts	Chromo tek	Dnmt1antibody,ratmonoclonal	125μl	2000
16d10	Chromo tek	PCNA antibody rat monoclonal	100 μg	4900
16d10ts	Chromo tek	PCNA antibody rat monoclonal	25 μg	2000
4b8	Chromo tek	Ago1 antibody, rat monoclonal	100 μg	5400
4b8ts	Chromo tek	Ago1 antibody, rat monoclonal	25 μg	2000
11a9	Chromo tek	Ago2 antibody, rat monoclonal	100 μg	5400
11a9ts	Chromo tek	Ago2 antibody, rat monoclonal	25 μg	2000
1c7	Chromo tek	RNA Pol II CTD, unphosphorylated CTD	5 ml	5400
1c7ts	Chromo tek	RNA Pol II CTD, unphosphorylated CTD	1 ml	2000
3d12	Chromo tek	RNA Pol II CTD, phos. Tyrosine 1	5 ml	5400
3d12ts	Chromo tek	RNA Pol II CTD, phos. Tyrosine 1	1 ml	2000
3e10	Chromo tek	RNA Pol II CTD, phos. Serine 2	5 ml	5400
3e10ts	Chromo tek	RNA Pol II CTD, phos. Serine 2	1 ml	2000
6d7	Chromo tek	RNA Pol II CTD, phos. Threonine 4	5 ml	5400
6d7ts	Chromo tek	RNA Pol II CTD, phos. Threonine 4	1 ml	2000
3e8	Chromo tek	RNA Pol II CTD, phos. Serine 5	5 ml	5400
3e8ts	Chromo tek	RNA Pol II CTD, phos. Serine 5	1 ml	2000
4e12	Chromo tek	RNA Pol II CTD, phos. Serine 7	5 ml	5400
4e12ts	Chromo tek	RNA Pol II CTD, phos. Serine 7	1 ml	2000

TRAP/ALP染色试剂盒

发表于2024-03-07由上海金畔生物科技有限公司

TRAP/ALP染色试剂盒

产品特性
相关资料
Q&A
参考文献

TRAP/ALP染色试剂盒

破骨/成骨双重染色

　　正常的骨代谢是通过成骨细胞生长与破骨细胞建立骨吸收而维持平衡。成骨细胞的标记酶是碱性磷酸酶（ALP）。破骨细胞的标记酶是抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）。这两种标记酶在组织切片或者培养细胞过程中，被作为成骨细胞、破骨细胞存在的标记指标。

　　本试剂盒可通过骨组织切片以及培养细胞中TRAP/ALP酶活性进行组织染色。通过观察成骨细胞和破骨细胞的染色成像，可检查细胞的分化状态和骨组织的分布情况。

◆特点

●　使用时混合3种溶液，可制备TRAP酶活性染色的显色底物溶液。

●　ALP酶活性染色使用的是预混物溶液，操作简便。

●　TRAP的活性部位呈红紫色，ALP的活性部位呈蓝色（茶褐色），可双重染色。

●　适用于骨组织切片（脱钙GMA树脂包埋切片）以及培养细胞。

◆试剂盒组成

●　酒石酸溶液（×10）·······3 mL
●　酸性磷酸酶底物液A······30 mL
●　酸性磷酸酶底物液B······0.3 mL
●　核染色试剂··············10 mL

●　碱性磷酸酶预混物溶液····30 mL

<备注>本产品可对应培养细胞包装24孔板-5次，96孔板-6次。

骨组织载玻片（一个载玻片约使用500 μL）包装为60个。

◆培养细胞TRAP/ALP酶活性染色案例

●　用TRAP染色剂使破骨细胞呈红色

●　用ALP染色剂使成骨细胞的细胞膜、软骨细胞和细胞间膜呈茶褐色

●　用核染色试剂使各种细胞核呈蓝绿色。

TRAP/ALP染色试剂盒

RAW264细胞的TRAP活性染色

TRAP/ALP染色试剂盒

MC 3T3-E1细胞ALP活性染色

◆相关产品

产品编号	产品名称	包装
PMC-AK20-COS	Alkaline Phosphatase Staining Kit 碱性磷酸酶染色试剂盒	1 kit
PMC-AK04F-COS	TRAP Staining Kit 抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒（TRAP）	10 plate

点击此处下载产品彩页，或向当地代理商索要纸质版本。

石蜡切片骨相关酶（TRAP，ALP）双重染色

◆实验材料及方法

　　材料的获取：1年龄小鼠的上、下肢骨以及脊椎骨（切除软组织）

　　↓

　　一次固定：4%多聚甲醛溶液·10%福尔马林溶液

　　二次固定：纯乙醇

　　部分脊椎骨的非脱钙GMA树脂包埋处理，其他部分做脱钙处理。

　　↓

　　脱脂、脱钙：脱钙液是ZnSO4加EDTA溶液。（与其它方法相比）

　　脱钙装置Histra-DC（普通光）8~16℃连续操作。

　　↓

　　脱水、包埋：ETP（Sakura产品）处理16小时，使用融点为58-60℃嵌入式硬石蜡包埋。

　　部分右上肢和腰椎脱钙GMA树脂处理。

　　↓

　　薄切、干燥：制作4 μｍ切片，43℃伸展30分钟后，37℃干燥处理。

　　↓

　　染色、封装：TRAP/ALP染色试剂盒（Wako）染色，37℃干燥后，二甲苯透明处理

　　Malinol封装液封装

　　↓

　　镜检，染色性评估

◆标准标本制作

　　用之前使用的树脂包埋法或冷冻切片法制成的标本作为标准标本，和脱钙石蜡切片相比。即酒精固定小鼠肘关节，用乙二醇甲基丙烯酸树脂包埋，硬组织切片机制作2 μｍ切片，然后进行TRAP和ALP染色（图1）。还有脱钙冷冻切片也可以作为标准标本（图2）。然后，研究或改良固定、脱钙、染色等各阶段双重染色的可行性。

TRAP/ALP染色试剂盒

　　图1：标准标本（GMA树脂包埋）照片是本实验标准标本——小鼠肘关节染色标本。左图为TRAP染色，右图为ALP染色。下图是二者的双重染色。染色效果均佳。以此作为阳性对照，与脱钙石蜡切片一起染色，进行染色性评估。

TRAP/ALP染色试剂盒

　　图2：脱钙冷冻切片酶染色—将柠檬酸脱钙的小鼠腰椎和右上肢浸泡在30%蔗糖溶液，后经OCT复合包埋，Tissue‐tekPINO冻结，Cryo制作5μｍ冷冻切片。再对切片进行酶染色。不仅可进行TRAP染色（左：红色）和ALP染色（中：褐色）的单染色，双重染色（右）也呈阳性。

固定

　　ALP染色使用不能用福尔马林固定的新鲜材料，如果未在短时间内固定，会导致酶失活，因此推荐80%乙醇固定。①小鼠膝关节不进行一次固定，直接用乙醇直接浸泡进行二次固定组。②小鼠腰椎用福尔马林（4％多聚甲醛溶液）固定16小时后再用乙醇进行二次固定。③小鼠腰椎用福尔马林固定4天后进行二次固定。④临床案例也用福尔马林固定1个月后，再进行二次固定。对上述四种类型进行TRAP·ALP双重染色，研究染色的可行性。如图3所示。本实验证明福尔马林固定从16小时到4天时间范围内均可进行TRAP·ALP双重染色。

TRAP/ALP染色试剂盒

　　图3：福尔马林的1次固定的固定时间和TRAP/ALP的染色性研究—①是未经福尔马林固定，仅用酒精2次固定的样品，ALP染色呈强阳性。TRAP染色呈阴性。②是福尔马林固定16小时和③是固定4天，TRAP/ALP的染色效果均佳。并且，福尔马林固定1个月的临床案例（骨软骨瘤）中TRAP染色呈阳性，但不能ALP染色。

脱钙

　　ALP酶是含有金属Zn蛋白。通过脱钙处理，酶的组成成分Zn被去除，导致酶失活。为弥补此缺点，需要添加ZnSO₄，作为ALP活化剂。换言之，100 mL脱钙液需添加0.4 mL 1%ZnSO4，来补充Zn离子。并且，作为脱钙剂，在柠檬酸盐酸缓冲液添加Zn的同时，也可尝试添加相同螯合剂EDTA溶液进行研究。另外，也可研究酸性脱钙剂（甲酸福尔马林溶液）能否进行酶反应。结果显示，脱钙液添加EDTA溶液后染色良好。反之，甲酸福尔马林溶液不能进行酶染色。（图4）脱钙方法利用超声波脱钙装置（Histra-DC，正常光）在8~16℃的低温环境下，连续操作3-6天，对样品进行脱钙处理。脱钙后用添加甘氨酸的巴比妥缓冲液（pH7.4）清洗，磷酸钙附着在组织上，防止沉淀。

TRAP/ALP染色试剂盒

　　图4：脱钙液的种类不同可否双重染色—左图是选用酸性脱钙溶液中对组织伤害较少的甲酸福尔马林
　　脱钙溶液脱钙3天（Histra-DC,8～16℃）后的大鼠膝关节。（Histra-DC，8-16℃）TRAP和ALP均不能染色。相对来说，中图、右图均可进行TRAP/ALP双重染色。

染色

　　染色法是Lorch的Gomori法。本次用的是偶氮染料法和耦合法结合的TRAP/ALP染色试剂盒（Wako，产品编号：294-67001）。对于切片的厚度，Lorch推荐8 μm，同时也研究了普通的4 μm切片是否能染色、双重染色的顺序应该先染TRAP和ALP中的哪一个、封片剂是否必须选水溶性封片剂等问题。

　　染色法结果：偶氮染料法中切片过厚导致酶扩散图像。即用TRAP染色骨质有红染倾向，但即使是4 μm厚度，只要增强反应条件（反应温度和反应时间），也能充分染色的。换言之，TRAP染色中反应温度从室温调至37℃，反应时间从30分钟调至45分钟或60分钟。ALP染色在37℃反应45分钟至3小时，或者室温下翻译时间至一晚。此结果显示，两者色调平衡，染色效果好。（图5）但是，反应条件的增强导致ALP染色切片产生了很多色素颗粒（图2）。另外，TRAP和ALP的染色顺序哪一个先染色都是可以的。如果先进行ALP染色时，在TRAP阳性部位呈明显的红色，鲜艳处为破骨细胞。获得比较好的标本。但是，ALP的反应产物经过TRAP溶液处理后，会产生白色混浊颗粒，沉淀在组织上。因此，先TRAP染色，接着ALP染色的方法是可行的。封装法是利用甲基绿数秒间核染色处理。水洗后，37℃下干燥，二甲苯浸透，用马里醇(Marinol)永久封存。在浸透前用推荐使用酒精脱水，但是会产生反应产物的溶解、扩散。

TRAP/ALP染色试剂盒

　　图5：脱钙石蜡包埋切片的TRAP/ALP双重染色—利用1年龄小鼠腰椎的EDTA脱钙石蜡切片，进行TRAP/ALP双重染色。TRAP阳性将破骨细胞染成红色，将强细胞活性的细胞（成骨细胞、软骨细胞）染成褐色。（上：弱扩大，下：强扩大）

◆相关资料

TRAP/ALP染色试剂盒

TRAP/ALP染色试剂盒说明书

参考文献

1.	Yamaguchi, S., Aoyama, T., Ito, A., Nagai, M., Iijima, H., Tajino, J., … & Kuroki, H. (2016). Effect of low-intensity pulsed ultrasound after mesenchymal stromal cell injection to treat osteochondral defects: an in vivo study. Ultrasound in medicine & biology, 42(12), 2903-2913. 全文
2.	Pang, P., Shimo, T., Takada, H., Matsumoto, K., Yoshioka, N., Ibaragi, S., & Sasaki, A. (2015). Expression pattern of sonic hedgehog signaling and calcitonin gene-related peptide in the socket healing process after tooth extraction. Biochemical and biophysical research communications, 467(1), 21-26. 全文
3.	Hatano, K., Ishida, Y., Yamaguchi, H., Hosomichi, J., Suzuki, J. I., Usumi-Fujita, R., … & Ono, T. (2018). The chemokine receptor type 4 antagonist, AMD3100, interrupts experimental tooth movement in rats. Archives of oral biology, 86, 35-39. 全文
4.	Azechi, T., Kanehira, D., Kobayashi, T., Sudo, R., Nishimura, A., Sato, F., & Wachi, H. (2013). Trichostatin A, an HDAC class I/II inhibitor, promotes Pi-induced vascular calcification via up-regulation of the expression of alkaline phosphatase. Journal of atherosclerosis and thrombosis, 15826.全文
5.	Abe, F., Takahashi, H., & Tanaka, A. (2019). Investigation on the Action and Effect of Culture Supernatant of Human Dental Pulp Stem Cells Using Rats with Medication-Related Osteonecrosis of the Jaw. Journal of Hard Tissue Biology, 28(4), 349-358.全文
6.	Kubota, M., Yanagita, M., Mori, K., Hasegawa, S., Yamashita, M., Yamada, S., … & Murakami, S. (2016). The effects of cigarette smoke condensate and nicotine on periodontal tissue in a periodontitis model mouse. PloS one, 11(5), e0155594.全文
7.	Maruyama, K., Kawagoe, T., Kondo, T., Akira, S., & Takeuchi, O. (2012). TRAF family member-associated NF-κB activator (TANK) is a negative regulator of osteoclastogenesis and bone formation. Journal of Biological Chemistry, 287(34), 29114-29124. 全文
8.	Liu, S., Kiyoi, T., Takemasa, E., & Maeyama, K. (2015). Systemic Lentivirus-Mediated Delivery of Short Hairpin RNA Targeting Calcium Release–Activated Calcium Channel 3 as Gene Therapy for Collagen-Induced Arthritis. The Journal of Immunology, 194(1), 76-83.全文
9.	Yamasaki, M., Hasegawa, S., Imai, M., Takahashi, N., & Fukui, T. (2016). High-fat diet-induced obesity stimulates ketone body utilization in osteoclasts of the mouse bone. Biochemical and biophysical research communications, 473(2), 654-661.全文
10.	Maekawa, S., Katagiri, S., Takeuchi, Y., Komazaki, R., Ohtsu, A., Udagawa, S., & Izumi, Y. (2017). Bone metabolic microarray analysis of ligature‐induced periodontitis in streptozotocin‐induced diabetic mice. Journal of periodontal research, 52(2), 233-245. 全文
11.	Maruyama, K., Uematsu, S., Kondo, T., Takeuchi, O., Martino, M. M., Kawasaki, T., & Akira, S. (2013). Strawberry notch homologue 2 regulates osteoclast fusion by enhancing the expression of DC-STAMP. Journal of Experimental Medicine, 210(10), 1947-1960. 全文
12.	Shimomura, S., Inoue, H., Arai, Y., Nakagawa, S., Fujii, Y., Kishida, T., … & Mazda, O. (2018). Treadmill Running Ameliorates Destruction of Articular Cartilage and Subchondral Bone, Not Only Synovitis, in a Rheumatoid Arthritis Rat Model. International journal of molecular sciences, 19(6), 1653.全文
13.	Yokota, J., Chosa, N., Sawada, S., Okubo, N., Takahashi, N., Hasegawa, T., … & Ishisaki, A. (2014). PDGF-induced PI3K-mediated signaling enhances the TGF‑β‑induced osteogenic differentiation of human mesenchymal stem cells in a TGF-β-activated MEK-dependent manner. International journal of molecular medicine, 33(3), 534-542.全文
14.	Yeom, K. H., Ariyoshi, W., Okinaga, T., Washio, A., Morotomi, T., Kitamura, C., & Nishihara, T. (2016). Platelet‐rich plasma enhances the differentiation of dental pulp progenitor cells into odontoblasts. International endodontic journal, 49(3), 271-278. 全文
15.	Saita, M., Kaneko, J., Sato, T., Takahashi, S. S., Wada-Takahashi, S., Kawamata, R., … & Nagasaki, Y. (2016). Novel antioxidative nanotherapeutics in a rat periodontitis model: Reactive oxygen species scavenging by redox injectable gel suppresses alveolar bone resorption. Biomaterials, 76, 292-301.全文
16.	Wu, Y. H., Taya, Y., Kuraji, R., Ito, H., Soeno, Y., & Numabe, Y. (2019). Dynamic microstructural changes in alveolar bone in ligature‐induced experimental periodontitis. Odontology, 1-11. 全文
17.	Li, P., Honda, Y., Arima, Y., Yasui, K., Inami, K., Nishiura, A., … & Matsumoto, N. (2016). Interferon-γ enhances the efficacy of autogenous bone grafts by inhibiting postoperative bone resorption in rat calvarial defects. Journal of prosthodontic research, 60(3), 167-176.全文
18.	Li, P., Hashimoto, Y., Honda, Y., Arima, Y., & Matsumoto, N. (2015). The effect of interferon-γ and zoledronate treatment on alpha-tricalcium phosphate/collagen sponge-mediated bone-tissue engineering. International journal of molecular sciences, 16(10), 25678-25690.全文
19.	Tezuka, R., & Tanaka, A. (2016). Jawbone Changes in Sodium Zoledronic Acid-and Dexamethasone-Treated Rats. Journal of Hard Tissue Biology, 25(4), 383-394.全文
20.	Yamada, K., Tsuji, T., & Kunieda, T. (2013). Phenotypic Characterization of Ggt1dwg/dwg Mice, a Mouse Model for Hereditary γ-GlutamylTransferase Deficiency. Experimental animals, 62(2), 151-157. 全文
21.	Fukushima, H., Shimizu, K., Watahiki, A., Hoshikawa, S., Kosho, T., Oba, D., … & Okabe, K. (2017). NOTCH2 Hajdu-Cheney mutations escape SCFFBW7-dependent proteolysis to promote osteoporosis. Molecular cell, 68(4), 645-658. 全文
22.	Kawada, S., Wada, E., Matsuda, R., & Ishii, N. (2013). Hyperbaric hyperoxia accelerates fracture healing in mice. PloS one, 8(8), e72603. 全文
23.	Ikawa, H., Moroi, A., Yoshizawa, K., Saida, Y., Hotta, A., Tsutsui, T., … & Saito, Y. (2017). Bone regeneration enhancement by ultra-violet (UV) treatment for uHA/PLLA absorbable mesh. Journal of Cranio-Maxillofacial Surgery, 45(5), 634-641. 全文
24.	Sato, M., Asada, N., Kawano, Y., Wakahashi, K., Minagawa, K., Kawano, H., … & Katayama, Y. (2013). Osteocytes regulate primary lymphoid organs and fat metabolism. Cell metabolism, 18(5), 749-758. 全文
25.	Maruyama, K., Fukasaka, M., Uematsu, S., Takeuchi, O., Kondo, T., Saitoh, T., … & Akira, S. (2015). 5-Azacytidine-induced protein 2 (AZI2) regulates bone mass by fine-tuning osteoclast survival. Journal of Biological Chemistry, 290(15), 9377-9386. 全文
26.	Okuda, T., Naruo, M., Iijima, O., Igarashi, T., Katsuyama, M., Maruyama, M., … & Haseba, T. (2018). The Contribution of Alcohol Dehydrogenase 3 to the Development of Alcoholic Osteoporosis in Mice. Journal of Nippon Medical School, 85(6), 322-329. 全文
27.	Gunji, H., Kunimatsu, R., Tsuka, Y., Yoshimi, Y., Sumi, K., Awada, T., … & Yanoshita, M. (2018). Effect of high‐frequency near‐infrared diode laser irradiation on periodontal tissues during experimental tooth movement in rats. Lasers in surgery and medicine, 50(7), 772-780.全文
28.	Takano, A., Fukuda, T., Shinjo, T., Iwashita, M., Matsuzaki, E., Yamamichi, K., … & Nishimura, F. (2017). Angiopoietin-like protein 2 is a positive regulator of osteoblast differentiation. Metabolism, 69, 157-170.全文
29.	Tsuchiya, T., Sakai, A., Menuki, K., Mori, T., Takeuchi, Y., Kanoh, S., … & Nakamura, T. (2013). Disruption of aldehyde dehydrogenase 2 gene results in altered cortical bone structure and increased cortical bone mineral density in the femoral diaphysis of mice. Bone, 53(2), 358-368.全文
30.	Ishikawa, J., Takahashi, N., Matsumoto, T., Yoshioka, Y., Yamamoto, N., Nishikawa, M., … & Yamamoto, A. (2016). Factors secreted from dental pulp stem cells show multifaceted benefits for treating experimental rheumatoid arthritis. Bone, 83, 210-219.全文
31.	Suzuki, K., Anada, T., Miyazaki, T., Miyatake, N., Honda, Y., Kishimoto, K. N., … & Suzuki, O. (2014). Effect of addition of hyaluronic acids on the osteoconductivity and biodegradability of synthetic octacalcium phosphate. Acta biomaterialia, 10(1), 531-543. 全文
32.	Tamura, Y., Kawao, N., Yano, M., Okada, K., Okumoto, K., Chiba, Y., … & Kaji, H. (2015). Role of plasminogen activator inhibitor-1 in glucocorticoid-induced diabetes and osteopenia in mice. Diabetes, 64(6), 2194-2206. 全文

产品列表

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
294-67001	TRAP/ALP Stain Kit TRAP/ALP双重染色试剂盒	60次	病理研究用	－

抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

发表于2024-03-07由上海金畔生物科技有限公司

抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒
TRAP Staining Kit

产品特性
相关资料
Q&A
参考文献

可用于破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒

TRAP Staining Kit

抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

　　TRAP Staining Kit 可用于破骨细胞的抗酒石酸酸性磷酸酶染色。骨量是由成骨细胞和破骨细胞两者间的活性平衡来控制的。
　　碱性磷酸酶（ALP 染色试剂盒，Cat.No. PMC-AK20-COS）和抗酒石酸酸性磷酸分别是成骨细胞和破骨细胞的标记物。

◆试剂盒的组成

组成	数量	保存
Tartrate-containing Buffer	50 mL	４°C　(不用冻结)
Chromogenic Substrate	10 vials	４°C

盒内试剂的量可用于 10×96 孔板

#其他所需的材料
●　10％福尔马林中性缓冲液
●　磷酸盐缓冲盐水（PBS）
●　蒸馏水或去离子水

◆步骤（96-孔板规格）

1.   去除培养基。用 100 μL 的 PBS 清洗每个孔。
2.   添加 50 μL 10％的福尔马林中性缓冲溶液至每个孔板里，并在室温下放置５分钟。
3.   用 250 μL 的去离子水清洗每个孔板。 (×３次)
4.   用５mL 酒石酸盐缓冲液溶解1瓶　
5.   添加 50 μL 的显色底物至每个孔板内。
6.   在 37℃ 下孵育 20-60 分钟。调节孵育时间直到 TRAP 染色结果能清晰地显示在图１中。
7.   用去离子水冲洗以终止反应。

注意: 孵育时间过长会导致过度染色显色底物。

抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

　图 1:　破骨细胞TRAP染色

相关资料

抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

详情请点击图片

抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

细胞培养试剂盒及细胞培养分析试剂盒的宣传单 [PDF]

TRAP Staining Kit [PMC-AK04F-COS]
TRAP Staining Kit可用于破骨细胞里的抗酒石酸酸性磷酸酶的染色。

Stains All Gel Staining Kit for Acidic Proteins [PMC-AK02-COS]
该试剂盒专门设计用来染色调节骨骼钙化的强酸性蛋白如：如骨钙素、骨桥蛋白和BSP二强酸性蛋白质。

Adipocyte Fluorescent Staining kit [PMC-AK19F-COS]
用氟硼荧和通过H33258荧光染色的细胞核来染色细胞里的脂肪球。

Pancreatic beta-cell Fluorescent Staining Kit [PMC-AK11F-COS]

Acidic Mucopolysaccaride Assay Kit [PMC-AK03-COS]

DNA Quantity Kit [PMC-AK06-COS]
DNA 不通过从培养细胞里提纯也可以进行量化。

TypeI collagenase assay kit [PMC-AK37-COS]

Lipid Assay Kit [PMC-AK09F-COS]
此试剂盒（油红的oilphilic红色染料）染色细胞内的油滴，并且用有机溶剂萃取法能够量化油量

GPDH Assay Kit [PMC-AK01-COS]
该试剂盒在测定酶活性方面，比传统方具有更高的稳定性和再现性等优势。

Alkaline Phosphatase Staining Kit [PMC-AK20-COS]
这是用于成骨细胞的碱性磷酸酶的染色。

Calcified nodule Staining kit [PMC-AK21-COS]

POLARIC [PMC-AK12-COS]
用于活细胞的溶剂变色荧光

Gelatin zymography kit [PMC-AK47-COS]

MMP Marker [PMC-AK38-COS]

◆TRAP 染色试剂盒常见问题

Q１：　该款试剂盒是否可用于石蜡包埋的组织？

A１：　非常抱歉，我们没有用这个做过石蜡包埋的组织。如果样品含有福尔马林的话，也不能用。

Q２：　操作说明书是可以做 10×96 孔板实验。能否介绍一下使用６孔板的步骤？

A２：　请使用 96 孔板的 30 倍试剂。比如显色试剂的量是1.5mL。

Q３：　是否可以染巨噬细胞？

A３：　可以。

Q４：　进行免疫荧光实验时，是否可以一起使用？如果可以，请告知实验流程。

A４：　我们没有用该试剂盒同时进行免疫荧光实验。

Q５：　如果显色底物溶解的话，在４℃可以保存多久？

A５：　非常抱歉，显色底物不能溶解后保存。最好现配现用。显色底物提供３mg/瓶，有 10 瓶。

Q６：　能够提供小包装？

A６：　目前不行。

参考文献

［1］	Morinobu, A., Biao, W., Tanaka, S., Horiuchi, M., Jun, L., Tsuji,G., Sakai, Y., Kurosaka, M., Kumagai, S. (-)-Epigallocatechin-3-Gallate Suppresses Osteoclast Differentiation and Ameliorates Experimental Arthritis in Mice. Arthritis Rheum. 58, 2012-2018 (2008)
［2］	Hase, H., Kanno, Y., Kojima, H., Sakurai, D., Kobata, T. Coculture of Osteoclast Precursors With Rheumatoid Synovial Fibroblasts Induces Osteoclastogenesis via Transforming Growth Factor beta-Mediated Down-Regulation of Osteoprotegerin. Arthritis Rheum. 58, 3356-3365（2008）
［3］	Cao, H., Kuboyama, N. A Biodegradable Porous Composite Scaffold of PGA/beta-TCP for Bone Tissue Engineering. Bone. 46, 386-395 (2010)
［4］	Okada, Y., Hamada, N., Kim, Y., Takahashi, Y., Sasaguri, K., Ozono, S., Sato, S. Blockade of Sympathetic beta-receptors Inhibits Porphyromonas Gingivalis-induced lveolar Bone Loss in an Experimental Rat Periodontitis Model. Arch. Oral Biol. 55, 502-508 (2010)
［5］	Okamoto, A., Ohnishi, T., Bandow, K., Kakimoto, K., Chiba, N., Maeda, A., Fukunaga, T., Miyawaki, S., Matsuguchi, T. Reduction of Orthodontic Tooth Movement by Experimentally Induced Periodontal Inflammation in Mice. Eur. J. Oral Sci. 117, 238-247 (2009)
［6］	Fujiwara, T., Fukushi, J., Yamamoto, S., Matsumoto, Y., Setsu, N., Oda, Y., Yamada, H., Okada, S., Watari, K., Ono, M., Kuwano, M., Kamura, S., Iida, K., Okada, Y., Koga, M., Iwamoto, Y. Macrophage Infiltration Predicts a Poor Prognosis for Human Ewing Sarcoma. Am. J. Pathol. 179, 1157- 170 (2011)

产品列表

Research Diets动物饲料官网代理商

鼠一鼠二 MolDiets 模尔美迪森小鼠猴子实验动物造模饲料定制

标签归档：trap

ChromoTek产品

TRAP/ALP染色试剂盒

抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

2024年 5月
一	二	三	四	五	六	日
		1	2	3	4	5
6	7	8	9	10	11	12
13	14	15	16	17	18	19
20	21	22	23	24	25	26
27	28	29	30	31