| 型号 | 载体名称 | 出品公司 | 载体用途 |
| VMA0370 | pRSV-rev | Addgene | 慢病毒载体 |
Rev cDNA expressing plasmid in which the joined second and third exons of HIV-1 rev are under the transcriptional control of RSV U3 promoter.
Part of the 3rd generation packaging system. Please note that most of Trono lab lentiviral vectors can only be used with the 2nd generation packaging system. See notes for pMDLg/pRRE.
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS
适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS
适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒
外泌体等细胞外囊泡（EV: Extracellular Vesicle）不仅参与排放生物体内的废弃物，同时也是细胞间的通信媒介。根据分泌的细胞不同，EV的特性及其内含物（核酸、蛋白质、脂质等）也有所差异，目前正在尝试将参与疾病的细胞来源EV及其内含物作为生物标记应用于“液体活检”，即通过体液样品诊断疾病。
为实现液体活检的开发和应用，需要从大量的样品中高效地分离和纯化EV。但超速离心法等传统方法单次可处理的样品数有限，从多个样品中分离和纯化EV需要花费庞大的人力和物力。
因此，FUJIFILM Wako开发了EV分离纯化用试剂盒MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS，适用于提取核酸和蛋白质的自动提取设备（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。本试剂盒采用与金泽大学的华山教授共同开发的EV分离纯化技术“PS亲和法”1），配合自动提取设备，可同时分离和纯化高纯度且低损伤EV的样品上限为96份。
◆产品概要
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS是使用PS亲和法分离和纯化细胞外囊泡（EV）的试剂盒，适用于自动提取设备（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。由于可从多达96份样品中分离和纯化EV，因此也适用于利用EV进行生物标记的探索和高通量筛选 (High-throughput screening，HTS) 。
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特点 ● 配合自动提取设备，同时可分离和纯化EV的样品上限为96份 ● 使用自行研发的分离纯化技术“PS亲和法”，可分离高纯度且低损伤 的EV。 |
适用样品（示例） ● 细胞培养上清 ● 血清 ● 血浆 ● 尿液 ● 唾液 |
适用自动提取设备（分离成果经FUJIFILM Wako验证的设备）
● KingFisher™ Flex（Thermo Fisher Scientific等）
与手动款试剂盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）的区别
比较本试剂盒与手动分离纯化试剂盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2, 产品编号：290-84103），两者的区别如下表所示。另，EV的回收效率基本持平。（参考“性能数据”）
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自动提取 （MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS） |
手动提取 （MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2） |
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Tim4和磁珠的结合方法 |
直接与磁珠结合 |
通过生物素-亲和素系统与磁珠结合 |
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洗脱缓冲液中的表面活性剂浓度 |
高 （抑制了磁珠的损耗） |
低 |
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洗脱缓冲液中的EDTA浓度 |
高 （减少了洗脱步骤的次数） |
低 |
◆原理
PS亲和法是FUJIFILM Wako研发的EV分离方法，使用了与存在于EV表面的磷脂酰丝氨酸（PS）特异性结合的Tim4。
通过PS-Tim4结合的高特异性和螯合剂，可在完整状态下温和地洗脱高纯度EV。
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特异性结合
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洗脱
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◆实验方案
使用KingFisher™ Flex分离纯化EV（进行从亲和反应到洗脱一系列过程时）
※将亲和反应和洗脱步骤作为单独的程序分别进行，并使用新的tip comb进行洗脱，可能可以减少样品中的杂质。更多信息请参阅使用说明书。
实验方案的详细内容和设置示例请查阅使用说明书。
◆数据
与手动试剂盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）比较的性能数据
通过NTA，比较分离的粒子数
使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto，自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual，手动提取)，从血清、肝素血浆、尿液、细胞培养上清（COLO201）中分离和纯化EV。通过Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)确认EV的粒子数
【结果】
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒获得了相同程度的粒子数。
通过ELISA，比较分离的粒子数
使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手动提取)，从血清、肝素血浆、尿液、细胞培养上清（COLO201）中分离和纯化EV。然后使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) （产品编号：298-80601）确认EV的回收率。
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【结果】
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒获得了相同程度的回收率。
通过蛋白质组学分析，比较分离的蛋白质种类、蛋白量
使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手动提取)分离和纯化EV。蛋白质组学分析回收的EV溶液。
（1）鉴定的蛋白质种类
【结果】
在4次实验中，MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS与手动试剂盒相比，鉴定的蛋白质数量始终更多、再现性更高。
（2）EV标记蛋白质的量
【结果】
分别使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒进行分离的EV中所含的EV标记蛋白质之间并无显著差异，自动化对EV的回收率没有影响。
（3）非EV标记的量（以白蛋白为例）
【结果】
与手动试剂盒相比，使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS纯化分离的非EV标记物白蛋白量更少，表明可回收杂质更少的EV。
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参考文献
1） Nakai, W. et al.: Sci. Rep. 6(1), 1(2016).
A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 293-96401 | MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS HTS用MagCapture™ EV提取试剂盒PS |
96 tests | 基因研究用 | – |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 294-84101 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS Ver.2 |
2 tests | 基因研究用 | – |
| 290-84103 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS Ver.2 |
10 tests | 基因研究用 | – |
| 适用于从10 mL以下的细胞培养上清以及体液样品中分离和纯化EV |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 131-19491 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化分离柱 PS |
1 mL | 基因研究用 | – |
| 137-19493 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化分离柱 PS |
5 mL | 基因研究用 | – |
| 295-96601 | MassivEV™ Purification Buffer Set MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化缓冲液套装 |
1mL×10回用 (5mL×2回用) |
基因研究用 | – |
| 适用于从10 mL至公升级别规模的细胞培养上清中分离和纯化EV |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 058-09261 | EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（超滤用） |
1 mL | 基因研究用 | – |
| 050-09461 | EV-Sav™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent for in vivo EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（动物体内实验用) |
1 mL | 基因研究用 | – |
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MassivEV™ EV纯化分离柱 PS/MassivEV™ EV纯化缓冲液套装
用于大规模纯化外泌体等细胞外囊泡的分离柱
MassivEV™ EV纯化分离柱 PS/MassivEV™ EV纯化缓冲液套装
用于大规模纯化外泌体等细胞外囊泡的分离柱
以外泌体为代表的细胞外囊泡(EV: Extracellular Vesicles)是由细胞释放的脂质双分子层微囊泡，内含核酸、蛋白和脂质等。作为生物体内细胞间的通信媒介，外泌体相关的研究成为免疫、癌症、神经和代谢等多个领域的研究热点。
EV的应用领域广泛，有望应用于治疗药物、生物标志物和药物递送系统 (DDS)。尤其是间充质干细胞(MSC: Mesenchymal stem cell)分泌的EV具有抗炎、抗纤维化和组织修复等作用1），除医疗领域外，在化妆品和食品等领域也备受关注。
EV的实际应用需要能够高效且大规模分离和纯化高纯度EV的技术。富士胶片和光采用与金泽大学医学系免疫学的华山教授共同开发的分离和纯化技术“PS亲和法”2），开发了用于大规模纯化EV的MassivEV™ EV Purification Column PS（MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化分离柱 PS）。配合使用专用的缓冲液MassivEV™ Purification Buffer Set（MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化缓冲液套装），可从支持规模放大的细胞培养上清中简易分离和纯化EV。
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MassivEV™ EV Purification Column PS |
MassivEV™ Purification Buffer Set |
◆产品概要
MassivEV™ EV Purification Column PS和MassivEV™ Purification Buffer Set是用于从大规格细胞培养上清中分离和纯化外泌体等细胞外囊泡（EV）的分离柱和专用缓冲液。采用与EV膜表面的磷酯酰丝氨酸（PS）钙离子依赖性结合Tim4的“PS亲和法”*，可简易纯化高纯度EV。
*利用与EV膜成分的磷酯酰丝氨酸（PS）特异性结合Tim4（(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4)）的纯化方法。即利用与PS钙离子依赖性结合Tim4的性质，在钙离子存在下，固定在载体上的Tim4可捕获样品中的EV。通过清洗去除杂质后，加入EV Elution Buffer（螯合剂），低损伤状态下从载体上的Tim4的洗脱和纯化EV的方法。
◆特点
● 可从大规格（10 mL至公升级别规格）细胞培养上清中高效分离和纯化高纯度EV
● 无需切向流过滤（TFF）系统等昂贵设备 ※只需一个蠕动泵
表1 从200 mL间充质干细胞培养上清中分离和纯化EV的对比（富士胶片和光评估）
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MassivEV™ |
TFF+ AEX※ |
TFF+SEC※ |
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可纯化的EV |
PS阳性EV |
取决于样品 |
取决于样品 |
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纯度 |
高 |
低 |
低 |
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纯化步骤数 |
1 个步骤 – PS 亲和法 |
2 个步骤 – TFF 系统 – 阴离子交换色谱法 |
2 个步骤 – TFF 系统 – 尺寸排阻色谱法 |
|
EV粒子产量（参考值） |
1.7×1011 particles |
1.1×1011 particles |
0.7×1011 particles |
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纯化所需时间 |
8 h |
10 h |
10 h |
※AEX: 阴离子交换色谱法; SEC:尺寸排阻色谱法
<参考> 一只小鼠的EV建议给药量3-5）：1.0×109 particles/mouse
◆适应性
细胞培养上清（MSC等）：10 mL至公升级别规格
※ 从10 mL以下的细胞培养上清中分离EV时，请使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2（产品编号：290-84103）
◆处理样品量
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1 mL (产品编号：131-19491) |
5 mL (产品编号：137-19493) |
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样品量※1 |
200 mL |
1 L |
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动态结合能力※2 |
5×1011 particles/mL 树脂 |
2.5×1012 particles/5 mL树脂 |
※1 MSC细胞培养上清中一次纯化可处理的大概样品量。样品处理量因细胞培养上清中所含的EV粒子数而异。处理同一样品时，可重复使用分离柱，已确认最多可使用五次（初次使用1次、重复使用4次）。
※2 使用MSC来源EV的研究结果。可能因细胞种类等条件而异。
◆原理
PS亲和法利用与EV膜表面的磷酯酰丝氨酸（PS）特异性结合的Tim4，是富士胶片和光开发的EV分离方法。
PS-Tim4结合的高特异性配合螯合剂的温和洗脱，可使EV在完整状态下高纯度分离。
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结合
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洗脱
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图1 MassivEV™ EV Purification Column PS（PS亲和法）分离和纯化细胞外囊泡的原理 |
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◆实验方案
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◆数据
性能数据
与传统方法对比
在增殖培养基（MSCulture™/ 10% FBS)及EV生产培养基（EV-Up™）中培养骨髓来源的MSC，回收细胞培养上清后，使用0.22 μm过滤器过滤。取200 mL经过滤处理的细胞培养上清用作样品，采用以下4种方法进行分离和纯化。纯化后的EV溶液分别使用Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)和ELISA进行分析。
<分离方法>
MassivEV™ MassivEV™ EV Purification Column PS / MassivEV™ Purification Buffer Set (本产品, PS亲和法)
TFF 仅切向流过滤（500 kDa）
TFF+AEX 切向流过滤（500 kDa）＋阴离子交换色谱法
TFF+SEC 切向流过滤（500 kDa）＋尺寸排阻色谱法
（1）使用NTA 进行粒子分析
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【结果】
与TFF相比，MassivEV™ 纯化得到的粒子数量少，但与 TFF+AEX 或 TFF+SEC 相比，MassivEV™ 纯化得到的粒子数量更多
（2）使用CD63 ELISA和CD81 ELISA的EV回收率比较（n=3）
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【结果】
相比传统方法，使用MassivEV™ 的EV回收率更高。
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产品使用说明书
说明书.pdf
参考文献
1. Phinney, D. G. and Pittenger, M. F.: Stem cells, 35(4), 851(2017).
Concise review: MSC-derived exosomes for cell-free therapy
2. Nakai, W. et al.: Sci. Rep. 6(1), 1(2016).
A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles
3. Mansouri, N. et al.: JCI insight, 4(21), e128060(2019).
Mesenchymal stromal cell exosomes prevent and revert experimental pulmonary fibrosis through modulation of monocyte phenotypes
4. Angioni, R. et al.: Int. J. Mol. Sci., 21(22), 8874(2020).
Administration of human MSC-derived extracellular vesicles for the treatment of primary sclerosing cholangitis: preclinical data in
MDR2 knockout mice
5. Perets, N. et al.: Mol. Autism, 11(1), 65(2020).
Exosomes derived from mesenchymal stem cells improved core symptoms of genetically modified mouse model of autism Shank3B
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 131-19491 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化分离柱 PS |
1 mL | 基因研究用 | – |
| 137-19493 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化分离柱 PS |
5 mL | 基因研究用 | – |
| 295-96601 | MassivEV™ Purification Buffer Set MassivEV™ 细胞外囊泡（EV）纯化缓冲液套装 |
1 mL×10次用 (5 mL×2次用) |
基因研究用 | – |
| 以上MassivEV™ EV Purification Column PS、MassivEV™ Purification Buffer Set请配合一同使用 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 132-19345 | MSCulture™ High Growth Basal Medium MSCulture™ High Growth基础培养基 |
500 mL | 细胞培养用 | – |
| 133-19331 | MSCulture™ High Growth Supplement MSCulture™ High Growth添加剂 |
5 mL | 细胞培养用 | – |
| 以上MSCulture™ High Growth基础培养基、MSCulture™ High Growth添加剂请配合一同使用 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 053-09451 | EV-Up™ EV Production Basal Medium for MSC, AF EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用基础培养基，无动物源成分 |
95 mL | 细胞培养用 | – |
| 298-84001 | EV-Up™ MSC EV Production Supplement, AF EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用添加剂，无动物源成分 |
100 mL用 | 细胞培养用 | – |
| 以上EV-Up™基础培养基、EV-Up™添加剂请配合一同使用 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 294-84101 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™外泌体提取试剂盒PS Ver.2 |
2 tests | 基因研究用 | – |
| 290-84103 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS Ver.2 |
10 tests | 基因研究用 | – |
| 适用于从10 mL以下的细胞培养上清和体液样品中分离和纯化EV |
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EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒
EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒
EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒是一款可实现外泌体等细胞外囊泡（EV: Extracellular vesicle）内部蛋白检测的前处理试剂。至今研发的PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒系列和 PS Capture™ 外泌体流式试剂盒的检测对象仅限于外泌体表面标记物。但是，通过使用EV-Perm™处理外泌体样品，可提高外泌体的膜通透性，使抗体渗透到外泌体内部，从而检测存在于内部的标记蛋白。
※ 请配合PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒和 PS Capture™ 外泌体流式细胞术试剂盒使用本试剂。另外，检测抗体需单独制备。
◆特点
● 试剂盒的试剂（3种）可提高外泌体的膜渗透性
● 配合使用ELISA试剂盒和流式试剂盒，可检测外泌体内部的蛋白
● 除纯化外泌体外，还可用于细胞培养上清和体液样品
◆适用样品
● 纯化外泌体（细胞外囊泡）
● 细胞培养上清
● 体液（血清和血浆）样品
◆内部抗原检测原理
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① 捕获外泌体 ELISA板或磁珠固定化的Tim4蛋白 与外泌体表面的磷脂酰丝氨酸结合 |
② 提高膜渗透性 通过添加EV-Perm™， 提高外泌体的膜渗透性 |
③ 检测内部抗原 使抗体可渗透到外泌体内部， 并检测蛋白 |
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◆应用实例
使用ELISA试剂盒检测内部标记物
使用EV-Perm™对外泌体样品进行渗透预处理，对从HEK293T细胞培养上清中纯化的外泌体内部的Alix，以及从H4细胞培养上清中纯化的外泌体内部的α-synuclein使用PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒（链霉亲和素HRP）进行检测。
【结果】通过渗透处理，使用ELISA试剂盒可检测外泌体内部的Alix、α-synuclein。
使用流式试剂盒检测内部标记物
使用EV-Perm™渗透处理，对从HEK293T细胞培养上清中纯化的外泌体内部的Alix、以及外泌体表面的CD63使用PS Capture™ 外泌体流式试剂盒进行检测。
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【结果】通过渗透处理，使用流式试剂盒可检测外泌体内部的Alix。
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相关资料
想要使用ELISA Kit和EV-Perm™定量分析EV内部表达的标记蛋白A，有何建议的方法？
1. 准备能分泌含标记蛋白A的外泌体的细胞株（若没有，也可使用含有带标记蛋白A的外泌体的体液样品）
2. 从上述细胞株的培养上清（或体液样品）中纯化外泌体
2. ⇒通过Western blotting或外泌体提取液的ELISA检测确认标记蛋白A的存在
2. ⇒检测纯化外泌体的蛋白浓度或粒子数
3. 进行预实验（确认EV-Perm™ 处理、以及使用的生物素标记抗体是否有效）。
2. （1）制备上述纯化外泌体的系列稀释（一种通过一系列步骤稀释样品的方法），根据试剂盒的实验操作步骤，使用PS Capture™ ELISA试剂盒分
2. （1）别在有/无EV-Perm™ 处理的条件下，确认是否能检测出CD63与标记蛋白A的信号。
2. （2）在探讨（1）的同时，还需要讨论合适的生物素标记抗体的稀释倍数、链霉亲和素-HRP的稀释倍数（确认作为对照检测的CD63信号是否在
2. （1）有/无EV-Perm™ 处理的条件下均能被检测。此外，与未经EV-Perm™ 处理的样品相比，经EV-Perm™ 处理检测到的CD63信号略低。并
2. （1）且，适用于检测标记蛋白A和检测CD63的生物素标记抗体的稀释倍数、链霉亲和素-HRP的稀释倍数可能有所差异。）
上述讨论中，在经EV-Perm™ 处理的条件下如检测到标记蛋白A的信号，建议在经EV-Perm™ 处理的ELISA检测的450 nm吸光度值（减去620 nm亚波长吸光度值后的值）的0.1~0.2之间讨论纯化外泌体的稀释倍数，并确定制备标准曲线用纯化外泌体的系列稀释。
4. 进行本实验。
4. 制备标准曲线（此步骤需使用进行EV-Perm™ 处理）
2. （1）制备标准品（纯化外泌体）的标记蛋白A信号落在ELISA检测的450 nm吸光度（减去620 nm亚波长吸光度后的值）的0.1~0.2之间的系列
2. （1）稀释。 稀释使用试剂盒配套的Reaction Buffer。
2. （2）制备在已设定的标准曲线吸光度范围内的样品稀释液（建议在预实验时讨论、确定合适的稀释倍数）
2. 检测、计算样品浓度（此步骤需要使用ELISA试剂盒进行处理）
2. （1）对N=2时的标准品的系列稀释液和样品稀释液进行检测。
2. （2）根据标记蛋白A的检测吸光度制备标准曲线，计算各样品的浓度（标准品的相对浓度）。
2. （3）比较各样品的标记蛋白A的浓度。
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 294-85701 | EV-Perm™ Permeabilization Pretreatment Kit for Exosome Membrane EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒 |
1 kit | – | – |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 297-79201 | PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Anti Mouse IgG POD) PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒（抗小鼠IgG POD） |
96 tests | – | – |
| 298-80601 | PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) PS Capture™ 外泌体ELISA Kit （链霉亲和素HRP） |
96 tests | – | – |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 297-79701 | PS Capture™ Exosome Flow Cytometry Kit PS Capture™ 外泌体流式试剂盒 |
300 tests | – | – |
|
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纯化细胞外囊泡（EV）用miRNA提取试剂盒
纯化细胞外囊泡（EV）用miRNA提取试剂盒
外泌体等细胞外囊泡（EV: Extracellular vesicle）中含有分泌细胞来源的microRNA（miRNA），其作用备受关注。通常情况下，EV中的miRNA会通过二代测序或微阵列进行全面分析，而从外泌体提取miRNA的工序是与分析结果直接相关的重要步骤。FUJIFILM Wako开发了更适合从纯化EV中提取RNA的试剂盒——纯化细胞外囊泡（EV）用miRNA提取试剂盒
◆产品概要
纯化细胞外囊泡（EV）用miRNA提取试剂盒可通过纯化柱从外泌体等EV中提取包含miRNA在内的总RNA。本产品仅需少量缓冲洗脱液（20 μL）即可回收高浓度的RNA，因此也适用于二代测序（NGS）等。
◆特点
● 经优化，更适合从纯化EVs中提取RNA
● 仅需少量洗脱缓冲液（20 μL）即可回收高浓度的RNA
● 相较于常规产品，RNA的回收率更高
◆适用样品
样品：从细胞培养上清液、血清/血浆中纯化的外泌体溶液
※ 目前暂无从细胞培养上清液、血清/血浆中直接提取RNA的实例
兼容下游分析方法：RT-qPCR、微阵列、NGS等
◆提取流程图
◆性能数据
通过NGS进行的外泌体miRNA分析
使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2从分离外泌体中提取RNA，进行NGS分析。
【结果】与其他公司常规产品相比，本产品检测的miRNA数量更高。
与常规产品的RNA回收量比较
使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2从脐带来源间充质干细胞中分离外泌体，并用QuantiFluor® RNA System （Promega）和RT-qPCR分别检测各试剂盒提取的RNA。
QuantiFluor® 是Promega Corporation的商标以及注册商标。
【结果】与常规产品相比，本产品显示更高的RNA回收率。
◆产品列表
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产品编号 |
产品名称 |
产品等级 |
产品规格 |
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294-84601 |
microRNAExtractor® Kit for Purified-EV |
基因研究用 |
20 tests |
相关产品
分离/纯化试剂盒
|
产品编号 |
产品名称 |
产品等级 |
产品规格 |
|
294-84101 |
MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 |
基因研究用 |
2 tests |
|
290-84103 |
10 tests |
蛋白分析试剂
| 产品编号 | 产品名称 | 产品等级 | 产品规格 |
| 294-85701 |
EV-Perm™ Permeabilization Pretreatment Kit for Exosome Membrane EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒 |
基因研究用 | 1 kit |
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EV-Up™ 间充质干细胞专用外泌体生产用培养基
EV-Up™ 间充质干细胞专用外泌体生产用培养基
EV-Up™ 间充质干细胞专用外泌体生产用培养基是一种间充质干细胞（MSC）专用的外泌体（EVs）生产培养基。只要将EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用添加剂，无动物源成分添加至EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用基础培养基，无动物源成分中配成完全培养基即可使用。本品不含血清及动物源成分， 适用于多种组织来源的MSCs的培养。
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EV-Up™ EV Production Basal Medium for MSC, AF （产品编号：053-09451） |
EV-Up™ MSC EV Production Supplement, AF （产品编号：298-84001） |
◆特点
● 比血清培养基的外泌体分泌量高
● 培养的外泌体活性高
● 维持MSC的高存活率
◆适用细胞
适用于多种组织来源的MSC
细胞种类
骨髓来源的MSC，脂肪来源的MSC，脐带基质来源的MSC等
◆使用方法
*1：往EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用基础培养基，无动物源成分（产品编号：053-09451）中添加了EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用添
*1：加剂，无动物源成分（产品编号：298-84001）即为EV-Up™ 完全培养基
6孔板培养
1. 将各种间充质干细胞以5×103的密度来铺板，然后用增殖培养基（血清培养基或无血清培养基）培养至80-90%汇合。
2. 去除增殖培养基后加入4 mL EV-UP™完全培养基。培养3-5日。
3. 回收培养上清，2,000×g离心20分钟，用干净试管收集离心后的上清液，避免吸入沉淀。
※ 可在培养上清中添加1/100的EV-Save™ 细胞外囊泡吸附抑制剂来抑制试管或吸头等对EV的吸附。
4. 用MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS提取培养上清中的外泌体。
◆应用数据
外泌体粒子数
利用PS亲和法*1从各种培养基的培养上清液中提取外泌体，使用NanoSight的Nano Tracking Analysis技术对外泌体的粒子数进行分析。
*1：在金属离子的存在下，结合分子通过磷脂酰丝氨酸（PS）捕获细胞外囊泡后，再使用螯合剂洗脱的方法。
*1：使用MagCapture™外泌体提取试剂盒PS时，可以通过本方法进行外泌体提取。
*2：Exosome-Depleted FBS
FUJIFILM Wako研发的EV-Up™ 完全培养基，在培养MSC时，释放的外泌体粒子数是D-MEM+10% EV depleted FBS培养的2.6倍左右。另外，FUJIFILM Wako的EV-Up™ 完全培养基与血清培养基相比，可以分泌更多的EV。
抗纤维化活性
用TGFβ刺激培养人胎肺成纤维细胞（TIG3细胞），用PS亲和法从不同培养基的培养上清中提取EV，取5×107 particles/mL提取出的EV，用RT-PCR对纤维化标记物（Collagen III，αSMA）的基因表达水平进行定量，以比较抗纤维化活性。
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使用FUJIFILM Wako研发的EV-Up™ 完全培养基的EV，强力抑制了由TGFβ引起的纤维化相关基因的表达。由此可见，FUJIFILM Wako的EV-Up™ 完全培养基能培养出的外泌体活性更高。
细胞存活率
将在血清培养基中扩增培养的人骨髓来源的MSC用不同培养基培养5天，然后检测产生外泌体后的细胞存活率。
FUJIFILM Wako 的EV-Up™ 完全培养基培养的MSC与D-MEM+10% EV-depleted FBS相比，具有同样高的细胞存活率。
外泌体标志物蛋白表达
用PS亲和法从培养上清液中提取外泌体，并通过ELISA检测标记蛋白CD9、CD63和CD81的表达。
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FUJIFILM Wako的EV-Up™ 完全培养基与其他血清培养基相比，不同外泌体标记分子的表达更好。
◆产品列表
EV-Up™ MSC专用外泌体生产用培养基
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产品列表 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
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053-09451 |
EV-Up™ EV Production Basal Medium for MSC, AF EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用基础培养基， 无动物源成分 |
for Cell Culture |
95 mL |
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298-84001 |
EV-Up™ MSC EV Production Supplement, AF EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用添加剂， 无动物源成分 |
for Cell Culture |
5 mL（100 mL用） |
外泌体防吸附&冻结保护试剂
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产品列表 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
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058-09261 |
EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent |
for Genetic Research |
1 mL |
外泌体提取和纯化试剂
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产品列表 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
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299-77603 |
MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS |
for Genetic Research |
2 tests |
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293-77601 |
10 tests |
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290-80301 |
PS Capture™ Exosome Isolation Resin Kit |
for Genetic Research |
1 kit |
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294-84101 |
MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 |
for Genetic Research |
2 tests |
|
290-84103 |
10 tests |
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
点击此处下载产品宣传页。
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