EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

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EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒


EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒是一款可实现外泌体等细胞外囊泡(EV: Extracellular vesicle)内部蛋白检测的前处理试剂。至今研发的PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒系列和 PS Capture™ 外泌体流式试剂盒的检测对象仅限于外泌体表面标记物。但是,通过使用EV-Perm™处理外泌体样品,可提高外泌体的膜通透性,使抗体渗透到外泌体内部,从而检测存在于内部的标记蛋白。

※ 请配合PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒和 PS Capture™ 外泌体流式细胞术试剂盒使用本试剂。另外,检测抗体需单独制备。

◆特点

● 试剂盒的试剂(3种)可提高外泌体的膜渗透性

● 配合使用ELISA试剂盒和流式试剂盒,可检测外泌体内部的蛋白

● 除纯化外泌体外,还可用于细胞培养上清和体液样品

◆适用样品

 纯化外泌体(细胞外囊泡)

 细胞培养上清

 体液(血清和血浆)样品

◆内部抗原检测原理

①  捕获外泌体

ELISA板或磁珠固定化的Tim4蛋白

与外泌体表面的磷脂酰丝氨酸结合

② 提高膜渗透性

通过添加EV-Perm™,

提高外泌体的膜渗透性

③ 检测内部抗原

使抗体可渗透到外泌体内部,

并检测蛋白

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

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◆应用实例

使用ELISA试剂盒检测内部标记物

使用EV-Perm™对外泌体样品进行渗透预处理,对从HEK293T细胞培养上清中纯化的外泌体内部的Alix,以及从H4细胞培养上清中纯化的外泌体内部的α-synuclein使用PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒(链霉亲和素HRP)进行检测。

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

【结果】通过渗透处理,使用ELISA试剂盒可检测外泌体内部的Alix、α-synuclein。

使用流式试剂盒检测内部标记物

使用EV-Perm™渗透处理,对从HEK293T细胞培养上清中纯化的外泌体内部的Alix、以及外泌体表面的CD63使用PS Capture™ 外泌体流式试剂盒进行检测。

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

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【结果】通过渗透处理,使用流式试剂盒可检测外泌体内部的Alix。

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想要使用ELISA Kit和EV-Perm™定量分析EV内部表达的标记蛋白A,有何建议的方法?

1. 准备能分泌含标记蛋白A的外泌体的细胞株(若没有,也可使用含有带标记蛋白A的外泌体的体液样品)


2. 从上述细胞株的培养上清(或体液样品)中纯化外泌体

2. ⇒通过Western blotting或外泌体提取液的ELISA检测确认标记蛋白A的存在

2. ⇒检测纯化外泌体的蛋白浓度或粒子数


3. 进行预实验(确认EV-Perm™ 处理、以及使用的生物素标记抗体是否有效)。

2. (1)制备上述纯化外泌体的系列稀释(一种通过一系列步骤稀释样品的方法),根据试剂盒的实验操作步骤,使用PS Capture™ ELISA试剂盒分

2. (1)别在有/无EV-Perm™ 处理的条件下,确认是否能检测出CD63与标记蛋白A的信号。

2. (2)在探讨(1)的同时,还需要讨论合适的生物素标记抗体的稀释倍数、链霉亲和素-HRP的稀释倍数(确认作为对照检测的CD63信号是否在

2. (1)有/无EV-Perm™ 处理的条件下均能被检测。此外,与未经EV-Perm™ 处理的样品相比,经EV-Perm™ 处理检测到的CD63信号略低。并

2. (1)且,适用于检测标记蛋白A和检测CD63的生物素标记抗体的稀释倍数、链霉亲和素-HRP的稀释倍数可能有所差异。)

上述讨论中,在经EV-Perm™ 处理的条件下如检测到标记蛋白A的信号,建议在经EV-Perm™ 处理的ELISA检测的450 nm吸光度值(减去620 nm亚波长吸光度值后的值)的0.1~0.2之间讨论纯化外泌体的稀释倍数,并确定制备标准曲线用纯化外泌体的系列稀释。

4. 进行本实验。

4. 制备标准曲线(此步骤需使用进行EV-Perm™ 处理)

2. (1)制备标准品(纯化外泌体)的标记蛋白A信号落在ELISA检测的450 nm吸光度(减去620 nm亚波长吸光度后的值)的0.1~0.2之间的系列

2. (1)稀释。 稀释使用试剂盒配套的Reaction Buffer。

2. (2)制备在已设定的标准曲线吸光度范围内的样品稀释液(建议在预实验时讨论、确定合适的稀释倍数)

2. 检测、计算样品浓度(此步骤需要使用ELISA试剂盒进行处理)

2. (1)对N=2时的标准品的系列稀释液和样品稀释液进行检测。 

2. (2)根据标记蛋白A的检测吸光度制备标准曲线,计算各样品的浓度(标准品的相对浓度)。

2. (3)比较各样品的标记蛋白A的浓度。

EV-Perm™ 外泌体膜渗透处理用试剂盒

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