medicago 10-0027说明书

Protein L Ligand Leakage ELISA kit

蛋白L配体渗漏ELIS A试剂盒

Product 0-0027 Standard kit

10-0028 XL kit containing extra Protein L Reference

使用前阅读：·本说明书推荐的样品制备方法（即。热处理）已成功地应用于一些目标分子，包括MAB和Fab。一些法布斯可能，怎么 永远，需要额外的优化。对sdAb分子进行热处理的初步实验尚未成功。

蛋白L参考品送冻，应保冻..

 

 

Table of content

Table of content………………………………………………………………………………………………………….. 2

Background and intended use ………………………………………………………………………………………. 2

Warnings and precautions……………………………………………………………………………………………. 3

Storage and stability ……………………………………………………………………………………………………. 3

Kit contents ……………………………………………………………………………………………………………….. 3

Materials required but not supplied……………………………………………………………………………….. 3

Sample preparation……………………………………………………………………………………………………… 4

Reagent preparation…………………………………………………………………………………………………….. 6

Test procedure ……………………………………………………………………………………………………………. 7

Analysis of results………………………………………………………………………………………………………. 8

Performance ………………………………………………………………………………………………………………. 8

Contact information…………………………………………………………………………………………………….. 8

 

 

 

 

背景和预期用途

 

蛋白质L配体泄漏ELISA试剂盒是一种定量的酶联免疫吸附试验。这种ELISA-试剂盒的目的是检测和量化从蛋白质L亲和力的洗脱液中的配体泄漏 含有免疫球蛋白（Ig）或Ig-碎片的色谱培养基。

 

蛋白质L配体泄漏ELIS A试剂盒有两个版本-标准试剂盒（10-0027）和XL试剂盒（10-0028）。XL试剂盒中含有五小瓶的蛋白质L参考，而不是一小瓶。 用于工艺适应目的。

 

蛋白质L初是从大肠杆菌中分离出来的，并在色谱培养基中作为配体捕获Ig和Ig片段。蛋白质L与变量reg结合 抗体的kappa轻链离子，不干扰抗原结合位点。这使得蛋白L能够比其他抗体结合Pr结合更广泛的Ig类和亚类 奥廷斯。此外，蛋白L还结合抗体片段，如Fabs，单链可变片段和结构域抗体，其中含有kappa轻链。

 

蛋白L配体漏ELISA是一种夹心ELISA，在12条的模块中有96个微滴度井，包覆了一种亲和纯化的抗蛋白L抗体。一个样本中的蛋白质L的量 用标准曲线测定E，用蛋白质L提取参考样品。

 

为了将Ig或Ig碎片从蛋白L中分离出来，需要进行样品制备。对于mAbs和Fabs，样品是通过煮沸和离心制备的，然后再在条带中孵育。 埃尔斯。

请注意，对于像sdAb这样的小Ig碎片，这个样品制备程序不起作用..需要对sdAb的样品制备进行额外的优化。

需要稀释参考样品中的参考标准曲线（来自试剂盒中提供的蛋白质L参考）。参考样品应由不同的净化方法分离出来 请参阅下面样品准备部分的更多信息。如果样品不包含任何Ig或Ig碎片，则不需要煮沸样品。它们可以直接用于检测。

警告和注意事项1。在开始检测之前，仔细阅读说明书。使用与试剂盒一起提供的说明书的有效版本..2.不要从不同的工具包b中混合组件 阿切斯。3.遵循良好的实验室实践和当地安全准则。4.底物溶液（EC-蓝色增强液）对眼睛、呼吸道和皮肤有刺激性..停止溶液是一种酸w 希奇会引起灼伤。小心处理。5.不要用嘴吸管。6.不要使用超过到期日期的试剂盒组件。

 

储存和稳定性·将试剂盒组件存放在4oC。将蛋白质L参考品存放在-20oC或-80oC。稳定12个月

 

Kit contents

Component Quantity Handling

Anti-Protein L coated

microtiter plate

1 plate

96 wells

12 × 8-well strips

Ready to use. Let the plate reach room temperature

before opening the bag. If only part of the plate is used,

store unused strips in a sealed bag at +4ºC.

HRP-conjugated anti-Protein

L pAb

1 × 130 µl Dilute 100x in PBS-Tween. Store protected from light.

Protein L reference (600

ng/ml)

1 × 200 µl in 10-0027

5 × 200 µl in 10-0028

Dilute in your reference dilution buffer (see below).

Store working aliquots at -20/-80ºC.

Avoid repeated freezing/thawing

EC-Blue Enhanced™ 1 × 13 ml TMB substrate, ready to use. Store protected from light.

Let the substrate reach room temperature before use.

Stop solution 1 × 7 ml Ready to use.

PBS-Tween tablet 1 × 6 tablets Dissolve 1 tablet in 500 ml ultra-pure water

Plate sealing tape 1 Remove tape cover, seal the plate during incubations.

 

所需材料但未提供

1。微吸管和吸管，范围10-1000μl

2。玻璃、管子和机架

3。超纯水

4..参考样品（见样品制备）

5..水浴

6特克斯混合器

7离心机

8洗瓶或自动微滴板垫圈

9..微滴度平板阅读器在450n m处读取吸光度

 

 

参考样品（不含蛋白L的Ig/Ig-碎片样品）

由于不同的目标分子，在不同的浓度下，可能对测定性能有不同的影响，因此需要稀释t。 蛋白质L参考品（在试剂盒中提供）在参考样品中。参考样品应在等效缓冲液中以与试验样品相同的浓度含有相同的Ig或Ig碎片 要进行分析（即。从蛋白质L亲和层析介质中洗脱样品）。重要的是，参考样品的ig或igfragments应使用另一种p来制备 强化战略（即。不涉及蛋白质L亲和层析培养基，例如合适的离子交换柱）。参考样品和储存在适当的条件下，例如。- 用于几种不同的蛋白质LELISA测定。如果您的测试样本不包含任何Ig或Ig-碎片，请使用您的测试样本缓冲区作为参考样本。

 

如果需要，将参考样品的pH值调整到7.4。在PBS-Tween中稀释参考样品至少1：2，以与样品中的浓度相匹配。·使用这个解决方案（参考文献dilu） 缓冲液），以稀释试剂盒中提供的蛋白质L参考，以获得标准曲线（见下文）

 

测试样品-pH和稀释·

调整所有样品的pH值到大约7.4。

在PBS-Tween中稀释所有样品至少1：2。确保所有样品中含有等量的目标分子（Ig/） IgG-碎片），与参考稀释缓冲液中的浓度相同（见上文）。

·对于一些含有Ig-碎片的样品，可通过调整终浓度来改进测定结果 吐温20%~0.05%。

需要通过煮沸和离心进一步制备含有Ig或Ig碎片的样品（见下文）。没有IgG或IgG碎片的样品可以直接使用。 e化验。

 

标准曲线样品·

蛋白质L参考品应稀释1：10，以达到标准曲线的高点（60ng/ml）。在参考稀释缓冲液中稀释蛋白质L参考。Th 在1：2的步骤中进行连续稀释。参见下表中的示例。旋涡每个样品，并更换吸管尖，然后再进行下一次稀释。

Standard (std) 60 ng/ml Add 60 µl Protein L reference to 540 µl Reference dilution buffer 30 ng/ml Add 300 µl std 60 to 300 µl Ref. dilution buffer 15 ng/ml Add 300 µl std 30 to 300 µl Ref. dilution buffer 7.5 ng/ml Add 300 µl std 15 to 300 µl Ref. dilution buffer 3.75 ng/ml Add 300 µl std 7.5 to 300 µl Ref. dilution buffer 1.88 ng/ml Add 300 µl std 3.75 to 300 µl Ref. dilution buffer 0 ng/ml 300µl Reference dilution buffer

如果需要，标准曲线可以以同样的方式进一步稀释（低于1.88ng/ml）。

 

注意：确保总是以与测试样本相同的方式对待您的标准曲线样本。如果你的测试样品含有Ig或Ig-碎片，需要煮沸作为样品准备，你的参考。 标准曲线样品也应在相同的条件下煮沸。

 

空白样品

PBS-Tween可作为空白样品..另一种选择是使用与测试示例相同的缓冲区。在这种情况下，处理空白样品的方式与您的测试样品相同（调整pH） ，用PBS-Tween稀释，煮沸）。

煮样本

这一步是必要的，只有当你的样本包含Ig或Ig-碎片..没有Ig或Ig-碎片的样品可直接用于测定..

 

煮沸试验样品、空白样品和参考标准曲线样品。使用带螺旋帽的管子。

如果使用加热块，不要使用小瓶与裙子。含镁样品应煮沸1次 5分钟。含有Ig-碎片的样品应煮沸1小时..

离心样品2分钟。

在将样品加入盘子之前，在不打乱颗粒的情况下，仔细混合样品。

注：样品制备方案可以通过改变煮沸时间和稀释度来优化不同的Ig-碎片。一般来说，较小的目标分子需要较长的沸腾时间。

试剂制备·微滴度条准备使用。

·1PBS-Tween片应溶于500毫升超纯水中。

所需PBS-Tween的数量取决于洗涤过程。 再来一次。确保为所使用的程序准备足够的PBS-Tween。应在PBS-Tween中稀释HR P共轭抗蛋白LpAb。使用前不久稀释。

EC-Blue增强TMB底层 已经准备好使用了。

停止解决方案已准备好使用。

检查法，检验法，试验过程

使用前让所有试剂达到室温.

.1.准备参考标准品和试验样品（pH-调节，稀释，煮沸和离心）..仔细混合样品，无需再悬浮 在把它们添加到井中之前，先把球团磨碎。建议运行所有样品一式两份（见下面建议的板块布局）..

2.添加100μl/井的参考标准，空白样本，和Pr 分离测试样本。

3.封板，室温孵育2小时..

4.将盘子倒空，用350μl PBS-Tween/井用ELIS A板垫圈清洗3次，或用灌注井的方法清洗3次 用洗好的瓶子到顶部。将平板倒置在吸水纸上，使其在洗涤后*清空。

5.在每口井底部加入100μl稀释的结合抗体。小心 不要用抗体溶液污染井壁。

6.封板，室温孵育2小时..

7.清空盘子，用350μl PBS-Tween/wel洗6次 我使用ELIS A板垫圈，或者用一个清洗瓶把井填到顶部。将平板倒置在吸水纸上，使其在洗涤后*清空。

8.添加100μl EC-Blue E 每口井都有Nhanced（TMB底物溶液）。加入基板后仔细敲击板。

9.在室温下孵育10分钟。让盘子远离阳光直射 在孵化过程中。

 

10.在每口井中加入50μl的停止溶液。保持所有样品加入底物和停止溶液之间的相同时间间隔。在加入停止溶液后，小心地敲击板。 一定要混合底物和停止溶液。

11.在450n m处的光密度的光度测量应在15分钟内进行。

 

结果分析

蛋白质L浓度·计算空白样品

测试样品和参考标准曲线的A450平均值。

·以减数校正背景 空白样品的平均吸光度值。在x轴（对数标度）和A450上绘制蛋白质L浓度（ng/ml）从参考标准曲线中获得的值。 y轴。

如果使用计算机曲线拟合，宜使用四参数或五参数Logistic方程.

.通过findi从图表中获取样品中的蛋白质L浓度（ng/ml） 相应的蛋白质L浓度在你的x轴上，从你的样本值A450在y轴上。

记住调整样品稀释度，以获得你的ORI中的浓度。 原始样本。

 

性能.对于不含Ig或Ig-碎片的样品，试剂盒的测量范围至少为0.5-60ng/ml的蛋白L..对于含有Ig的样品，检测的灵敏度可能降低 或者ig-碎片。