重组赖氨酰内肽酶RLys-C

重组赖氨酰内肽酶RLys-C

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重组赖氨酰内肽酶RLys-C重组赖氨酰内肽酶RLys-C

重组赖氨酰内肽酶RLys-C



◆概述


赖氨酰内肽酶最早从土壤细菌无色杆菌Achromobacter lyticus中分离得到,能够特异性识别与切割肽链中Lys羧基端肽键,常被用于蛋白测序及Lys-X化合物的酶催化合成。

艾美迪选用Achromobacter lyticus来源的,克服大肠杆菌重组表达技术难题进行制备。本品最适pH 9.0~9.5,等电点为pH 6.9~7.0;最适反应温度30~37℃,50℃以上稳定性下降。在适宜温度下,该酶稳定性良好,在4 mol/L尿素或0.2%SDS溶液中30℃孵育6 hr后,生物活性未发生降低。可广泛用于蛋白组学分析,蛋白、抗体类药物质量检测,多肽、蛋白类产品制备工艺中。

 


◆特性


● 高比活性,高特异性,可消化难以酶切的位点,空间构象复杂或疏水性较强的蛋白(如膜蛋白)同样适用

● 活性稳定,尿素、乙腈等变性剂耐受能力强

● 批量化生产,连续批次质量稳定,批间差小

● 高纯度,重组表达避免了可能存在的杂酶残留(e.g. Arg-C,Lys-N等)



◆来源


重组 E. coli 菌株,其克隆有来自的无色杆菌(A. lyticus蛋白酶I基因。

 


◆酶活定义


0.2 mol/L pH 9.0Tris-HCl缓冲中,温度为37±2℃的条件下, 1 min催化底物AC-Lys-PNA生成1 μmol PNA所需的酶量为一个活性单位(AU)。

 


◆纯度


将 rLys-C以DTT 还原处理后, 还原电泳显示纯度>99%


重组赖氨酰内肽酶RLys-C

◆使用方法


本品为冻干粉,使用前先使用超纯水或25 mmol/L Tris-HCl,pH 8.0~8.5溶解。



◆应用实例


RLys-C酶切重组人门冬胰岛素原(Pro-Insulin-Aspart)

底物Pro-Insulin-Aspart分子量约为7 kDa,含有3个赖氨酸(K),采用 Lys-C 酶切的理论肽段示意图如下:


重组赖氨酰内肽酶RLys-C

酶切条件酶与底物的质量比为 1:10000,在50 mM Tris-HCl,pH 8.5中37℃酶切16 小时。


重组赖氨酰内肽酶RLys-C


峰 A:酶切前肽段 Pro-Insulin-Aspart

峰 B:酶切后 B链+C肽+A链(去引导肽)

峰 C:酶切后B链+A链(去引导肽和C肽)



名称 

RT 

Area 

Area% 

质谱量 

酶切位点 

对应肽段

Pro-Insulin-Aspart
    未酶切对照 

10.45

155.045

100%

7096.94

酶切前

以IMD-RLys-C-酶切产物
(酶:底物1:10000)

11.57

201.6

100%

5724.54

B链+A链

以其他公司重组Lys-C酶产物
(酶:底物1:10000)

10.49

146.9

61.78%

7096.94

酶切前

10.62

81.5

34.29%

6006.84

① 

B链+C肽+A链

艾美迪的 RLys-C 酶切产物为切除引导肽和 C 肽的门冬胰岛素前体,酶切位点①②③均酶切完全。

而其他公司产品仅部分切开酶切位点①,切除效率仅为34.29%,酶切位点②③均未被酶切,未能得到序列正确的门冬胰岛素前体。

◆与其他公司产品对比


底物 

酶切位点对比 

艾美迪 

其他公司重组Lys-C

重组人门冬胰岛素原

(Pro-Insulin Aspart)

分子量约为7 kDa,含有3个K

①PK

++ 

+

②DK

++ 

③GK

++ 

重组人普通胰岛素原

(Pro-Insulin)

分子量约为7 kDa,含有3个K

①PK 

++ 

+

②PK 

++ 

+

②AK 

++ 

+

PJ-10S小肽
分子量约为1 kDa,含有3个K

①DK 

++ 

+


相同底物浓度的酶切条件下艾美迪的 RLys-C 的酶切效率显著高于其他品牌同类产品。以生成的肽段 YDDDDK 计算,艾美迪的RLys-C 的酶切率比其他品牌同类产品高约9倍;以生成的肽段 RGWK 计算,艾美迪的RLys-C的酶切效率比其他品牌同类产品高约8.6倍。



◆产品信息

产品编号 产品名称 规格
RLYS-C0401

RLys-C

重组赖氨酰内肽酶

20 μg
RLYS-C0403

RLys-C

重组赖氨酰内肽酶

1 mg



◆相关产品


产品编号 产品名称 规格
RME0101

    Lys-C + Trypsin

重组赖氨酰内肽酶/重组胰蛋白酶混合装

20 μg
RME0102

Lys-C + Trypsin

重组赖氨酰内肽酶/重组胰蛋白酶混合装

20 μg×5

产品编号 产品名称 规格 储存条件 其他
IRLys-C0401 immobilized RLys-C
固定化重组赖氨酰内肽酶
1.0 mL -15℃以下 1.0 mL含1.0 mg
MDRK0401 RLys-C ELISA Kit
重组赖氨酰内肽酶检测试剂盒
96孔 -15℃以下

检测范围:

1.0~4000 ng/mL


※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。


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重组双碱性氨基酸内肽酶检测试剂盒

重组双碱性氨基酸内肽酶检测试剂盒

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重组双碱性氨基酸内肽酶检测试剂盒

重组双碱性氨基酸内肽酶检测试剂盒



◆原理

本试剂盒应用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术测定样品中双碱性氨基酸内肽酶的微量残留。用捕获抗体包被96孔酶标板,制成固相抗体,往酶标板中加入标准品和检测样品,与检测抗体桥联结合,再加入辣根过氧化物酶标记物,经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。在450 nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算待测样品中双碱性氨基酸内肽酶的残留量。

 


◆特点


● 高灵敏度,能检测低至0.98 ng/mL的双碱性氨基酸内肽酶残留

● 采用双抗体夹心法,特异性更高,能检测不同来源的双碱性氨基酸内肽酶

● 提供预包被的96孔板,检测更稳定

● 可拆卸的96孔板,操作更灵活

● 适用于重组蛋白药物残留检测

◆操作流程

重组双碱性氨基酸内肽酶检测试剂盒

◆产品信息


重组蛋白药物或融合表达工艺中,使用到了重组或天然的双碱性氨基酸内肽酶进行酶切,可以以本试剂盒进行以检测样品中微量双碱性氨基酸内肽酶残留量。

样品类型

 重组蛋白药物

检测范围

 0.98 ng/mL~4000 ng/mL

检测对象

 天然提取或重组表达的双碱性氨基酸内肽酶:

 imed 重组双碱性内肽酶(产品编号:RKex20202

 imed 重组双碱性内肽酶(产品编号:RKex20204

特点

  ● 可进行定量检测
  ● 高灵敏度
  ● 高特异性
  ● 预包被ELISA板(可拆卸),使用方便
  ● 可用于自动化

有效期

 12个月

◆产品列表


产品编号

产品名称

产品规格

MDRK0201

RKex2 ELISA Kit

重组双碱性内肽酶检测试剂盒

96 wells

◆相关产品


产品编号

产品名称

规格

比活

RKex20202

RKex2

10 mg

10 U/mg

RKex20204

RKex2

10 μg

10 U/mg


※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。


重组赖氨酰内肽酶检测试剂盒

重组赖氨酰内肽酶检测试剂盒

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重组赖氨酰内肽酶检测试剂盒

重组赖氨酰内肽酶检测试剂盒



◆原理


本试剂盒应用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术测定样品中赖氨酰内肽酶(Lys-C)的微量残留。用捕获抗体包被96孔酶标板,制成固相抗体,往酶标板中加入标准品和检测样品,与检测抗体桥联结合,再加入辣根过氧化物酶标记物,经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。在450 nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算待测样品中赖氨酰内肽酶的残留量。

 


◆特点


● 高灵敏度,能检测低至0.98 ng/mL的赖氨酰内肽酶残留

● 采用双抗体夹心法,特异性更高,能检测不同厂家无色杆菌来源的Lys-C

● 提供预包被的96孔板,检测更稳定

● 可拆卸的96孔板,操作更灵活

● 适用于重组蛋白药物残留检测

◆操作流程

重组赖氨酰内肽酶检测试剂盒

◆产品信息


重组蛋白药物或融合表达工艺中,使用到了重组或提取的无色杆菌来源赖氨酰内肽酶进行酶切,可以以本试剂盒进行以检测样品中微量赖氨酰内肽酶残留量。

样品类型

 重组蛋白药物

检测范围

 0.98 ng/mL~4000 ng/mL

检测对象

 天然提取或重组表达的无色杆菌来源赖氨酰内肽酶:

 imed重组赖氨酰内肽酶(产品编号:RLys-C04

特点

  ● 可进行定量检测
  ● 高灵敏度
  ● 高特异性
  ● 预包被ELISA板(可拆卸),使用方便
  ● 可用于自动化

有效期

 12个月

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
IMD-MDRK0401 RLys-C ELISA Kit 
重组赖氨酰内肽酶检测试剂盒
96 wells