Hansabiomed HBM-FACS-PESL 说明书

Hansabiomed HBM-FACS-PESL 说明书

Exo-FACS

外切FACS

Exo-FACS允许从生物流体或细胞培养基中分离外泌体,并对外来体标记物进行FACS分析。该试剂盒由用于外泌体分离的EXO-Prep试剂,用于整体捕获预分离的外泌体的4μm珠子,来自细胞培养上清液或人生物体液的冻干外来体组成,作为阳性对照。随后使用针对外来体相关抗原的适当检测抗体进行外来体蛋白(膜表达或内部)的表征。HBM提供不同的Exo-FACS试剂盒,用于从人类生物流体(血浆,尿液,血清,唾液)和细胞培养上清液中染色外泌体标记物。Exo-FACS含有20个反应的试剂(冻干的外泌体,珠子,抗体和缓冲液)。

应用:通过FACS进行外泌体分离和外泌体标记表征。Exosome综合分析。

优点:随时可用。无需初始外泌体纯化。包括用于阳性对照的冻干外泌体标准品。用户友好,适合多种标记分析。

 

Exo-FACS kit for FACS analysis of exosomes derived from human saliva

 

Exo-FACS试剂盒,用于FACS分析源自人唾液的外泌体

产品编号: HBM-FACS-PESL 

Exo-FACS即用型试剂盒用于FACS分析。

 

样品类型

唾液

起始材料

Exo-FACS含有用于反应的试剂和抗体。外泌体标准品必须在100μl去离子水中重建。珠子可以用于外泌体捕获。必须在样品缓冲液中适当稀释一抗和二抗。

分析类型

Kit允许通过FACS快速方便地检测一组纯化的外泌体(由客户选择)中的外泌体标记物。Kit提供针对常见外泌体标记的专有抗体作为阳性对照。

FACS-珠

4μmAldheyde-Sulfate乳胶珠(100μl)。

产品概述

HBM提供即用型试剂盒,用于外泌体的定性FACS分析。用于外泌体表征的Exo-FACS测定由4μm珠子组成,其用于从细胞培养上清液或人生物体液中直接整体捕获预纯化的,经验证的和冻干的外来体。随后通过使用针对外来体相关抗原的适当检测抗体进行外来体蛋白(膜表达或内部)的表征。Exo-FACS可通过HBM可用抗体定制。

抗体

用于外来体标记物检测的一抗作为阳性对照(40μl)。 反CD9

二抗Alexa488,20μl。

外泌体标准

1小瓶(100μg)HBM-外来体标准品(冻干的),来自人唾液  (颗粒数/ ml 1× 10 10)。

样本缓冲区

抗体孵育缓冲液。

装运和储存

所有试剂均按照产品说明书中的建议在° C和储存条件下运输

截止日期

12个月。

 

 

 

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Hansabiomed HBM-FACS-PES说明书

Hansabiomed HBM-FACS-PES说明书

Exo-FACS

外切FACS

Exo-FACS允许从生物流体或细胞培养基中分离外泌体,并对外来体标记物进行FACS分析。该试剂盒由用于外泌体分离的EXO-Prep试剂,用于整体捕获预分离的外泌体的4μm珠子,来自细胞培养上清液或人生物体液的冻干外来体组成,作为阳性对照。随后使用针对外来体相关抗原的适当检测抗体进行外来体蛋白(膜表达或内部)的表征。HBM提供不同的Exo-FACS试剂盒,用于从人类生物流体(血浆,尿液,血清,唾液)和细胞培养上清液中染色外泌体标记物。Exo-FACS含有20个反应的试剂(冻干的外泌体,珠子,抗体和缓冲液)。

应用:通过FACS进行外泌体分离和外泌体标记表征。Exosome综合分析。

优点:随时可用。无需初始外泌体纯化。包括用于阳性对照的冻干外泌体标准品。用户友好,适合多种标记分析。

 

Exo-FACS kit for FACS analysis of exosomes derived from human serum

Exo-FACS试剂盒,用于FACS分析源自人血清的外泌体

 

Product Code: HBM-FACS-PES

Exo-FACS即用型试剂盒用于FACS分析。

 

样品类型

血清

起始材料

Exo-FACS含有用于反应的试剂和抗体。外泌体标准品必须在100μl去离子水中重建。珠子可以用于外泌体捕获。必须在样品缓冲液中适当稀释一抗和二抗。

分析类型

Kit允许通过FACS快速方便地检测一组纯化的外泌体(由客户选择)中的外泌体标记物。Kit提供针对常见外泌体标记的专有抗体作为阳性对照。

FACS-珠

4μmAldheyde-Sulfate乳胶珠(100μl)。

产品概述

HBM提供即用型试剂盒,用于外泌体的定性FACS分析。用于外泌体表征的Exo-FACS测定由4μm珠子组成,其用于从细胞培养上清液或人生物体液中直接整体捕获预纯化的,经验证的和冻干的外来体。随后通过使用针对外来体相关抗原的适当检测抗体进行外来体蛋白(膜表达或内部)的表征。Exo-FACS可通过HBM可用抗体定制。

抗体

用于外来体标记物检测的一抗作为阳性对照(40μl)。 反CD9

二抗Alexa488,20μl。

外泌体标准

1瓶(100μg)HBM-外来体标准品(冻干的),来自人血清  (颗粒数/ ml 1× 10 10)。

样本缓冲区

抗体孵育缓冲液。

装运和储存

所有试剂均按照产品说明书中的建议在4 ° C和储存条件下运输。

截止日期

12个月。

 

应用:

使用ExoTEST进行外泌体捕获和定量可确保在各种样品中进行剂量依赖性外泌体检测。定量可以是相对的和的,因为测定校准使得能够计算每个样品的近似外来体量。

通过实施捕获和检测抗体的不同组合来进行全面的外泌体分析。ExoTEST可以定制用于评估样品中总外泌体群体中的多种抗原。感兴趣的样品的信息蛋白质谱可以与随后的核酸(mRNA或miRNA)提取和来自捕获的外泌体的下游分析组合。

使用ExoTEST的特定诊断应用允许定量评估在正常和病理条件下由差异表达的抗原定义的总循环外泌体和特定外来体亚群。

 

 

 

Hansabiomed HBM-FACS-PEP说明书

Hansabiomed  HBM-FACS-PEP说明书

Exo-FACS

外切FACS

Exo-FACS允许从生物流体或细胞培养基中分离外泌体,并对外来体标记物进行FACS分析。该试剂盒由用于外泌体分离的EXO-Prep试剂,用于整体捕获预分离的外泌体的4μm珠子,来自细胞培养上清液或人生物体液的冻干外来体组成,作为阳性对照。随后使用针对外来体相关抗原的适当检测抗体进行外来体蛋白(膜表达或内部)的表征。HBM提供不同的Exo-FACS试剂盒,用于从人类生物流体(血浆,尿液,血清,唾液)和细胞培养上清液中染色外泌体标记物。Exo-FACS含有20个反应的试剂(冻干的外泌体,珠子,抗体和缓冲液)。

应用:通过FACS进行外泌体分离和外泌体标记表征。Exosome综合分析。

优点:随时可用。无需初始外泌体纯化。包括用于阳性对照的冻干外泌体标准品。用户友好,适合多种标记分析。

 

Exo-FACS试剂盒,用于对来自人血浆的外来体进行FACS分析

Exo-FACS kit for FACS analysis of exosomes derived from human plasma

 

产品编号: HBM-FACS-PEP

 

Exo-FACS即用型试剂盒用于FACS分析。

 

样品类型

等离子体

起始材料

Exo-FACS含有用于反应的试剂和抗体。外泌体标准品必须在100μl去离子水中重建。珠子可以用于外泌体捕获。必须在样品缓冲液中适当稀释一抗和二抗。

分析类型

Kit允许快速简便的外泌体分离和通过FACS检测外泌体标记。

Kit提供针对常见外来体(CD9或CD63)标记的专有抗体和作为阳性对照的一组纯化的外来体标准品。

FACS-珠

4μmAldheyde-Sulfate乳胶珠(100μl)。

抗体

用于外来体标记物检测的一抗作为阳性对照(40μl)。抗CD9。

二抗Alexa488,20μl。

外泌体标准

1小瓶(100μg)HBM-外来体标准品(冻干的),来自人血浆(颗粒数/ ml 1× 10 10)。

样本缓冲区

抗体孵育缓冲液。

装运和储存

所有试剂均按照产品说明书中的建议在4°C和储存条件下运输。

截止日期

12个月。

应用

通过FACS进行外泌体分离和外来体标记表征。

Exosome综合分析。

 

 

cosmobiousa高质量抗人类四跨膜蛋白单克隆

cosmobiousa高质量抗人类四跨膜蛋白单克隆

用抗人类四跨膜蛋白单克隆抗体和OptiPrep™进行外显子的

分离和鉴定

什么是外泌体?

细胞外囊泡(EV;包括经典的外泌体,非经典的外泌体,微囊泡,大的脂质体,凋亡小体,凋亡小泡,自噬性细胞外小泡,两性小体和ARRM)是释放到细胞外环境中的40-1000 nm的膜小泡。和来自大多数细胞类型的体液,包括红细胞,血小板,淋巴细胞,树突状细胞,内皮细胞和肿瘤细胞。这些囊泡根据其分泌机制分为两种。因此,经典囊泡在多囊泡内体中形成,而微囊泡则是从质膜上直接出芽而形成的。尽管经典外泌体成分因其起源的细胞类型而异,但无论它们的起源如何,似乎都可能共享某些分子。这些分子包括四跨膜蛋白(CD9,CD63和CD81),它们被认为是经典外泌体生物发生机制的重要组成部分。因此,研究人员已使用CD9,CD63和CD81来分离和表征经典外泌体制剂的纯度。

在过去的十年中,外泌体作为microRNA(miRNA)载体,疾病生物标志物和潜在的治疗性药物传递载体成为人们关注的焦点。尽管外泌体很重要,但它们的分离和鉴定仍然被认为是重大的科学挑战,特别是在转化为临床需求时。通常,外泌体和其他电动汽车已通过超速离心纯化。技术挑战,时间和成本已导致替代提纯方法的泛滥,其中许多现在可商购获得。虽然据报道外泌体含量包括基因组DNA,RNA,蛋白质和脂质, 

近的地标性论文(杰普森·D。,菲尼克斯·A。,富兰克林·J。希金博特姆·J。,张Q.,齐默曼·L。利勃勒·D。,平·J。,刘Q. Evans,R.,Fissell,W.,Patton,J.,Rome,L.,Burnette,D.,Coffey,R.(2019)。外泌体组成细胞的重新评估177(2),428-445.e18。)结果表明,大多数外泌体分离方法(包括经典的超速离心分离法)都受到来自非囊泡细胞外来源的大量蛋白质和DNA污染的困扰。揭示这种令人惊讶的污染水平的方法包括高分辨率碘克沙醇密度梯度超速离心[将小型EV与非囊泡成分(如穹ault和外泌体)分离)以及使用抗体从人血浆和细胞条件培养基中直接免疫捕获(DIC)至四跨膜蛋白分子CD63,CD9或CD81。

  高质量抗人类四跨膜蛋白单克隆


冷冻电子显微镜检测与抗人CD63抗体结合的外泌体(克隆8A12)。
将外泌体和抗人CD63抗体(克隆8A12)混合并用冷冻电子显微镜(Titan Krios)成像。显示的是外泌体(A)的低温电子显微照片,利用单结合抗体(青色)对外泌体(绿色)进行的三维重建(B),以及外泌体和结合抗体的旋转3D层析成像重建(宜)。图片由冲绳蛋白质断层扫描有限公司提供。 

来自CosmoBio USA的高特异性抗人四跨膜蛋白抗体是使用新型“超净”方法表征和分离经典外泌体的理想试剂。

 

引发四跨素细胞外环
目标 克隆 免疫原 同型 纯化
CD9 12A12 氨基酸113-195:3之间的大的第二胞外环RD和4个跨膜结构域 IgG2b 蛋白G
CD63 8A12 氨基酸104-202:3之间的大的第二胞外环RD和4个跨膜结构域 IgG2a 蛋白G
CD81 12C4 氨基酸36-54:3之间的小的细胞外环RD和4个跨膜结构域 IgG2a 蛋白G

 

人类反应
目标 克隆 反应性 没反应
CD9 12A12 人的 老鼠,老鼠
CD63 8A12 人的 老鼠,老鼠
CD81 12C4 人,牛 老鼠,老鼠

 

多种应用中的高性能
应用 抗CD9(克隆12A12) 抗CD63(克隆8A12) 抗CD81(克隆12C4)
知识产权 + + +
世界银行 + + +
足球俱乐部 + + 未经测试
ELISA法 + + 未经测试
如果 + + 未经测试
卫生组织 + + 未经测试
IEM + + 未经测试
ExoScreen检测 + + 未经测试
体外调理法 + + 未经测试
体内转移测定 + 未经测试 未经测试
带有整体移液器吸头的质谱免疫分析 + 未经测试 未经测试
ExoTrap™外来体分离离心柱 +
膜融合测定 未经测试 + 未经测试
对多种人类生物流体有效
生物流体 抗CD9
(克隆12A12)
抗CD63
(克隆8A12)
抗CD81
(克隆12C4)
等离子体 + + +
培养上清液 + + +
尿 + + 未经测试
脑脊液 + 未经测试 未经测试
胸膜灌洗 未经测试 + 未经测试
牛奶 未经测试 未经测试 +
肝组织 未经测试 未经测试 +
与生物素,Tide Fluor-2 *和Tide Fluor-4 #结合
抗CD9(克隆12A12) 非共轭的
生物素偶联
Tide Fluor™2共轭
Tide Fluor™4共轭
抗CD63(克隆8A12) 非共轭的
生物素偶联
Tide Fluor™2共轭
Tide Fluor™4共轭
抗CD81(克隆4C12) 非共轭的
生物素偶联
Tide Fluor™2共轭
Tide Fluor™4共轭

* Tide Fluor™2(TF2)的光谱特性与荧光素和AlexaFluor®488(Invitrogen)相似。与荧光素相比,TF2具有更强的荧光和更高的光稳定性。另外,它的荧光在pH 3到11之间与pH无关。与FITC标记的抗体相比,TF2标记的抗体显示出更强的荧光和更高的光稳定性。这些特性使TF2成为荧光素的替代品。 
#Tide Fluor™5(TF5)具有与Cy5相同的光谱特性。与Cy5相比,TF5具有更强的荧光性和更高的光稳定性。此外,其荧光在pH 3至11之间与pH无关。与Cy5标记的抗体相比,TF5标记的抗体显示出更强的荧光和更高的光稳定性。这些特性使TF5成为Cy5的替代品。 

具有四跨膜蛋白抗体的经典外来体的超净直接免疫亲和捕获(DIC)

收集后立即将细胞条件培养基在4℃下分别以400× g,2,000× g和15,000× g进行离心分离。将上清液通过0.22mm孔的PES过滤器(Millipore)过滤以产生预先澄清的培养基。随后的所有步骤也都在4°C下进行。如上所述,直接从人血浆中提取外来体的DIC,不同的是在这些情况下,上清液是未经处理,未经稀释和未经过滤的血浆(两轮3000 x g产生离心15分钟)。将预先清除的培养基分为三种方式:将一部分与直接与针对CD63,CD81或CD9的抗体缀合的磁珠一起孵育;将第二部分与缀合有小鼠IgG的磁珠一起温育,并允许温育并进行章动和旋转16小时。将第三部分进行超速离心和洗涤以产生粗制的sEV沉淀物(P120)。孵育后,将珠子在冰冷的0.1%BSA-PBS(pH 7.4,通过0.22mm膜过滤)中洗涤四次,后,在PBS pH 7.4(pH 7.4,通过0.22mm膜过滤)中洗涤一次。 )。后一次洗涤后,立即将负载有外泌体的珠子重新悬浮在细胞裂解缓冲液和LDS样品缓冲液中,在冰上放置30分钟,然后重悬于LDS样品缓冲液中,然后加热至70°C 10分钟以释放蛋白质。通过使用磁铁从悬浮液中除去珠子,并将澄清的裂解物用于免疫印迹分析。在某些情况下,在后的洗涤步骤之后,立即将装载了外来体的珠子裂解以提取DNA。 
(摘自:耶普森D.,菲尼克斯A.,富兰克林J.,希金博瑟姆J.张Q.齐默曼L.利勃勒D.平J.刘Q.埃文斯R.,Fissell,W.,Patton,J.,Rome,L.,Burnette,D.,Coffey,R.(2019)。外泌体组成细胞的重新评估177(2),428-445.e18。) 单击此处

ExoTrap™旋转柱

CosmoBio USA的ExoTrap™外泌体分离旋转柱试剂盒使用旋转柱固定的抗人CD9抗体(克隆12A12)捕获外泌体。可以在30分钟内从人血清,血浆,唾液,尿液和培养上清液中分离出外来体来源的蛋白质和微RNA。 特征:

  • 从血清,血浆,尿液,唾液,培养上清液中回收外泌体
  • 30分钟内高纯度外泌体
  • 旋转柱操作简单

实验实例 
使用ExoTrap™外泌体在50ul SDS样品缓冲液中回收。通过蛋白质印迹分析外泌体标志物表达。 图1.从培养上清液中分离外来体。用抗-CD9(克隆12A12),抗-CD63(克隆8A12)和抗-CD81(克隆12C4)探测293T细胞培养上清液和MKN7细胞培养上清液(20ul /泳道)。图2.从人血浆中分离外来体。用抗CD9(克隆12A12)探测EDTA处理的人血浆(20ul /泳道)。

 

 

OptiPrep™(碘克沙醇


纯化外泌体的宜密度梯度培养基

OptiPrep™是60%碘克沙醇在水中的无菌内毒素测试溶液,密度为1.32 g / ml。 

碘克沙醇是作为X射线造影剂开发的,因此已经进行了严格的临床测试。它是非离子性的,对细胞无毒并且在代谢上是惰性的。碘克沙醇溶液可以在所有有用的密度下制成等渗的。碘克沙醇溶液的粘度和重量克分子渗透压浓度低。 

Optiprep™使用高分辨率密度梯度超速离心技术进行外来体纯化

高分辨率(12%–36%)碘克沙醇密度梯度分级分离膜封闭的sEV与非囊泡(NV)组分将 OptiPrep™(碘克沙醇)密度介质在冰冷的PBS中立即制备,然后用于产生不连续步骤(12 %–36%)的渐变。将sEV的粗颗粒(P120)重悬于冰冷的PBS中,并与冰冷的碘克沙醇/ PBS混合,制成终的36%碘克沙醇溶液。将悬浮液添加到离心管的底部,将碘克沙醇浓度递减的PBS溶液小心地铺在顶部,产生完整的梯度。以相同的方式生成没有样品的相同梯度,以用于稍后确定馏分密度。底部负载的12%–36%梯度在120,000 x下进行超速离心
g下使用SW41 TI摆动铲斗转子(k因子124,贝克曼库尔特)在4°C下放置15h。从梯度的顶部收集了12个1 mL的馏分。使用折射计(ATAGO,东京,日本)从重复的梯度测量分数密度。对于纳米颗粒跟踪分析(NTA),将级分合并并在无颗粒PBS中稀释。为了进行免疫印迹,将每个单独的1 mL馏分转移到新的超速离心管中,在PBS中稀释12倍,然后以120,000 x g的速度进行超速离心使用SW41 TI摆动铲斗转子在4°C下放置4h。将所得沉淀在冰上的细胞裂解缓冲液中裂解30分钟。对于RNA和DNA提取,将级分合并,转移至新的超速离心管中,在PBS中稀释约6倍,并使用SW 32 Ti摆动桶转子在4°C下于120,000 x g进行超速离心4小时。 (摘自:耶普森D.,菲尼克斯A.,富兰克林J.,希金博瑟姆J.张Q.齐默曼L.利勃勒D.平J.刘Q.埃文斯R.,Fissell,W.,Patton,J.,Rome,L.,Burnette,D.,Coffey,R.(2019)。外泌体组成细胞的重新评估177(2),428-445.e18。)

Optiprep™应用说明

  1. 条件培养基中的哺乳动物细胞外泌体和其他微泡
  2. 来自非哺乳动物来源的细胞外囊泡
  3. 细胞内外囊泡运输和囊外复合物-方法学概述
  4. 制备突触小体,突触小体,神经黑色素颗粒和突触小泡–方法学调查
  5. 从各种来源分离水泡和颗粒部分

 

用户报告

 

四跨素抗体

西田青树(Nao Nishida-Aoki) 
国家癌症中心分子与细胞治疗研究所

实验发现

外泌体是脂质双层限定的直径约100nm的囊泡。癌细胞通过分泌促进癌症侵袭和转移的外来体,对周围细胞产生不利影响。我们想知道抑制癌细胞来源的外泌体功能是否会抑制癌症转移。为此,我们使用了与外泌体结合的抗体来抑制源自癌细胞的外泌体的作用。

寻找能识别人乳腺癌细胞外来体的抗体用于具有人乳腺癌细胞的小鼠异种移植模型。首先,我们要检查抗人CD9和抗人CD63是否会结合到从乳腺癌细胞条件培养基分离的外泌体表面。外泌体的小尺寸阻止了常规显微镜的使用。因此,有必要采用免疫电子显微镜。但是,免疫电子显微镜具有挑战性,需要与靶标结合良好的抗体。

抗人CD9(克隆12A12)和抗人CD63(克隆8A12)在免疫沉淀方面具有良好的记录,因此有望在免疫电子显微镜中进行测试。这些试剂很容易检测到CD63。但是,检测CD9之前,需要进行实质性修改,才能成功染色(图1)。另外,出于该实验的目的,重要的是所选抗体对人类而非小鼠具有*的特异性,以防止毒性和脱靶效应。在蛋白质印迹实验中发现该抗体具有非常强的人特异性,可以轻松检测到来自人而非小鼠的CD9和CD63(图2)。

建立了两种抗体的检测方案和人类特异性后,有可能进行体内研究。在乳腺癌的鼠异种移植模型中施用抗人CD9(克隆12A12)和抗人CD63(克隆8A12),以确定是否有可能抑制转移。在此模型中,我们能够成功抑制癌症转移(参考文献1)。我们认为该实验的成功*归因于我们使用的高质量抗体。我希望这些抗体能够帮助更多的人进行研究。

数字


图1.免疫电子显微镜检测外泌体表面上的人CD9和CD63蛋白 
(A)抗人CD9抗体(克隆12A12)在人乳腺癌细胞的外泌体表面上检测到CD9。(B)抗人CD63抗体(克隆8A12)还在人乳腺癌细胞的外泌体表面检测到CD63。 图2.人类和小鼠CD9和CD63蛋白的蛋白质印迹法使用 抗人类CD9抗体(克隆12A12),抗人类CD63抗体(克隆8A12),抗小鼠CD9抗体和抗小鼠CD63抗体来探测含有来自人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231-lucD3H2LN)和鼠类乳腺癌细胞系(4T1-luc)的裂解物。

参考文献

  1. 西田青木(Nishida-Aoki,N.),富永(N. Tominaga),竹下(F.Takeshita),园田H. (2017)循环中的细胞外囊泡破坏作为一种针对癌症转移的新型治疗策略,Mol Ther,25:181-91。

 

小坂伸吉国立 
癌中心
分子细胞治疗研究所

实验发现

外泌体是直径约100 nm的小细胞外分泌脂质双层分隔的囊泡。ISEV(细胞外囊泡学会)建议使用术语细胞外囊泡(EVs)来指代分泌性囊泡的异质类,其中包括衍生自多囊泡内体的囊泡。近的外泌体研究已经开始阐明外泌体在某些疾病中的作用。但是,要了解外泌体的产生机理,必须具有:1)生理学上了解外泌体的作用;2)了解外泌体引起的疾病。阐明癌细胞外泌体分泌的机制可能导致新的癌症治疗方法。

为了追踪外泌体产生的动力学,我们使用抗人CD63抗体(克隆8A12;可从Cosmo Bio USA获得)进行免疫染色实验。使用免疫荧光显微镜,我们在前列腺癌细胞系PC-3M(图1)和结肠癌细胞系HCT116(图2)中观察到许多CD63阳性颗粒样结构。将来,我们将癌细胞与抗人CD63抗体(克隆8A12)和其他内体标记物抗体共同染色,以探索癌细胞产生外泌体的能力。抗人CD63抗体(克隆8A12)的高特异性使其可以成功用于体内靶向外泌体以抑制癌症转移。

数字


图1. CD63在前列腺癌细胞系PC-3M中的 
定位通过Alexa Fluor™488标记的抗小鼠二抗检测到抗人CD63抗体(克隆8A12)。 图2. CD63在结肠癌细胞系HCT116中的定位通过Alexa Fluor™488标记的抗小鼠二抗检测到抗人CD63抗体(克隆8A12)

 

吉冈雄介 
国立癌症中心研究所

实验发现

1975年,乔治·科勒(George Kohler)和塞萨尔·米尔斯坦(CésarMilstein)发明了单克隆抗体生产技术,并因此在1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖。单克隆抗体*改变了制药业,为新型诊断和靶向疗法打开了大门。它不仅有益于医学实践,也有益于基础研究。并非所有的单克隆抗体都等效。对于每种特定的应用,识别“好”抗体很重要。通常,“好”抗体是识别单个分子并与其分子靶标牢固结合的抗体。

在外泌体研究中获得“良好抗体”尤为重要。外泌体是脂质双层分隔的囊泡,直径约100 nm,在其管腔和膜中含有各种蛋白质。使用免疫电子显微镜,免疫印迹,ELISA,免疫沉淀和免疫亲和柱,已使用抗体来检测和分离体液或培养上清液中的外泌体。这些应用需要“优质”抗体。

由于外泌体是异质的,因此根据其来源,它们可能会展示并包含不同的分子。但是,蛋白质的一个子集很可能在不同类型的外泌体之间共享。目前,好的泛外泌体标记是四跨膜蛋白CD9,CD63和CD81。我的外泌体研究始于构建外泌体检测系统的目标。我努力寻找在我的检测系统中识别外泌体标记的单克隆抗体。尽管我尝试了许多克隆,但直到发现抗CD9(克隆12A12)和抗CD63(克隆8A12)(图1和参考2),我都没有获得好的结果。这些抗体在蛋白质印迹(图2)和免疫电子显微镜中表现良好。这些抗体的人类特异性由其无法检测小鼠CD9和小鼠CD63证实。该特性在小鼠的人异种移植模型系统中很有用,在这种系统中,抗体不会与内源性CD9和CD63反应。如果在检测人外泌体时遇到问题,则抗CD9(克隆12A12)和抗CD63(克隆8A12)抗体可能会有用。

数字


图1.克隆12A12(抗CD9)和8A12(抗CD63)相对于竞争对手克隆A和B的ELISA性能。 图2.克隆8A12(抗CD63)和12A12(抗CD9)的免疫印迹性能人类外泌体。

参考文献

  1. 吉冈Y等。(2013)J Extracell Vesicles ,2:20424
  2. 吉冈Y等。(2014)Nat Commun,5:3591

 

高桥彰子 
癌症研究基金会

实验发现

外来体通过ESCRT复合物的作用从多囊泡内体中包含的囊泡中产生。这些腔内囊泡被分泌为直径为50-150nm的细胞外囊泡。近来,随着外泌体包含蛋白质,脂质和核酸的发现,许多注意力集中在它们作为细胞间通讯载体的功能上。

我们正在分析衰老相关的分泌表型,其部分特征是炎症细胞因子和趋化因子的分泌增加。衰老细胞还提高了外泌体的分泌(参考文献1)。我们通过正常人成纤维细胞的连续传代(复制性衰老)和引入激活的癌基因RasV12(癌基因诱导的衰老)来诱导细胞衰老。温育48小时后,通过超速离心回收条件培养基中的外来体。回收的细胞外物质的大小分布通过纳米颗粒跟踪分析进行表征。衰老细胞中分泌的外泌体的数量是年轻细胞的30​​至50倍(图1,顶部)。为了进一步比较衰老与年轻外来体,我们使用抗人CD81单克隆抗体(克隆12C4,以1:1000稀释度使用;来自Cosmo Bio USA)进行了蛋白质印迹实验。结果表明,从衰老中回收的CD81蛋白量相对于年轻外来体有所增加(图1,底部)。还观察到从衰老细胞中回收的外泌体对MCF-7乳腺癌细胞具有促进生长的作用(参考文献2)。

外泌体的生理作用和诊断/治疗潜力仍未*了解。我们正在分析正常细胞和衰老细胞分泌外泌体的详细分子机制,以期阐明外泌体的生物学意义。此外,通过研究衰老 

数字


人类成纤维细胞TIG-3细胞年轻和衰老版本的外泌体分析(来自参考文献1)。
上图:通过NTA(纳米粒子跟踪分析)确定的回收的外泌体的相对数量。下图:外泌体标记蛋白的蛋白质印迹检测。

参考文献

  1. Takahashi,A.等。外泌体通过从细胞中排出有害DNA来维持细胞稳态。纳特COMMUN 8,15287(2017)。
  2. 高杉,M。等。衰老细胞分泌的小细胞外囊泡通过EphA2促进癌细胞增殖。纳特COMMUN 8,15729(2017)

 

EXOTRAP™外来体分离离心柱套件

名古屋大学医学研究科
病毒学
研究科佐藤佳隆

实验发现

外泌体是膜包裹的30至100 nm的囊泡,内含蛋白质和核酸,并由各种细胞分泌。通过获取循环的通路,它们可以将信号传输到远处的小区。已经观察到,通过外来体的细胞间通讯与抗原呈递,细胞凋亡,炎症,肿瘤进展和恶性转化有关。预计外泌体将在各个领域中发挥重要作用,例如在药物输送系统的开发中。

我们对病毒感染的细胞与附近未感染的细胞之间的相互作用感兴趣。当病毒感染的细胞与未感染的细胞混合培养后,荧光免疫染色可以检测未感染细胞中的病毒蛋白,呈点状信号。从这个发现,我对作为细胞间通讯介体的外泌体产生了兴趣。

由于涉及冗长而困难的方法(传统上包括超速离心),因此比较从各种来源和在不同条件下回收的外泌体具有挑战性。因此,从操作简便(任何人都可以纯化),纯化时间(可以在短时间内完成纯化)和应用的多功能性(可以分析外泌体本身以及所含蛋白质和核酸)的角度出发,我们进行了商业化探索可用的外泌体纯化试剂盒,发现CosmoBio USA的“ ExoTrap™外泌体分离旋转柱试剂盒”是理想的纯化解决方案。

ExoTrap™的优势在于,可以在仅30分钟的“短时间内”从少量样品中纯化外泌体。作为外泌体研究的初学者,ExoTrap™使我能够通过蛋白质印迹法检测与在纯化前培养上清液中无法检测到的外泌体相关的病毒蛋白。而且,我能够证明在从外泌体抑制剂(GW4869)处理过的细胞的培养上清液中回收的ExoTrap™纯化的外泌体中未检测到病毒蛋白(1)。尽管ExoTrap™可能不适合廉价地纯化大量外泌体,但强烈建议从小体积快速简便地纯化外泌体。 

数字


图1.外泌体纯化之前和之后以及用外泌体抑制剂处理之前和之后的
Western印迹(A)Western印迹显示“ ExoTrap™外泌体分离旋转柱试剂盒”纯化的外泌体中LMP1和Hsp70的表达。
(B)Western印迹显示“ ExoTrap™外来体分离旋转柱试剂盒”纯化的外来体中LMP1和Hsp70的表达,这些细胞来自用或未用外来体抑制剂(GW4869)处理的细胞培养上清液。

参考文献

  1. Sato et al。,Oncotarget,8; 39345-39355、2017年

 

订购信息

 

目录编号 产品 克隆 标签 单位大小
四跨膜抗体用于外来体纯化和鉴定
CAC-SHI-EXO-M01-50 抗CD9抗原(MRP-1 / Tspan-29)mAb 12A12 50 UL
CAC-SHI-EXO-M01-100 抗CD9抗原(MRP-1 / Tspan-29)mAb 12A12 100 UL
CAC-SHI-EXO-M01-B 抗CD9抗原(MRP-1 / Tspan-29)mAb 12A12 生物素 100 UL
CAC-SHI-EXO-M01-TF2 抗CD9抗原(MRP-1 / Tspan-29)mAb 12A12 TF 100 UL
CAC-SHI-EXO-M01-TF5 抗CD9抗原(MRP-1 / Tspan-29)mAb 12A12 TF5 100 UL
CAC-SHI-EXO-M02-50 抗CD63抗原(LAMP-3 / Tspan-30)mAb 8A12 50 UL
CAC-SHI-EXO-M02-100 抗CD63抗原(LAMP-3 / Tspan-30)mAb 8A12 100 UL
CAC-SHI-EXO-M02-B 抗CD63抗原(LAMP-3 / Tspan-30)mAb 8A12 生物素 100 UL
CAC-SHI-EXO-M02-TF2 抗CD63抗原(LAMP-3 / Tspan-30)mAb 8A12 TF2 100 UL
CAC-SHI-EXO-M02-TF5 抗CD63抗原(LAMP-3 / Tspan-30)mAb 8A12 TF5 100 UL
CAC-SHI-EXO-M03-50 抗CD81抗原(TAPA-1 / Tspan-28)mAb 12C4 50 UL
CAC-SHI-EXO-M03-100 抗CD81抗原(TAPA-1 / Tspan-28)mAb 12C4 100 UL
CAC-SHI-EXO-M03-B 抗CD81抗原(TAPA-1 / Tspan-28)mAb 12C4 生物素 100 UL
CAC-SHI-EXO-M03-TF2 抗CD81抗原(TAPA-1 / Tspan-28)mAb 12C4 TF2 100 UL
CAC-SHI-EXO-M03-TF5 抗CD81抗原(TAPA-1 / Tspan-28)mAb 12C4 TF5 100 UL
基于四跨素抗体的外泌体纯化和ELISA试剂盒
CSR-SHI-EXO-K010 ExoTrap™外来体分离离心柱套件 12A12 10次​​准备
CSR-EXH0102EL CD9 / CD63外来体ELISA试剂盒 12A12 / 8A12 1套
超速离心介质用于外来体纯化
AXS-1114542 OptiPrep™-密度梯度介质(碘克沙醇) 1 x 250毫升
AXS-1114542-5 OptiPrep™-密度梯度介质(碘克沙醇) 5 x 250毫升
牛奶外泌体试剂
CAC-EXO-AB-01 抗牛乳外泌体抗体 100 UL
CSR-EXHM100L 人乳来源的外泌体 1毫升
推测的外来体标志物和阴性对照的抗体和ELISA
CSB-EL025125HU 人TSG101 ELISA试剂盒 1 x 96接收
CSB-EL017673HU 人ALIX ELISA试剂盒 1 x 96接收
CSB-EL008727HU 人Flotillin-1(FLOT1)ELISA试剂盒 1 x 96接收
CSB-E08297h 人HSP70 ELISA试剂盒 1 x 96接收
CSB-E13911h 人GAPDH ELISA试剂盒 1 x 96接收
CAC-HT-MAB1 抗人类EPCAM单克隆抗体 hrk29 50微克
CSB-EL007717HU 人EPCAM ELISA试剂盒 1 x 96接收
LSL-LB-3010 抗波形蛋白多克隆抗体(兔,抗血清) 100 UL
CSB-E08982h 人波形蛋白ELISA试剂盒 1 x 96接收
CSB-E08567h 人CETP ELISA试剂盒 1 x 96接收
CSB-E12825h 人CXCR4 ELISA试剂盒 1 x 96接收
KAL-KT117 抗CD68单克隆抗体 PM-1K 50微克
CSB-E15979h 人CD68 ELISA试剂盒 1 x 96接收
CAC-LKG-M003 抗CD44抗原v9单克隆抗体 RV3 50微克
CAC-LKG-M001 抗CD44抗原v9单克隆抗体 RV3 100微克
KAL-KO601 抗CD44ICD多克隆抗体 200微克
CSB-E11846h 人CD44 ELISA试剂盒 1 x 96接收
CSB-E09401h 人HLA-G ELISA试剂盒 1 x 96接收
CSB-EL010829HU 人HSPA8 ELISA试剂盒 1 x 96接收

Tim-Fc 系列及对照蛋白(外泌体提取相关产品)

Tim-Fc 系列及对照蛋白(外泌体提取相关产品)

  • 产品特性
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  • 参考文献

Tim-Fc 系列及对照蛋白(外泌体提取相关产品)Tim-Fc 系列及对照蛋白(外泌体提取相关产品)



◆相关产品


Tim-Fc 系列


  本系列是人或小鼠TIM家族(TIMD1、 TIMD3、TIMD4)的胞外域与人 IgG1 或小鼠 IgG2a 的 Fc 结构域 N 末端(包括铰链序列)融合的重组蛋白。

  TIMD(T cell immunoglobulin and mucin domain)家族被认为在过敏、哮喘、移植耐受、自身免疫和对病毒感染的反应等免疫应答控制中发挥着重要作用。此外,有报告指出由于 TIM 免疫球蛋白可变区的特殊结构,TIMD 家族能与暴露在凋亡细胞表面的磷酯酰丝氨酸(PS)高特异性结合。

 

产品编号

产品名称

容 量

080-10231

Human TIM1/Human Fc Chimera, recombinant

人TIM 1 /人Fc嵌合体,重组体

100 µg

087-10241

Human TIM3/Human Fc Chimera, recombinant

人TIM3/人Fc嵌合体,重组体

100 µg

084-10251

Human TIM3/Mouse Fc Chimera, recombinant

人TIM3/小鼠Fc嵌合体,重组体

100 µg

081-10261

Human TIM4/Human Fc Chimera, recombinant

人TIM4/人Fc嵌合体,重组体

100 µg

137-18491

Mouse TIM1/Human Fc Chimera, recombinant

小鼠TIM1/人Fc嵌合体,重组体

100 µg

130-18501

Mouse TIM3/Human Fc Chimera, recombinant

小鼠TIM3/人Fc嵌合体,重组体

100 µg

137-18511

Mouse TIM4/Human Fc Chimera, recombinant

小鼠TIM4/人Fc嵌合体,重组体

100 µg

 


对照蛋白(人 IgG1 Fc,小鼠 IgG2a Fc)


  本产品是只有人 IgG1 Fc 结构域或小鼠 IgG2a 结构域(包括铰链序列)的重组蛋白。在人 IgGFc 结构域融合目的嵌合蛋白活性测定或 WB 等实验中,作为对照蛋白使用。本产品是冻干品。

  Fc(non-lytic)型,是补体(C1q)结合区,FcgR1 结合区突变,不会产生抗体依赖性细胞毒性(antibody directed cytotoxicity,ADCC)或补体依赖性细胞毒性(complement directed cytotoxicity,CDC)作用。

 

产品编号

产品名称

容 量

098-07141

IgG1 Fc, Human, recombinant

IgG1 Fc,人,重组体

100 µg

095-07151

IgG1 Fc(non-lytic), Human, recombinant

IgG1 Fc(non-lytic),人,重组体

100 µg

092-07161

IgG2a Fc, Mouse, recombinant

IgG2a Fc,小鼠,重组体

100 µg

099-07171

IgG2a Fc(non-lytic), Mouse, recombinant

IgG2a   Fc(non-lytic),小鼠,重组体

100 µg

 

izon qEV10 / 35nm说明书


izon qEV10 / 35nm说明书

qEV10 / 35nm – 1 Pack

US $279

 

我们的新型柱尺寸之一,  qEV10 / 35nm设计用于从10mL生物样品中分离外泌体,并配有鲁尔锁配件。如果您使用更大的流体量,它们将特别有用。鲁尔锁配件还允许许多不同的配置。

这款35nm +色谱柱还提供70nm +系列,宜回收范围为35nm至350nm。

 

qEV外泌体分离

 

快速,高精度的外泌体分离。

qEV提供快速有效的EV / exsosome隔离系统。qEV基于尺寸排阻色谱(SEC),需要大约15分钟才能获得完整外泌体的纯样品,比使用超离心(UC)或沉淀试剂盒等浓缩方法显着更纯净。得到的样品是一致的,标准的和可重复的,这是研究和临床测试所必需的。qEV现在是外泌体分离的黄金标准。

快速,简单,可靠

使用qEV需要大约15分钟才能获得完整的外泌体样本。可靠性已在大规模的实验室间试验中得到证实。

标准化和可重复

每根色谱柱均经过标准化,质量保证,并通过ISO 13485标准(医疗器械)认证,非常适合临床测试。

 

纯净,清洁的隔离样品

qEV柱提供清洁和纯净的样品,不会影响外泌体的结构和功能。

 

qEV / 35nm

  • 35nm – 350nm

    宜恢复范围

  • <110纳米

    EV的回收率小于110nm

  • 更多脂蛋白重叠

    使用血浆时

 

 

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS 适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS
适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

  • 产品特性
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MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS                              适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS

适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS                              适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

外泌体等细胞外囊泡(EV: Extracellular Vesicle)不仅参与排放生物体内的废弃物,同时也是细胞间的通信媒介。根据分泌的细胞不同,EV的特性及其内含物(核酸、蛋白质、脂质等)也有所差异,目前正在尝试将参与疾病的细胞来源EV及其内含物作为生物标记应用于“液体活检”,即通过体液样品诊断疾病。

为实现液体活检的开发和应用,需要从大量的样品中高效地分离和纯化EV。但超速离心法等传统方法单次可处理的样品数有限,从多个样品中分离和纯化EV需要花费庞大的人力和物力。

因此,FUJIFILM Wako开发了EV分离纯化用试剂盒MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS,适用于提取核酸和蛋白质的自动提取设备(如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等)。本试剂盒采用与金大学的华山教授共同开发的EV分离纯化技术“PS亲和法”1),配合自动提取设备,可同时分离和纯化高纯度且低损伤EV的样品上限为96份。

◆产品概要

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS是使用PS亲和法分离和纯化细胞外囊泡(EV)的试剂盒,适用于自动提取设备(如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等)。由于可从多达96份样品中分离和纯化EV,因此也适用于利用EV进行生物标记的探索和高通量筛选 (High-throughput screening,HTS) 。

特点

  ● 配合自动提取设备,同时可分离和纯化EV的样品上限为96份

  ● 使用自行研发的分离纯化技术“PS亲和法”,可分离高纯度且低损伤

      的EV。

            适用样品(示例)

              ● 细胞培养上清

              ● 血清

              ● 血浆

              ● 尿液

              ● 唾液

适用自动提取设备(分离成果经FUJIFILM Wako验证的设备)

● KingFisher™ Flex(Thermo Fisher Scientific等)

与手动款试剂盒(MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2)的区别

比较本试剂盒与手动分离纯化试剂盒(MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2, 产品编号:290-84103),两者的区别如下表所示。另,EV的回收效率基本持平。(参考“性能数据”)

自动提取

(MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS)

手动提取

(MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2)

Tim4和磁珠的结合方法

直接与磁珠结合
    (无需磁珠与Tim4结合的步骤)

通过生物素-亲和素系统与磁珠结合
    (需要磁珠与Tim4结合的步骤)

洗脱缓冲液中的表面活性剂浓度

(抑制了磁珠的损耗)

洗脱缓冲液中的EDTA浓度

(减少了洗脱步骤的次数)

◆原理

PS亲和法是FUJIFILM Wako研发的EV分离方法,使用了与存在于EV表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的Tim4。

通过PS-Tim4结合的高特异性和螯合剂,可在完整状态下温和地洗脱高纯度EV。

特异性结合

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS                              适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

洗脱

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS                              适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

◆实验方案

使用KingFisher™ Flex分离纯化EV(进行从亲和反应到洗脱一系列过程时)

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS                              适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

※将亲和反应和洗脱步骤作为单独的程序分别进行,并使用新的tip comb进行洗脱,可能可以减少样品中的杂质。更多信息请参阅使用说明书。

实验方案的详细内容和设置示例请查阅使用说明书。

◆数据

与手动试剂盒(MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2)比较的性能数据

通过NTA,比较分离的粒子数

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto,自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual,手动提取),从血清、肝素血浆、尿液、细胞培养上清(COLO201)中分离和纯化EV。通过Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)确认EV的粒子数

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS                              适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

【结果】

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒获得了相同程度的粒子数。

通过ELISA,比较分离的粒子数

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手动提取),从血清、肝素血浆、尿液、细胞培养上清(COLO201)中分离和纯化EV。然后使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) (产品编号:298-80601)确认EV的回收率。

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS                              适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS                              适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

【结果】

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒获得了相同程度的回收率。

通过蛋白质组学分析,比较分离的蛋白质种类、蛋白量

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手动提取)分离和纯化EV。蛋白质组学分析回收的EV溶液。

(1)鉴定的蛋白质种类

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS                              适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

【结果】

在4次实验中,MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS与手动试剂盒相比,鉴定的蛋白质数量始终更多、再现性更高。

(2)EV标记蛋白质的量

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS                              适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

【结果】

分别使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒进行分离的EV中所含的EV标记蛋白质之间并无显著差异,自动化对EV的回收率没有影响。

(3)非EV标记的量(以白蛋白为例)

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS                              适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

结果】

与手动试剂盒相比,使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS纯化分离的非EV标记物白蛋白量更少,表明可回收杂质更少的EV。


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参考文献

1) Nakai, W. et al.: Sci. Rep. 6(1), 1(2016).

      A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles

产品列表
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产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
293-96401 MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS 
HTS用MagCapture™ EV提取试剂盒PS
96 tests 基因研究用
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
294-84101 MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2  
MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS Ver.2
2 tests 基因研究用
290-84103 MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2  
MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS Ver.2
10 tests 基因研究用
适用于从10 mL以下的细胞培养上清以及体液样品中分离和纯化EV
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
131-19491 MassivEV™ EV Purification Column PS  
MassivEV™ 细胞外囊泡(EV)纯化分离柱 PS
1 mL 基因研究用
137-19493 MassivEV™ EV Purification Column PS  
MassivEV™ 细胞外囊泡(EV)纯化分离柱 PS
5 mL 基因研究用
295-96601 MassivEV™ Purification Buffer Set  
MassivEV™ 细胞外囊泡(EV)纯化缓冲液套装
1mL×10回用 
(5mL×2回用)
基因研究用
适用于从10 mL至公升级别规模的细胞培养上清中分离和纯化EV
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
058-09261 EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent 
 EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(超滤用)
1 mL 基因研究用
050-09461 EV-Sav™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent for in vivo  
EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(动物体内实验用)
1 mL 基因研究用

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

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EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒


EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒是一款可实现外泌体等细胞外囊泡(EV: Extracellular vesicle)内部蛋白检测的前处理试剂。至今研发的PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒系列和 PS Capture™ 外泌体流式试剂盒的检测对象仅限于外泌体表面标记物。但是,通过使用EV-Perm™处理外泌体样品,可提高外泌体的膜通透性,使抗体渗透到外泌体内部,从而检测存在于内部的标记蛋白。

※ 请配合PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒和 PS Capture™ 外泌体流式细胞术试剂盒使用本试剂。另外,检测抗体需单独制备。

◆特点

● 试剂盒的试剂(3种)可提高外泌体的膜渗透性

● 配合使用ELISA试剂盒和流式试剂盒,可检测外泌体内部的蛋白

● 除纯化外泌体外,还可用于细胞培养上清和体液样品

◆适用样品

 纯化外泌体(细胞外囊泡)

 细胞培养上清

 体液(血清和血浆)样品

◆内部抗原检测原理

①  捕获外泌体

ELISA板或磁珠固定化的Tim4蛋白

与外泌体表面的磷脂酰丝氨酸结合

② 提高膜渗透性

通过添加EV-Perm™,

提高外泌体的膜渗透性

③ 检测内部抗原

使抗体可渗透到外泌体内部,

并检测蛋白

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒 EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒 EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒 EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒 EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

◆应用实例

使用ELISA试剂盒检测内部标记物

使用EV-Perm™对外泌体样品进行渗透预处理,对从HEK293T细胞培养上清中纯化的外泌体内部的Alix,以及从H4细胞培养上清中纯化的外泌体内部的α-synuclein使用PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒(链霉亲和素HRP)进行检测。

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

【结果】通过渗透处理,使用ELISA试剂盒可检测外泌体内部的Alix、α-synuclein。

使用流式试剂盒检测内部标记物

使用EV-Perm™渗透处理,对从HEK293T细胞培养上清中纯化的外泌体内部的Alix、以及外泌体表面的CD63使用PS Capture™ 外泌体流式试剂盒进行检测。

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

【结果】通过渗透处理,使用流式试剂盒可检测外泌体内部的Alix。

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相关资料


想要使用ELISA Kit和EV-Perm™定量分析EV内部表达的标记蛋白A,有何建议的方法?

1. 准备能分泌含标记蛋白A的外泌体的细胞株(若没有,也可使用含有带标记蛋白A的外泌体的体液样品)


2. 从上述细胞株的培养上清(或体液样品)中纯化外泌体

2. ⇒通过Western blotting或外泌体提取液的ELISA检测确认标记蛋白A的存在

2. ⇒检测纯化外泌体的蛋白浓度或粒子数


3. 进行预实验(确认EV-Perm™ 处理、以及使用的生物素标记抗体是否有效)。

2. (1)制备上述纯化外泌体的系列稀释(一种通过一系列步骤稀释样品的方法),根据试剂盒的实验操作步骤,使用PS Capture™ ELISA试剂盒分

2. (1)别在有/无EV-Perm™ 处理的条件下,确认是否能检测出CD63与标记蛋白A的信号。

2. (2)在探讨(1)的同时,还需要讨论合适的生物素标记抗体的稀释倍数、链霉亲和素-HRP的稀释倍数(确认作为对照检测的CD63信号是否在

2. (1)有/无EV-Perm™ 处理的条件下均能被检测。此外,与未经EV-Perm™ 处理的样品相比,经EV-Perm™ 处理检测到的CD63信号略低。并

2. (1)且,适用于检测标记蛋白A和检测CD63的生物素标记抗体的稀释倍数、链霉亲和素-HRP的稀释倍数可能有所差异。)

上述讨论中,在经EV-Perm™ 处理的条件下如检测到标记蛋白A的信号,建议在经EV-Perm™ 处理的ELISA检测的450 nm吸光度值(减去620 nm亚波长吸光度值后的值)的0.1~0.2之间讨论纯化外泌体的稀释倍数,并确定制备标准曲线用纯化外泌体的系列稀释。

4. 进行本实验。

4. 制备标准曲线(此步骤需使用进行EV-Perm™ 处理)

2. (1)制备标准品(纯化外泌体)的标记蛋白A信号落在ELISA检测的450 nm吸光度(减去620 nm亚波长吸光度后的值)的0.1~0.2之间的系列

2. (1)稀释。 稀释使用试剂盒配套的Reaction Buffer。

2. (2)制备在已设定的标准曲线吸光度范围内的样品稀释液(建议在预实验时讨论、确定合适的稀释倍数)

2. 检测、计算样品浓度(此步骤需要使用ELISA试剂盒进行处理)

2. (1)对N=2时的标准品的系列稀释液和样品稀释液进行检测。 

2. (2)根据标记蛋白A的检测吸光度制备标准曲线,计算各样品的浓度(标准品的相对浓度)。

2. (3)比较各样品的标记蛋白A的浓度。

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

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MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2 提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2
提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2



MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

本试剂盒是提取/纯化外泌体的试剂盒,比起第一代产品(293-77601 MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS),提高了外泌体的回收率和纯度,并缩短了实验操作的时间。使用本试剂盒纯化的外泌体可以直接用于细胞摄取实验。

 


◆特点


● 提高了外泌体的回收率和纯度

● 缩短亲和反应的时间(3 h→1 h)

● 降低纯化外泌体的细胞毒性

 


◆数据


■  比较外泌体的回收率

纳米级粒子数检测

ELISA EV表面标记物的比较 

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

Western blotting EV标记的比较

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

在间充质干细胞(MSC)的培养上清中,使用第一代产品(图中简写为Ver.1)和本试剂盒(图中简写为Ver.2)提取和纯化含外泌体的细胞外囊泡(图中简写为EV)。然后,对所得样品进行纳米级粒子数检测以及使用PS MagCapture™ 外泌体 ELISA Kit(链霉亲和素HRP)(产品编号:298-80601)和WB比较EV标记物。

Ver.2与Ver.1相比,回收率有所提高。

■ 比较纯化外泌体的细胞毒性

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

使用Ver.1和Ver.2提取和纯化COLO201细胞培养上清中含外泌体的细胞外囊泡。然后仅将elution buffer或纯化外泌体加入到人正常成纤维细胞中,观察经过48 h后的细胞形态变化。

在Ver.1中,加入外泌体和elution buffer后48 h出现了细胞死亡,而Ver.2中未观察到明显的细胞毒性。证明Ver.2中elution buffer的细胞毒性已经降低了。

■ 比较不同亲和反应时间里外泌体纯化的回收率

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

在COLO201细胞培养上清中,为Ver.2设定4个亲和反应时间条件,提取和纯化含外泌体的细胞外囊泡(EV)。然后,获得的样品使用PS MagCapture™ 外泌体 ELISA 试剂盒(链霉亲和素HRP)(产品编号:298-80601)比较EV表面标记物。

在Ver.2中,确认了1 h的亲和反应可以充分提取到培养上清中的细胞外囊泡。

点击此处查看相关视频:MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2

相关资料


MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

MagCapture™外泌体提取试剂盒PS Ver. 2 中英文说明书

◆友情链接

延伸阅读:Thermo Fisher发布——六种血清外泌体分离方法的蛋白质组学比较研究    文章

参考文献


1

W. Nakai, et al, Sci Rep 6, 33935 (2016). A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles. 全文【PMID:27659060】

来源细胞

  K562细胞・pMac

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  共聚焦显微镜/流式细胞术/WB/

  蛋白质组学分析/电镜观察/ELISA/FACS

使用特异地结合在EV表面显示的磷酸酯的Tim4蛋白质,开发了纯化EV的新方法。Tim4蛋白也可以作为量化ELISA和流式细胞术设施的EV的强大工具来使用,Tim4对EV的亲和力高。

2

A. Kraft, W81 Award. Regulating Cancer-Associated Fibroblast Biology in Prostate Cancer (2017) 全文

来源细胞

  BHPrS1细胞

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  WB/nanoLC-MS-SWATH

蛋白激酶能通过诱导正常的前列腺间质纤维芽细胞产生促进前列腺癌间质细胞生长的蛋白质,可借此模仿肌纤维芽细胞关连的纤维芽细胞那样的表现型已得到证实。同时也暗示,可以从癌症患者的尿中检测到由筋纤维芽细胞分泌的蛋白质的变化。本研究获得的知见被认为是进一步开发反映间质蛋白质产生的新生化标记物不可或缺的。

3

S. Osawa et al, Biochem. Biophys. Res. Commun., 232-238 (2017). Fibronectin on   extracellular vesicles from microvascular endothelial cells is involved in   the vesicle uptake into oligodendrocyte precursor cells. 全文【PMID:28499870】

来源细胞

  脑微血管内皮细胞培养上清

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  MS/ELISA/存活、增殖率分析/流式细胞术

研究了脑微血管内皮细胞由来EV对少突胶质前体细胞的存活和增殖的影响。为了今后开发针对脑白质梗塞的治疗方法,有必要阐明神经细胞吸收EV的详细机制。

4

S. Nagashima et al,  , J. Virol., 91(22) e00822-17 (2017). Characterization of the Quasi-Enveloped Hepatitis E Virus Particles Released by the Cellular Exosomal Pathway 全文【PMID:28878075】

来源细胞

  HEV感染的人肝癌细胞培养上清

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  WB/基因测序/电镜观察(胶体金标记)/免疫染色

HEV粒子的衣壳被类似于外泌体的脂质膜一一覆盖,通过外泌体路径从感染细胞中释放出来。本文的研究可能有助于阐明今后的外泌体与准包膜HEV粒子之间的关系。

5

T. Yoshida et al, Curr. Protoc. Cell Biol., 11;777:3.45.1-3.45.18 (2017). High Purity Isolation and Sensitive Quantification of Extracellular Vesicles Using Affinity to TIM4 全文【PMID:29227551】

来源细胞

  ——

产品

  TIM4-Fc protein
  PS Capture Exosome ELISA Kit

实验应用

  WB/电镜观察

通过使用能够以特定的钙依赖性方法与磷酸酯结合的TIM4来分离EV的基于亲和性的方法,使高纯度EV的分离和EV的高灵敏度的量化成为可能,期待其进一步加速基于以往研究方法的EV研究。

6

S. Saito et al,  Sci Rep 8, 3997  (2018). Glycome analysis of extracellular vesicles derived from human induced pluripotent stem cells using lectin microarray. 全文【PMID:29507392】

来源细胞

  人纤维芽细胞、人脂肪间充质干细胞的芽球、

  人软骨细胞、人iPS细胞培养上清

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  WB/凝集素芯片/流式细胞术/ELISA

使用高密度的凝集素芯片分析从人类多功能干细胞中产生的EV的糖组。EV上的糖组有望成为对的再生医疗中使用的干细胞识别和

7

H. Kobayashi et al, Nagoya J Med Sci., 80(2), 141-153 (2018).  Effects of exosomes derived from the induced pluripotent stem cells on skin wound healing. 全文【PMID:29915432】

来源细胞

  iPS细胞(201B7)培养上清

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  共聚焦显微镜/流式细胞术/WB/蛋白质组学分析/

  电镜观察/ELISA/FACS

研究了iPS细胞产生的外泌体对皮肤创伤的治愈的影响。来自iPS细胞的外泌体显展现了促进纤维芽细胞游走的可能性。这个结果暗示着在糖尿病性溃疡的治疗中可以使用来自iPS细胞的外泌体的可能性。

8

Y. Obata, et al., JCI Insight 3(8), 99680, (2018) Adiponectin/T-cadherin system enhances exosome biogenesis and decreases cellular ceramides by exosomal release. 全文【PMID:29669945】

来源细胞

  小鼠血管内皮F2细胞/人肝癌细胞系(HepG2)、

  人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)、

  小鼠横纹肌细胞(C2C12)

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  WB/NTA/免疫染色/电镜观察

确立了在外泌体合成中的脂联素/T-钙粘连蛋白系统的新作用。得到了通过外泌体的生化合成与分泌介导的借助脂联素/T-钙粘连蛋白所实现的脏器保护的新观点。

9

RC. Middleton, et al., J Extracell Vesicles 7(1) 1456888 (2018).  Newt cells secrete extracellular vesicles with therapeutic bioactivity in mammalian cardiomyocytes. 全文【PMID:29696078】

来源细胞

  蝾螈肢外植细胞(A1细胞)

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  qPCR/Nanosight纳米颗粒分析/

  WB/FACS/单粒子分析/蛋白质组学分析/

  NGS

使用蝾螈肢外植细胞(A1细胞)调整的培养基保护了哺乳动物的心肌细胞免受氧化应激反应引起的细胞凋亡。A1-EV中包含了能对核受体、膜配体、转录因子进行编码的多个mRNA,展现了对哺乳动物的心肌细胞有细胞保护效果。。

10

H. Kawahara, et al., Biol. Pharm. Bull. 41, 1119–1125 (2018). The Role of Exosomes/Extracellular Vesicles in Neural Signal Transduction.全文【PMID:30068858】

来源细胞

  ——

产品

  ——

实验应用

  ——

以通过EV为媒介的神经细胞和胶质细胞之间的信号传递为中心的神经生理学和神经障碍间关系的概论

11

M. Santiana, et al., Cell Host & Microbe 24, 208–220 (2018). Vesicle-Cloaked Virus Clusters Are Optimal Units for Inter-organismal Viral Transmission. 全文【PMID:30092198】

来源细胞

  H69人胆管细胞/MA104/

  (受轮状病毒、诺如病毒感染)

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  WB/电镜观察/ELISA

轮状病毒和诺如病毒以小胞内的病毒簇的形式被释放到粪便中,包含这个的小胞在粪便感染中不会受到损伤。小胞有很高的MOI,会引发重度疾病。被小胞覆盖的病毒集群比游离病毒粒子毒性更强,强调了以小胞与病毒簇为目标的抗病毒药物的必要性。

12

Antes, T. J, et al., Journal of nanobiotechnology, 16(1), 61(2018). Targeting extracellular vesicles to injured tissue using membrane cloaking and surface   display. 全文【PMID:30165851】

来源细胞

  CDC细胞

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  Nanosight纳米颗粒分析/qPCR/

  in vivo効果分析

说明被称为“克隆”的EV膜锚定平台。
EV靶向定位可以通过克隆和表面表示两者来强化,通过尝试实行以不同细胞和组织为目标的数个不同EV表面改性的克隆来支持作为平台技术的克隆概念。

13

Kimura, H, et al., Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research, 25(6), 1936–1947(2019). CKAP4, a DKK1   Receptor, Is a Biomarker in Exosomes Derived from Pancreatic Cancer and a   Molecular Target for Therapy. 全文【PMID:30610103】

来源细胞

  PDAC细胞

产品

  PS Capture Exosome ELISA Kit

实验应用

  ELISA

对生存率低的胰腺导管腺癌(PDAC)需要寻找新的分子靶向疗法和伴随诊断,因此研究了细胞骨架相关蛋白质4(CKAP4)、新Dickkopf1(DKK1)受体是否能成为其候补。结果表明,外泌体分泌的CKAP   4可以成为PDAC的生物标记,抗CKAP 4mAbs可以有助于开发新的诊断方法和治疗方法。

14

Gorji-Bahri, Gilar, et al., Current gene therapy,18(6),336-350(2018). ExomiRs: A Novel Strategy in Cancer Diagnosis and Therapy. 全文【PMID:30332956】

来源细胞

  ——

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  ——

・对外泌体的生化合成和动作,以及它们的分离、特性评价和内容的说明
・关于exomiR在促进癌症方面的作用的最近的进展,以及关于exomiR作为癌症的生物标记和靶向治疗目标的应用

15

Xu, H, et al., Analytical chemistry, 90(22), 13451–13458(2018). Magnetic-Based Microfluidic Device for On-Chip Isolation and Detection of Tumor-Derived Exosomes.  全文【PMID:30234974】

来源细胞

  HepG2

产品

为了调整Tim4偶联磁珠,使用了magnetic   beads coated with streptavidin biotinylated mouse  Tim4-Fc

实验应用

  ELISA/WB

我们提出了集血清外泌体的芯片上分离和原位(in   situ)电化学分析为一体的2阶段微流体平台(ExoPCD芯片)。已经表明,ExoPCD芯片可作为全面的外泌体分析工具和潜在的非侵入性诊断平台。

16

Kuroda, H, et al., Molecular pharmaceutics, 16(1), 292–304(2019). Cluster of Differentiation 46 Is the Major Receptor in Human Blood-Brain Barrier   Endothelial Cells for Uptake of Exosomes Derived from Brain-Metastatic   Melanoma Cells (SK-Mel-28). 全文【PMID:30452273】

来源细胞

  SK-Mel-28・hCMEC/D3

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  LC-MS/MS /   Nanosight纳米颗粒分析/

  共焦距显微镜/qRT-PCR/基因测序

确定了脑转移癌细胞株(SKMel-28)由来的外泌体内化于人血脑屏障内皮细胞(hCMEC/D3细胞)中所涉及的受体。暗示了CD46是人血脑屏障内皮细胞(hCMEC/D3细胞)对SK-MIL-28由来外泌体吸收的主要受体。

17

Jin, J, et al., Stem cell research & therapy, 10(1), 95(2019). Exosome   secreted from adipose-derived stem cells attenuates diabetic nephropathy by promoting autophagy flux and inhibiting apoptosis in podocyte. 全文【PMID:30452273】

来源细胞

  脂肪由来干细胞(ADSC)・MPC5

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  电镜观察/ NTA/免疫沉淀/流式细胞术/

  CCK8分析/RT-PCR/WB

调查了糖尿病肾病(DN)中脂肪干细胞(ADSC)由来的外泌体的治疗作用和分子机制。ADSCs-Exo通过增强miR-486的表达改善了DN的症状,具有对足细胞的Smad1/mTOR信号传输路径的阻碍作用。由此ADSCs-Exo有可能成为将来DN的主要治疗战略。

18

Liu, Z, et al., Cell death discovery, 5, 79(2019). Exosomes from adipose-derived   mesenchymal stem cells prevent cardiomyocyte apoptosis induced by oxidative stress. 全文【PMID:30911413】

来源细胞

  ADSCs・MCM

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  流式细胞术/电镜观察/WB

明确了ADSC外泌体的性质,以其对缺血再灌注损伤所具有的心脏保护作用评价为目的。ADSC外泌体被用于对暴露在氧化压力下心肌细胞的心脏保护效果的体外调查。确认了不仅仅是来自ADSC的外泌体,各种各样的干细胞由来的外泌体均能在氧化压力下保护心肌细胞。

19

Patel, G. K, et al,. Scientific reports, 9(1), 5335(2019). Comparative analysis of exosome isolation methods using culture supernatant for optimum yield, purity and downstream applications. 全文【PMID:30926864】

来源细胞

  MiaPaCa cell(荧光素转染人胰腺癌细胞)

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  ζ-电位测定/WB/qRT-PCR

比较了Invitrogen、101Bio、Wako、iZON这四个试剂盒的有效性并与常规的超离心分离法的外泌体回收率、纯度和质量进行了比较。所有提取方法皆有长有短的,需要根据外泌体的使用目的来选择方法。在MagCapture以外的试剂盒中,均没有考虑到非外泌体的中等大小的小泡也会一并被分离。参照下表。

20

Tai, Y. L, et al., C26, Journal of biomedical science, 26(1), 35(2019). Basics and applications of tumor-derived extracellular vesicles. 全文【PMID:31078138】

来源细胞

  ——

产品

  ——

实验应用

  ——

关于肿瘤形成过程中肿瘤EV及其潜在临床应用的综述

21

Sugihara, Y, et al., PloS one, 14(5), e0217394(2019). Carnosine induces intestinal cells to secrete exosomes that activate neuronal cells.  全文【PMID:31136600】

来源细胞

  Caco-2・SH-SY5Y

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS,
  PS Capture Exosome ELISA Kit

实验应用

  ELISA/微阵列分析

我们将肠上皮细胞中提取的外泌体是活化脑肠间相互作用的调控者考虑,并且还明确了由肌肽介导的脑内相互作用活性化与外泌体的关联。期待在未来的研究中,能进一步解明含功能性外泌体的食物引起的各种细胞间/组织间相互作用。

22

Liu, C. Y, et al., CNS neuroscience & therapeutics, 26(2), 189–196(2020).  Effect of exosomes from adipose-derived stem cells on the apoptosis of Schwann cells in peripheral nerve injury. 全文【PMID:31278850】

来源细胞

  ADSCs

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  共培养/WB/纳米颗粒分析/CCK8/流式细胞术

虽然尚没有最佳的末梢神经损伤(PNI)的治疗方法,但是已经明确了Schwann施万细胞(SC)对末梢神经的再生很重要,以SC为靶向的治疗正日益受到重视。从ADSC外泌体改善了SC的增生率这一结果,暗示着ADSC和SC之间的外泌体介导机制将来可能用于治疗。

23

Ando, W, et al., Scientific reports, 9(1), 13595(2019). Novel breast cancer screening: combined expression of miR-21 and MMP-1 in urinary exosomes detects 95% of breast cancer without metastasis. 全文【PMID:31537868】

来源细胞

  尿液外泌体

产品

  PS Capture Exosome ELISA Kit

实验应用

  ELISA/WB/电镜观察

为了研究能用于筛查的标记物,从乳腺癌(BC)患者及健康女性患者中收集尿样,调查了尿液外泌体中的miR-21及MMP-1/CD63。研究结果表明,miR-21和MMP/CD63可能是BC筛查中可靠的标记物。

24

Lou, G, et al., Journal of experimental & clinical cancer research : CR, 39(1), 4(2020). MiR-199a-modified exosomes from adipose tissue-derived mesenchymal stem cells improve hepatocellular carcinoma chemosensitivity through mTOR pathway. 全文【PMID:31898515】

来源细胞

  从患者提取的AMSC(miR-199a修饰)

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  透射电子显微镜/纳米颗粒示踪/

  流式细胞术/RT-PCR/WB

miR-199a有望成为改善肝细胞癌(HCC)化疗的新工具。使用来自脂肪组织的MSC(AMSC)的外泌体运载miR199a,研究其能不能改善HCC的化学感受性。结果AMSC外泌体是对miR199a送达有效的载体,对以mTOR途径为靶向的HCC的化学疗法有效。表明使用AMSC外泌体有助于改善HCC的化学感作性。

25

Muraoka, S, et al., Frontiers in neuroscience, 13, 1059(2019). Proteomic Profiling of   Extracellular Vesicles Isolated From Cerebrospinal Fluid of Former National Football League Players at Risk for Chronic Traumatic Encephalopathy.  全文【PMID:31649498】

来源细胞

  人脑脊髓液

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  Nanosight纳米颗粒分析/SDS-PAGE/

  NanoLC-MS/MS

调查了从患有认知・神经精神功能障碍的原运动员的脑脊髓液中分离出来的EV的蛋白质组成。表明了来自脑脊髓液EV中的第181位为磷酸化苏氨酸的tau蛋白质和几个细胞型特异分子的组合是慢性外伤性脑病的潜在的筛查生物标记。

26

Yuyama, K, et al., Scientific reports, 9(1), 16827(2019). Plant sphingolipids promote extracellular vesicle release and alleviate amyloid-β pathologies in a mouse model of Alzheimer's disease. 全文【PMID:31727994】

来源细胞

  SH-SY5Y细胞

产品

  PS Capture Exosome ELISA Kit,
  Anti CD9 antibody,
  Aβ夹心法ELISA试剂盒(无具体货号)

实验应用

  SDS-PAGE/WB/GSL-糖链提取/

  MALDI-TOFMS/电镜观察/硫黄素T分析/

  ELISA

从一种叫做Amorphophallus konjac的植物中提取了一种叫做GlcCer的神经酰胺,可增加与Aβ结合的神经元EV的释放,并且共同培养的小胶质使细胞外Aβ含量降低了。另外,过量表达淀粉样前体蛋白的小鼠通过喂食含有GlcCer的植物,脑内的淀粉样蛋白的沉积以及与认知障碍等疾病相关的Aβ蛋白引发的症状均得到了缓和。表明了植物神经酰胺可能是防止阿尔茨海默等病的症状的功能性食品材料。

27

Sun, L, et al., Oxidative medicine and cellular longevity, 2019, 4506303(2019). Exosomal miRNA Let-7 from Menstrual Blood-Derived Endometrial Stem Cells Alleviates Pulmonary Fibrosis through Regulating Mitochondrial DNA Damage.  全文【PMID:31949877】

来源细胞

  人月经血来源干细胞

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  投射电子显微镜/NTA/WB/荧光显微镜

使用人月经血由来干细胞(MenSC)外泌体将miRNA   Let-7运载到肺泡上皮细胞来改善肺纤维化,随后还发现ROS水平、LOX1表达、mtDNA损伤、以及炎症体NLRP3活性化也均被抑制。根据这些发现,MenSC外泌体可能有望成为治疗特发性肺纤维症的策略。

28

Muraoka, S, et al., Methods (San Diego, Calif.), 177, 35–49(2020). Assessment of separation methods for extracellular vesicles from human and mouse brain tissues and human cerebrospinal fluids. 全文【PMID:32035230】

来源细胞

  人脑组织/人脑脊髓液

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  NTA/投射电子显微镜/ LC-MS/MS/

  LC/ESI-MS/MS

我们开发了从未固定的脑组织和脑脊髓液中分离EV的标准实验方法。EV作为对疾病的检查和诊断的生物标记物很有前景,有望解决以往尚无对应处置方法的紧急性需求。

29

Jin, J, et al., BioMed research international, 2685305(2020). Exosomal miRNA-215-5p Derived from Adipose-Derived Stem Cells Attenuates Epithelial-Mesenchymal Transition of Podocytes by Inhibiting ZEB2.  全文【PMID:32149094】

来源细胞

  小鼠脂肪干细胞

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  投射电子显微镜/WB/流式细胞术/qRT-PCR/

  显微镜观察

足细胞的游走与糖尿病肾病(DN)的发病密切相关。已知道脂肪干细胞的外泌体(ADSCs-Exos)可有效地阻碍足细胞的凋亡,但其机制依旧不明。本研究发现,来自ADSCs-Exos的miRNA-215-5p通过以DNA结合转录因子ZEB2为靶蛋白,抑制了足细胞的上皮间质转换。由此,ADSCs-Exo制剂被认为是临床改善足细胞功能障碍和DN症状的有效治疗战略。

30

Muraoka, S, et al., Cells, 9(9), 1959(2020). Proteomic Profiling of Extracellular Vesicles Derived from Cerebrospinal Fluid of Alzheimer's Disease Patients: A Pilot Study. 全文【PMID:32854315

来源细胞

  人脑脊髓液

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS,

  Lysyl Endopeptidase®, Mass Spectrometry 

  Grade (Lys-C)

实验应用

  NTA/投射电子显微镜/纳米LC-MS/MS/MS

阿尔茨海默病(AD)中的含Aβ以及tau蛋白质的EV一直有被重视。我们调查健康者,轻度认知障碍者和AD患者的脑脊髓液中分离出来的EV,分析了其蛋白质组成。确定了参与AD进行的HSPA 1A、NPEPPS和PTGFRN三种蛋白质。这些蛋白质在对AD的发病、进展中是否具

31

Ren, Y, et al., Biosensors & bioelectronics, 199, 113870(2022). Rapid enrichment and sensitive detection of extracellular vesicles through measuring the phospholipids and transmembrane protein in a microfluidic chip. 全文【PMID:32149094】

来源细胞

  不明

产品

  不明

实验应用

  不明

研究开发了通过用亲油性色素对EV的磷脂双分子层染色来评价脂质质量的这一新的EV量测定方法。该方法中使用的小荧光分子不需要使用NTA与流式细胞术等预处理中不可或缺的超离心超滤等操作即可去除,并且该方法可以与NTA相匹敌。期望能通过这种方法获得关于EV生物标记表达的更准确信息。

32

Lim, K, et al., Journal of extracellular vesicles, 10(14), e12170(2021). Millisecond dynamic of SARS-CoV-2 spike and its interaction with ACE2 receptor and small extracellular vesicles. 全文【PMID:34874124】

来源细胞

  HEC50B/PC-9/A549

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  原子力显微镜/NTA/SDS-PAGE/WB

对SARS-CoV-2病毒的刺突蛋白和人ACE2复合体的pH/温度依赖性结构进行了分析。并进一步发现通过该复合体的形成使刺突蛋白的子单元S2与小EV更容易相互作用,由此期待应用该表达有ACE2的小EV来阻止病毒的侵入。

33

Shi, L. (2021). A Rapid and Label-free Method for Isolation and Characterization of Exosomes (Doctoral dissertation, University of Cincinnati). 全文

来源细胞

  不明

产品

  不明

实验应用

  Nanosight纳米颗粒分析/WB/电镜观察

文献37的研究的一部分

34

Mwase, C, et al., Cells, 11(2), 256(2022). Mechanical Compression of Human Airway Epithelial Cells Induces Release of Extracellular Vesicles Containing Tenascin C. 全文【PMID:35053372】

来源细胞

  人支气管初代上皮细胞

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  WB

研究了模拟哮喘气管环境培养出的高分化型人支气管初代上皮(HBE)细胞中细胞外基质(ECM)蛋白质腱蛋白   C(TNC)的表达和分泌的论文。该HBE细胞产生了含有TNC的EV。本研究表明,由支气管痉挛引起的机械性压迫可能会诱发呼吸道中ECM蛋白质的产生,并有助于呼吸道重塑。

35

Osawa, M, et al., Anticancer research, 42(2), 745–757(2022). Exosomal p38   Mitogen-activated Protein Kinase Promotes Tumour Repopulation in TP53-mutated Bile Duct Cancer Cells. 全文【PMID:35093873】

来源细胞

  TP53变异吉西他滨敏感性HuCCT1细胞
  吉西他滨耐性HuH28细胞

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  投射电子显微镜/Nanosight纳米颗粒分析/

  细胞增殖分析/WB

研究了抗癌剂是否有助于TP53变异胆管癌细胞的肿瘤再增殖。比起对照组细胞,抗癌剂吉西他滨处理过的胆管癌细胞分泌了更多含p38MAPK的外泌体,通过被暴露在这些外泌体下进一步诱导了细胞增殖。已经表明,调节Exsom   p38MAPK可能是抑制TP53变异肿瘤细胞再增殖的有效战略。

36

Sawada, A, et al., International journal of molecular sciences, 23(4), 2036(2022). Tceal5 and Tceal7 Function in C2C12 Myogenic Differentiation via Exosomes in Fetal Bovine Serum. 全文【PMID:35216152】

来源细胞

  牛胎儿血清

产品

  anti-CD9
  anti-CD81
(Exosome抽提使用了Exicon、System

   Biosciences、Thermo的试剂盒)

实验应用

  ——

发现了牛胎儿血清中的外泌体抑制了Tceal 5、TSual   7基因的表达,从而阻碍了C2C12肌形成细胞分化的论文。期待今后能通过外泌体进一步调节肌肉分化和损伤肌肉的修复等尚不明了的领域。

37

Zhang, Y, et al., Biosensors, 12(2), 104(2022). A Label-Free Electrical Impedance Spectroscopy for Detection of Clusters of Extracellular Vesicles Based on Their Unique Dielectric Properties. 全文【PMID:35200364】

来源细胞

  绿色荧光蛋白(GFP   +)转基因小鼠原代肝细胞
  人肝细胞癌HuH-7细胞系
  人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)
  乳腺癌上皮(MDA-MB-231)细胞

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  NTA/qPCR/WB

本文开发了一种基于EV固有的电特性来分析评价EV的新系统。在基于绝缘体的介电泳装置中补充并固定小胞簇,利用电化学阻抗谱技术分析膜和细胞溶胶各自的电荷。这种方法是将电化学阻抗谱技术用作无标签和非侵入应用的第一步。

38

Minami, Y, et al., bioRxiv(2022). Liver lipophagy ameliorates nonalcoholic steatohepatitis through lysosomal lipid exocytosis. 全文

来源细胞

  NASH模型小鼠血清

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS
  LabAssay ™ Triglyceride
  LabAssay ™ NEFA
  ML-SA1

实验应用

  甘油三酯检测

关注了在NASH的治疗方法中由脂肪耗失引起的脂质减少。设计了诱导脂肪耗失发生的合成适配子,使之作用于NASH模型小鼠的肝细胞后,发现其促进了脂质的溶酶体的胞吐作用。并且,将其作用于食物诱导的小鼠NASH模型后,脂肪症和肝炎的症状均被大幅减轻。这项研究有望成为一种防止NASH进展的治疗方法。

39

Muraoka, S, et al., Iscience, 104012(2022). Comprehensive proteomic profiling of plasma and serum phosphatidylserine-positive extracellular vesicles reveals tissue-specific proteins. 全文

来源细胞

  人血清/人血浆

产品

  Heparin   Sodium
  TCEP Hydrochloride
  Lysyl EndopeptidaseR (Lys-C)
  Trypsin, Porcine, recombinant, Solution
  MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2

实验应用

  NTA/透射电子显微镜/WB/

  纳米LC-MS/MS/RNA-seq

全面分析来自健康试验对象血浆、血清的EV蛋白质。血浆和血清之间构成的蛋白质虽然有差异,但这有助于判断在摸索脏器特异性疾病的生物标记物时应该使用血浆还是血清更好。健康的个人间的血浆、血清中的EV蛋白质组成差异的数据,可能对发现生物标记物有帮助。

40

Shu, X, et al.,(2022). Photomodulation Alleviates the Senescence of Adipose-Derived Stem Cells Aging in Vitro. 全文

来源细胞

  小鼠脂肪干细胞

产品

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS

实验应用

  WB

脂肪干细胞(ASC)疗法作为具有前景的治疗方法广受关注。本研究调查了光处理对ASC老化的影响。发现在光处理后的ASC中,老化相关基因的mRNA表达减少了。而且,如果将该ASC的外泌体暴露于老化的ASC,细胞周期停止相关基因的表达会减少。这表明光处理ASC有望成为预防细胞老化的方法。

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
294-84101 MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2
MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2
2次用 基因研究用
290-84103 MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2
MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2
10次用 基因研究用

外泌体,COLO201细胞来源,纯化物 外泌体实验阳性对照用

外泌体,COLO201细胞来源,纯化物
外泌体实验阳性对照用

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

外泌体,COLO201细胞来源,纯化物                              外泌体实验阳性对照用

外泌体实验阳性对照用

外泌体,COLO201细胞来源,纯化物

外泌体,COLO201细胞来源,纯化物                              外泌体实验阳性对照用

本产品是纯化自COLO201细胞的高纯度外泌体。使用PS亲和法(Tim4和磷脂酰丝氨酸的亲和力)从COLO201细胞的培养上清中分离外泌体。

 


◆特点


● 高纯度

● 高稳定性

● 未冻干

● CD9,CD63,CD81蛋白阳性

 


◆规格


● 性状:溶液

● 组成:外泌体, TBS, EDTA, 聚合物(稳定剂)

● 外泌体浓度:10 μg/mL *


*根据CD63信号值修正蛋白浓度

 


◆通过蛋白印迹检测外泌体表面标记蛋白


将本产品以10 ng/Lane进行非还原SDS-PAGE,用抗体检测外泌体表面标记蛋白CD9, CD63, CD81。

外泌体,COLO201细胞来源,纯化物                              外泌体实验阳性对照用

一抗

• 抗CD9, 单抗(1K)(产品编号:014-27763

• 抗CD63, 单抗(3-13)(产品编号:012-27063

• 抗CD81, 单抗(17B1)(产品编号:011-27773

 

二抗

• 抗小鼠IgG, 过氧化物酶标记


结果显示,确认了各个外泌体表面标记蛋白的高水平表达。

 


另外,使用与上述相同的方法,用本产品和其他公司的5种外泌体作为样品,比较是否检测出CD63信号。各厂家的浓度都设为10 ng/Lane。

外泌体,COLO201细胞来源,纯化物                              外泌体实验阳性对照用

 

Lane No.

① 本产品

② 其他公司产品1:A549细胞来源外泌体

③ 其他公司产品2:HEK293细胞来源外泌体

④ 其他公司产品3:A549细胞来源外泌体

⑤ 其他公司产品4:COLO1细胞来源外泌体

⑥ 其他公司产品5:HCT116细胞来源外泌体


一抗

抗CD63, 单抗(3-13)(产品编号:012-27063


二抗

抗小鼠IgG, 过氧化物酶标记


结果显示,只有本产品检测出CD63信号。

 


◆使用NanoSight分析外泌体粒径


使用NanoSight分别分析本产品和其他公司的产品粒径。

本产品

其他公司产品:A549细胞来源外泌体

外泌体,COLO201细胞来源,纯化物                              外泌体实验阳性对照用

外泌体,COLO201细胞来源,纯化物                              外泌体实验阳性对照用

结果显示,本产品的粒径比较均一

 

◆反复冷冻和融解后的外泌体结构


通过电子显微镜,观察本产品在-20°C下冷冻和在室温下融解反复操作15次后的结构。

外泌体,COLO201细胞来源,纯化物                              外泌体实验阳性对照用

结果显示,反复冻融仍能保持其结构。



◆产品列表


产品编号

产品名称

规格

包装

052-09301

Exosomes, from COLO201 cells, purified
外泌体,COLO201细胞来源,纯化物

基因研究用

50 μL

◆相关产品


外泌体提取·纯化试剂

产品编号

产品名称

规格

包装

299-77603

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS
MagCapture™外泌体提取试剂盒PS

基因研究用

2次用

293-77601

基因研究用

10次用

298-80601

PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP)
PS Capture™外泌体ELISA试剂盒 (链霉亲和素HRP)

基因研究用

96次用

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。


外泌体流式细胞仪检测试剂盒

产品编号

产品名称

规格

包装

297-79701

PS Capture™ Exosome Flow Cytometry Kit
PS Capture™外泌体流式试剂盒

基因研究用

300次用

外泌体封闭试剂

产品编号

产品名称

规格

包装

058-09261

EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent
EV-Save™ 细胞外囊泡吸附抑制剂

基因研究用

1 mL

外泌体标记抗体


产品编号

产品名称

规格

包装

016-27061

Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13)
抗CD63单抗(3-13)

免疫化学用

20 μL

012-27063

100 μL

018-27641

Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13),
Fluorescein Conjugated
抗CD63,单克隆抗体(3-13),荧光素结合

免疫化学用

25次用

014-27643

100次用

013-27711

Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13),
Biotin Conjugated
抗CD63单克隆抗体(3-13),生物素偶联

免疫化学用

20 μL

019-27713

100 μL

011-27751

Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13),
Red Fluorochrome(635) Conjugated
抗CD63单克隆抗体(3-13),红色荧光染料(635)偶联

免疫化学用

25次用

017-27753

100次用

018-27761

Anti CD9, Monoclonal Antibody (1K)
抗CD9单克隆抗体(1K)

免疫化学用

20 μL

014-27763

100 μL

015-27771

Anti CD81, Monoclonal Antibody (17B1)
抗CD81单克隆抗体(17B1)

免疫化学用

20 μL

011-27773

100 μL