abraxis 520011说明书

Microcystins/Nodularins (ADDA) (EPA ETV) (EPA Method 546), ELISA, 96-test

微囊藻毒素/结核

菌素（ADDA）（EPA ETV）（EPA方法546），ELISA，96试验

微囊藻毒素-ADDA ELISA是一种用于定量检测水样中微囊藻毒素和结节蛋白的灵敏性的免疫测定方法。

该测试适用于定量和/或定性检测水样中的微囊藻毒素和结核菌素[请参考适当的技术公告，以收集，处理和处理饮用水（处理过的和未经处理的）和休闲用水样品。如有必要，可以通过HPLC，蛋白磷酸酶测定或其他常规方法确认阳性样品。该测试是一种间接竞争性ELISA，用于微囊藻毒素和Nodularins的同源基因独立检测。它基于对微囊藻毒素，结节蛋白及其同系物的特异性抗体识别。当样品中存在毒素时，毒素和固定在板上的微囊藻毒素-蛋白质类似物竞争溶液中抗微囊藻毒素/结节菌素抗体的结合位点。然后洗涤板，并添加第二抗体-HRP标记。在第二洗涤步骤和加入底物溶液之后，产生颜色信号。蓝色的强度与样品中微囊藻毒素的浓度成反比。在时间后停止显色反应，并使用ELISA读数器评估颜色。使用每次运行构建的标准曲线通过内插法确定样品的浓度。

编号520011

格式：96孔板ELISA

微咸水或海水中的微囊藻毒素样品制备

1. 预期用途

用于制备用于 Abraxis 微囊藻毒素-ADDA ELISA 分析的微咸水或海水样品。

2. 灵敏度

在微咸水或海水中为 0.263 ppb

3. 材料和试剂提供一次性 5¾”玻璃巴斯德吸管一次性 9”玻璃巴斯德吸管玻璃棉

巴斯德吸管灯泡

微囊藻毒素-ADDA 海水样品处理液微囊藻毒素-ADDA 海水样品净化树脂

4. 所需的其他材料（未提供）

12 x 75 mm 试管

20 mL 玻璃小瓶，带有聚四氟乙烯内衬盖，去离子水或蒸馏水

带特氟龙内衬盖的 4 mL 玻璃小瓶 Scoopula

带一次性塑料枪头的微量移液器涡旋混合器

Abraxis 微囊藻毒素-ADDA ELISA 试剂盒

5. 注释和注意事项

本程序预期用于微咸水或海水样品。其他基质在用于本程序前应进行*验证。

6. 色谱柱制备程序

6.1 将少量玻璃棉放入 5¾”玻璃巴斯德吸管顶部。使用 9″ 玻璃巴斯德移液器，将玻璃棉推入 5¾” 移液器底部，形成色谱柱底部。玻璃棉的深度应约为 5 mm。将色谱柱置于 12 x 75 mm 试管中。

6.2 每个色谱柱将需要约 1.5 g 海水样品清除树脂。计算微囊藻毒素-ADDA 海水样品净化树脂的适量并加至 20 mL 玻璃瓶中。

6.3 以约 2:1 的比例向微囊藻毒素-ADDA 海水样品清除树脂中加入蒸馏水或去离子水（例如，每 5 g 树脂中加入 10 mL 去离子水或蒸馏水）。摇动或投票。

6.4 使用 9″ 巴斯德吸管将树脂水溶液移取至色谱柱中。将移液器吸头保持在柱床表面，避免在柱床中形成气泡。在距离移液器顶部约 2 cm 处，将色谱柱填充至压痕处。这将产生一个约 8 cm 的色谱柱。

6.5 使去离子水或蒸馏水从色谱柱中排出。  在管中水面以上至少 1 cm 处提起色谱柱。将移液器灯泡靠在色谱柱顶部（不要将灯泡连接到色谱柱上），将剩余的水推出色谱柱。避免

使色谱柱的头端与管中的水接触，以防止水吸入回色谱柱中。

6.6 将色谱柱置于适当标记的 4 mL 玻璃瓶中。

7. 样品清理

7.1 向洁净、适当标记的 4 mL 玻璃瓶中加入 1 mL 微咸水或海水样品。加入 50µL 微囊藻毒素-ADDA 海水样品处理溶液。涡旋。

7.2 向色谱柱顶部加入 375 μL 经处理的微咸水或海水样品。使样品流过色谱柱并收集在小瓶中。

7.3 向色谱柱中再加入一份 375 μL 经处理样本。流过色谱柱。

7.4 在小瓶中样品表面上方至少 1 cm 处提起色谱柱。将移液器灯泡靠在色谱柱顶部（不要将灯泡连接到色谱柱上），将剩余样品推出色谱柱。避免色谱柱与小瓶中的样品接触，以防止样品被抽吸回色谱柱中。

7.5 将色谱柱放回小瓶中。向色谱柱顶部加入 500 μL 蒸馏水或去离子水。使冲洗液流过色谱柱，并与样品一起收集。

7.6 将色谱柱顶端抬高至样品表面上方至少 1 cm 处/小瓶中冲洗液中。将移液器灯泡靠在色谱柱顶部（不要将灯泡连接到色谱柱上），将剩余的冲洗液推出色谱柱。避免色谱柱与小瓶中的样品接触，以防止样品被抽吸回色谱柱中。

7.7 取出色谱柱并丢弃（色谱柱仅供一次性使用）。盖上小瓶并涡旋。然后可以使用 Abraxis 微囊藻毒素-ADDA ELISA 试剂盒分析样品。

8. 结果评价

将 ELISA 结果乘以因子 1.75，测定样品中微囊藻毒素的浓度。浓度低于标准品 1 (0.15 ppb) 的样品应报告为含有 < 0.263 ppb 的微囊藻毒素。浓度高于标准品 5 (5.0 ppb) 的样品可报告为含有

> 8.75 ppb 微囊藻毒素或进一步稀释并重新分析以获得准确的定量结果。

9. 性能数据

恢复

用如上所述制备的微囊藻毒素-LR、微囊藻毒素-LA 或微囊藻毒素-RR 加标含不同浓度海水的样品，然后使用微囊藻毒素-ADDA 试验进行分析。微囊藻毒素-LR 的平均回收率为 91.7%。Microcystin-LA 的平均回收率为 92.1%。微囊藻毒素-RR 的平均回收率为 98.9%。