重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

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重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

用于免疫反应中协同刺激激活的高活性、高纯度CD40L蛋白质

◆特点

● 高活性MEGACD40L® 低聚物模拟体内膜辅助CD40L聚合和激活而无需增强剂

● 高纯度,低内毒素水平

● 丰富的生产经验保证产品批次间一致性和可靠性

● 优化的配方以增强稳定性并提高活性

MEGACD40L是一种高活性蛋白,是两个三聚体CD40配体分子通过Adiponectin/ACRP30/AdipoQ的胶原域人工连接而成。在体内,这种蛋白质能有效的模拟CD40L的天然膜辅助聚合。可简单有效的替代 [CD40L+增强剂]组合(产品编号:ALX-850-064)。

◆产品规格

别名

  CD40L:ACRP30headless, CD154:ACRP30headless TNFSF 5:ACRP30headless, gp39:ACRP30headless

分子量

  ~38 kDa

来源

  CHO细胞表达。人CD40L(CD154)(aa 116-261)与小鼠ACRP30headless(aa 18-111)N端以及一个

  FLAG® -tag融合。

UniProt ID

  P29965 (human CD40L), Q60994 (mouse Adiponectin)

浓度

  复溶后0.1 mg/mL

产品类型

  冻干,含PBS

纯度

  ≥90%(SDS-PAGE)

纯化细节

  多步层析纯化

内毒素含量

  ≤0.01EU/μg 纯化蛋白(LAL 测试;Cape Cod Associates)

生物活性

  与人CD40结合。B细胞激活(已证明存在CD86剂量依赖性上调)

应用

  可用于调节免疫和炎症反应,作为免疫治疗的临床前研究的一种蛋白质工具,用来监测病人接受化疗的过程

  以及模拟自体免疫反应表型。

配制

  用100 μL的无菌水溶解。以含5%胎牛血清的培养基进行进一步稀释。

运输

  冰袋运输

长期储存

  -20℃

使用/稳定性

  收货后可稳定储存在-20℃至少6个月

处理

  避免反复冻融。复溶后,分装成小份储存于-20℃。

技术信息/产品说明

  FLAG是Sigma-Aldrich Co.的注册商标。

◆应用实例

重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

MEGACD40L® (产品编号:ALX-522-110)激活B淋巴细胞。方法:外周血单核细胞(PBMCs)37℃、5%CO2 在48孔板(1×106 细胞/孔)中培养48小时。每孔包含200 μL已梯度稀释的MEGACD40L® 无血清测试培养基。处理后,清洗细胞,用小鼠anti-human CD19-PE和小鼠anti-humanCD86-APC进行双重染色,然后用流式细胞术进行分析。所示数据为在不同的MEGACD40L® 浓度下,共染色为CD19+ 和CD86+ B细胞的百分数。

重组人MEGACD40L®(可溶)(产品编号:ALX-522-110)结构示意图


重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

PBMCs(外周血单核细胞)37℃、5%CO2 在48孔板(1×106细胞/孔)中培养48小时,每孔包含200 μL已梯度稀释的MEGACD40L®(产品编号:ALX-522-110)无血清测试培养基、CD40L(产品编号:ALX-522-015)和CD40L+2 μg/mL 增强剂(产品编号:ALX-804-034)。处理后,用PBS+1%BSA清洗细胞3次。用小鼠anti-human CD19(PE偶联)和小鼠anti-humanCD86(APC偶联)进行双重染色,4℃,2小时。用PBS+1%BSA清洗细胞3次,用PBS重悬。样品用BD Facs Calibur 流式细胞分析仪进行分析。所示数据为在不同的浓度下CD86+B细胞百分数/CD19+B细胞百分数。

重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

1000 ng/mL、7个连续批次的MEGACD40L® 用于B细胞激活实验数据


重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

通过在指定的温度下储存蛋白2个月来进行MEGACD40L® 稳定性测试。用B细胞激活实验来进行蛋白活性测试。结果显示在严苛的储存条件下MEGACD40L® 仍能保持较好的活性。

◆相关产品


产品编号

产品名称

包装

产品描述

ALX-522-120-C010

MEGACD40L (soluble) (mouse), (recombinant)
MegaCD40L (可溶性) (小鼠), (重组)

10 μg

用于免疫反应中协同激活活性的高活性、高纯度CD40L蛋白。

ALX-850-064-KI01

CD40L, soluble (human) (recombinant) set
CD40L, 可溶性 (人) (重组) 套装

1 set

配体+增强剂用于提高稳定性和增强免疫活性。

ADI-CSA-187-E

CD 40L monoclonal antibody (5F3)
CD40L, 单抗 (5F3)

100 μg

流式细胞术

ALX-805-037-C100

CD40L (human) monoclonal antibody (blocking) (MK13A4)
CD40L (人), 单抗 (封闭作用) (MK13A4)

100 μg

流式细胞术,FUNC

ALX-522-015-6010

CD40L (soluble) (human), (recombinant)
  CD40L (可溶性) (人), (重组)

6×10 μg

增加对B细胞的刺激。
E.coli 表达。人CD40L(CD154)(aa 116-261)胞外区域与一个短肽(6 aa)的N端以及一个FLAG®-tag融合,≥95%(SDS-PAGE),ELISA

ALX-522-015-2010

2×10 μg

ALX-522-015-C010

10 μg

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。

相关资料

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重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)megaCD40L_QF.PDF

参考文献

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MEGACD40L-cited-examples

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Artesunate shows potent anti-tumor activity in B-cell lymphoma: T. K. Vatsveen, et al.; J. Hematol. Oncol. 11, 23 (2018)


 2.

CD40L and TNF both activate the classical NF-κB pathway, which is not required for the CD40L induced alternative pathway in endothelial cells: J. Seigner, et al.; Biochem. Biophys. Res. Commun. 495, 1389 (2018)


 3.

CD40L mediated alternative NFκB-signaling induces resistance to BCR-inhibitors in patients with mantle cell lymphoma: H. Rauert-Wunderlich, et al.; Cell Death Dis. 9, 86 (2018)


 4.

Characterisation of anifrolumab, a fully human anti-interferon receptor antagonist antibody for the treatment of systemic lupus erythematosus: J.M. Riggs, et al.; Lupus Sci. Med. 5, (2018)


 5.

Engineering protein-secreting plasma cells by homology-directed repair in primary human B cells: K.L. Hung, et al.; Mol. Ther. 26, 456 (2018)


 6.

High PD-L1/CD86 MFI ratio and IL-10 secretion characterize human regulatory dendritic cells generated for clinical testing in organ transplantation: A.F. Zahorchak, et al.; Cell. Immunol. 323, 9 (2018)


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In vitro antineoplastic effects of auranofin in canine lymphoma cells: H. Zhang, et al.; BMC Cancer 18, 522 (2018)


 8.

CD40 signaling in Graves disease is mediated through canonical and noncanonical thyroidal nuclear factor κB activation: H.J. Lee, et al.; Endocrinology 158, 410 (2017)


 9.

Cutting Edge: Active TGF-β1 Released from GARP/TGF-β1 Complexes on the Surface of Stimulated Human B Lymphocytes Increases Class-Switch Recombination and Production of IgA: O. Dedobbeleer, et al.; J. Immunol. 199, 391 (2017)


10.

Down‐regulation of CD73 on B cells of patients with viremic HIV correlates with B cell activation and disease progression: E.S. Kim, et al.; J. Leukoc. Biol. 101, 1263 (2017)


11.

Human secretory IgM emerges from plasma cells clonally related to gut memory B cells and targets highly diverse commensals: G. Magri, et al.; Immunity 47, 118 (2017)


12.

Regulation of cell surface CB2 receptor during Human B cell activation and differentiation: J.T. Castaneda, et al.; J. Neuroimmune Pharmacol. 12, 544 (2017)


13.

CD40 expression in fibrocytes Is induced by TSH: potential synergistic immune activation: T. Mester, et al.; PLoS One 11, e0162994 (2016)


14.

Distinct TLR-mediated cytokine production and immunoglobulin secretion in human newborn naïve B cells: M.A. Pettengill, et al.; Innate Immun. 22, 433 (2016)


15.

Expression of HIV-1 matrix protein p17 and association with B-cell lymphoma in HIV-1 transgenic mice: V.A. Carroll, et al.; PNAS 113, 13168 (2016), Application(s): Human B cells culture


16.

T-helper signals restore B-cell receptor signaling in autoreactive anergic B cells by upregulating CD45 phosphatase activity: P. Szodoray, et al.; J. Allergy Clin. Immunol. 138, 839 (2016), Application(s): Cell culture


17.

A human monoclonal antibody targeting the conserved staphylococcal antigen IsaA protects mice against Staphylococcus aureus bacteremia: S. van den Berg, et al.; Int. J. Med. Microbiol. 305, 55 (2015), Application(s): ELISA, PCR of human blood samples


18.

CD40L Induces Functional Tunneling Nanotube Networks Exclusively in Dendritic Cells Programmed by Mediators of Type 1 Immunity: C. Zaccard, et al.; J. Immunol. 194, 1047 (2015), Application(s): Activation of mature human dendritic cells


19.

Detection of IκB degradation dynamics and IκB-α ubiquitination: P. Starokadomskyy, et al.; Methods Mol. Biol. 1280, 15 (2015)


20.

Establishing the pig as a large animal model for vaccine development against human cancer: N.H. Overgaard, et al.; Front. Genet. 6, 286 (2015), Abstract; Full Text


21.

Haploinsufficiency of the NF-κB1 subunit p50 in common variable immunodeficiency: M. Fliegauf, et al.; Am. J. Hum. Genet. 97, 389 (2015)


22.

Mechanism and functional impact of CD40 ligand-induced von Willebrand factor release from endothelial cells: K. Möller, et al.; Thromb. Haemost. 113, 1095 (2015)


23.

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24.

Phenotypic Approaches to Identify Inhibitors of B Cell Activation: E. B. Rex, et al.; J. Biomol. Screen. 20, 876 (2015), Application(s): Assay


25.

Systemic agonistic anti-CD40 treatment of tumor-bearing mice modulates hepatic myeloid-suppressive cells and causes immune-mediated liver damage: J. Medina-Echeverz, et al.; Cancer Immunol. Res. 3, 557 (2015)


26.

A GPBAR1 (TGR5) small molecule agonist shows specific inhibitory effects on myeloid cell activation in vitro and reduces experimental autoimmune encephalitis (EAE) in vivo: N. Lewis, et al.; PLoS One 9, e100883 (2014), Application(s): Assay of human PBMC


27.

Development of a novel anti-canine CD20 monoclonal antibody with diagnostic and therapeutic potential: D. Ito, et al.; Leuk. Lymphoma 56, 219 (2014), Application(s): Analysis of canine B-cell lymphoma cells


28.

Exosomes Derived from Burkitt’s Lymphoma Cell Lines Induce Proliferation, Differentiation, and Class-Switch Recombination in B Cells: C. Gutzeit, et al.; J. Immunol. 192, 5852 (2014), Application(s): PCR, Assay of human B cells


29.

Preclinical evaluation of the novel, orally bioavailable Selective Inhibitor of Nuclear Export (SINE) KPT-335 in spontaneous canine cancer: results of a phase I study: C. London, et al.; PLoS One 9, e87585 (2014), Application(s): Analysis of canine tumor cells by WB, FLOW


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Thyrotropin receptor and CD40 mediate interleukin-8 expression in fibrocytes: implications for thyroid-associated ophthalmopathy (an American Ophthalmological Society thesis).: R. Douglas, et al.; Trans. Am. Ophthalmol. Soc. 12, 26 (2014), Application(s): In vitro analysis of human fibrocytes


31.

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32.

Blood CD4+CD45RO+CXCR5+ T cells are decreased but partially functional in signal transducer and activator of transcription 3 deficiency: F. Mazerolles, et al.; J. Allergy Clin. Immunol. 131, 1146 (2013), Application(s): Assay of blood cells


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CD40 ligand is necessary and suffi cient to support primary diff use large B-cell lymphoma cells in culture: a tool for in vitro preclinical studies with primary B-cell malignancies: D. Ito, et al.; Leuk. Lymphoma 53, 1390 (2012), Application(s): Flow cytometry of human B cells


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40.

Study of patients with Hyper-IgM type IV phenotype who recovered spontaneously during late childhood and review of the literature: N. Karaca, et al.; Eur. J. Pediatr. 170, 1039 (2011), Application(s): Determining human B-cell function in Hyper-IgM blood samples


41.

Human TRAF3 adaptor molecule deficiency leads to impaired Toll-like Receptor 3 response and susceptibility to Herpes Simplex Encephalitis: R. Perez de Diego, et al.; Immunity 33, 400 (2010)


42.

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43.

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44.

Two adjacent trimeric Fas ligands are required for Fas signaling and formation of a death-inducing signaling complex: N. Holler, et al.; Mol. Cell. Biol. 23, 1428 (2003)

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
ALX-522-110-C010  MEGACD40L (soluble) (human), (recombinant)
重组人Mega CD40L(可溶) 
10 μg
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CleanCap® mRNA 含Capping结构的高活性mRNA

CleanCap® mRNA
含Capping结构的高活性mRNA

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含Capping结构的高活性mRNACleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

CleanCap® mRNA

TriLink BioTechnologies开发的CleanCap® mRNA是一种包被了特定蛋白的加帽mRNA。

本系列产品有Cas9、Cre、EGFP、Luciferase、mCherry、β-gal、EPO、OVA(ovalbumin)可供选择。

TriLink公司的CleanCap® mRNA能够作为高活性的mRNA使用,通过Capping(加帽)避免生物体内发生免疫应答,改善in vivo条件下的翻译效率。

◆CleanCap® 是什么?:为mRNA添加Cap 1 结构

TriLink公司的CleanCap® mRNA可以通过在mRNA上添加Capping结构(Cap 1)来避免生物体内发生免疫应答,从而合成具有高翻译效率的mRNA。


CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

◆TriLink公司的CleanCap® mRNA特点

1. 加帽效率高达94%+,可获得更高活性的mRNA。

2. 不会激活模式识别受体,可避免免疫应答

3. 相较于Cap 0结构(ARCA法加帽),in vivo条件下的翻译效率得到了大幅改善

4. 相较于酶加帽法,所需成本大幅降低

5. 加帽修饰mRNA产品系列丰富

◆CleanCap®和ARCA(Anti-reverse capping analog)法的比较

将从以下两点比较ARCA法和CleanCap®加帽的mRNA。

● 加帽效率

● 细胞内蛋白的表达量

加帽效率的比较

分别使用CleanCap®和ARCA加帽表达Fluc的mRNA,比较两者的加帽效率。

结果显示,使用CleanCap® 获得的加帽效率比ARCA法高。

CleanCap®

ARCA

90-99%

60-80%

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

细胞内蛋白表达水平的比较

分别使用CleanCap®和ARCA法加帽表达EGFP的mRNA后,使其在细胞内表达,并通过荧光显微镜进行观察。

比较以下5种细胞:CHO cells、Foreskin fibroblast cells、iPS derived cardiomyoctyes、Jurkat、MCF 10A

结果显示,无论在哪一种细胞中,使用CleanCap®加帽的EGFP mRNA的蛋白表达水平都更高。


ARCA EGFP mRNA

CleanCap® EGFP mRNA

   CHO Cells

   6 minute fusion Fuse-It-mRNA Kit

   1μg mRNA
   72 h post fusion

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

   Foreskin fibroblast cells,
   10 minute fusion Fuse-It-mRNA Kit
   1μg mRNA
   24 h post fusion

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

   iPS derived cardiomyoctyes,
   10 minute fusion Fuse-It-mRNA Kit
   1μg mRNA
   24 h post fusion

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

Data courtesy of Beniag  

ARCA EGFP mRNA

CleanCap® EGFP mRNA

   Jurkat: 500ng
   mRNA + 1µL
   jetMESSENGER

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

   MCF 10A: 500ng
   mRNA + 1µL
   jetMESSENGER

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

Data courtesy of Polyplus-transfection  

CleanCap®与酶加帽法的制备成本比较

计算4 mL(2 mg)和1 mL(400 μg)两种规格制备加帽mRNA时所需的成本。

结果显示,CleanCap®与酶加帽法相比,生产成本更低。

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

◆与修饰mRNA的组合:置换尿苷

为使mRNA能够高效表达,需最大限度地去除mRNA序列中的Uridine(尿苷),并将残留的Uridine置换为Pseudo Uridine(PseudoU,假尿苷)或5-methoxy Uridine(5moU,5-甲氧基尿苷)。

TriLink公司提供多种CleanCap®与Pseudo Uridine、5-methoxy Uridine组合的mRNA产品。

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

Thp-1 Dual Cells (InvivoGen)

准备2种表达Fluc的mRNA,正常序列(Standard Fluc)与尽可能去除尿苷的序列(U depleted Fluc),比较两者的表达水平。

此外,在没有进行尿苷置换(wt)、置换为Pseudo Uridine(PseudoU)和置换为5-methoxy Uridine(5moU)的条件下进行比较。

结果显示,在U depleted Fluc(尽可能去除尿苷的序列)和置换为5-methoxy Uridine(5moU:甲氧基尿苷)的序列中,Fluc的表达水平更高。

◆RNA定制合成服务

TriLink公司可提供RNA定制合成服务:化学合成短链RNA服务、转录合成长链RNA。定制项目包含加帽、修饰碱基、缓冲液组成、纯化方法开发等。从使用修饰碱基的向导RNA合成到大规模mRNA合成服务均可提供,可满足客户广泛的需求。

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA

mRNA定制合成(in vitro转录合成)的服务内容

目标回收量:1 mg~

修饰碱基:Pseudouridine, 5-Methoxyuridine, 5-Methylcytidine/Pseudouridine等

加帽试剂:CleanCap®

定制示例

● 只需ORF序列的mRNA合成

● UTR序列和ORF序列的mRNA合成

欢迎与我们联系,进一步了解定制服务。

◆关于TriLink BioTechnologies

CleanCap® mRNA                              含Capping结构的高活性mRNA


TriLink BioTechnologies是一家位于美国圣地亚哥的试剂、药物生产定制公司,专注于核酸、寡核苷酸、加帽类似物的生产和长链RNA合成。

CleanCap® mRNA是TriLink研发的新型共转录加帽法,与常规加帽法相比,可实现高加帽效率蛋白表达效率

TriLink生产符合ICH Q7以及ISO 9001:2015。

◆产品列表

Cas9 mRNA

产品编号

产品名称

产品规格

550-33824

CleanCap Cas9 mRNA

1 mg

552-33823

100 μg

558-33744

CleanCap Cas9 mRNA (5moU)

1 mg

550-33743

100 μg

555-33754

CleanCap Cas9 Nickase mRNA (5moU)

1 mg

551-33751

20 μg

557-33753

100 μg

Cas9 mRNA是在Broad、MIT、Harvard、Iowa、UTokyo以及Rockefeller授予的限制性许可下提供的产品。

Cre mRNA

产品编号

产品名称

产品规格

555-33793

CleanCap Cre mRNA (5moU)

1 mg

559-33791

100 μg

EGFP mRNA

产品编号

产品名称

产品规格

555-33793

CleanCap EGFP mRNA

1 mg

559-33791

100 μg

552-33703

CleanCap EGFP mRNA (5moU)

1 mg

556-33701

100 μg

mCherry mRNA

产品编号

产品名称

产品规格

556-33723

CleanCap mCherry mRNA (5moU)

1 mg

550-33721

100 μg

Luciferase mRNA

产品编号

产品名称

产品规格

555-33813

CleanCap FLuc mRNA

1 mg

559-33811

100 μg

559-33713

CleanCap FLuc mRNA (5moU)

1 mg

553-33711

100 μg

553-33733

CleanCap Renilla mRNA (5moU)

1 mg

557-33731

100 μg

β-gal mRNA

产品编号

产品名称

产品规格

559-33833

CleanCap beta gal mRNA

1 mg

553-33831

100 μg

554-33763

CleanCap beta gal mRNA (5moU)

1 mg

558-33761

100 μg

EPO mRNA

产品编号

产品名称

产品规格

559-33774

CleanCap EPO mRNA (5moU)

1 mg

551-33773

100 μg

OVA mRNA

产品编号

产品名称

产品规格

558-35503

CleanCap Ova mRNA

1 mg

552-35501

100 μg

558-33783

CleanCap Ova mRNA (5moU)

1 mg

552-33781

100 μg

◆相关产品

加帽试剂

产品编号

产品名称

产品规格

559-35511

CleanCap Reagent AG

1 μmol

553-35514

5 μmol

555-35513

10 μmol

553-35531

CleanCap Reagent (3' OMe) AG

1 μmol

557-35534

5 μmol

559-35533

10 μmol

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。

AMBI特约代理

AMBI—专业供应高纯度高活性的重组溶葡萄球菌酶

AMBI是一家专业致力于溶葡萄球菌酶的研发、生产和销售的高科技生物技术公司。溶葡萄球菌酶(Lysostaphin),一种特异裂解葡萄球菌细胞壁肽聚糖的肽链内切酶,是一个强有力的抗葡萄球菌试剂,AMBI公司拥有克隆的溶葡萄球菌酶基因的。溶葡萄球菌酶因其裂解葡萄球菌,因而被广泛应用于遗传及生化研究时制备葡萄球菌的DNA时或该菌的其他细胞组分,以及用于制备转化实验的细胞原生质,是一种有效的研究及诊断工具,可用于临床及其它微生物学家在流行病学研究。AMBI1991年开始即生产和销售重组的高纯度高活性溶葡萄球菌酶,有着悠久的溶葡萄球菌酶研发与生产、销售经验,为广大用户提供价优物廉的*产品。所供应的溶葡萄球菌酶纯度高于93%,活性高达3,990 units/mg,欢迎广大客户咨询选购。

货号

规格

单价

50 mg

LSPN-50

9350

500 mg

LSPN-500

76500

1-3 g

LSPN-1000

136000/g

> 4 g

LSPN-1000

115600/g

 

蛋白酶k现货供应


蛋白酶k现货供应

简要描述:蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌(tritirachium album limber)中纯化得到。

详细介绍

产品咨询

 

蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌(tritirachium album limber)中纯化得到。据资料显示:该酶有两个ca2+结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然而,如果从该酶中除去ca2+,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以,蛋白酶k消化过程中通常加入edta(以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGTA(ph8.0)至终浓度为2mmol/l,以鳌合ca2+。

 

  蛋白酶K,是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定,还具有降解天然蛋白质的能力,因而它应用很广泛,包括制备脉冲电泳的染色体DNA,蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性。

 

  推荐反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。

 

  蛋白酶K配制标准:20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K):将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K*溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

 

蛋白酶k的作用

  值得注意的是,蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果.

 

蛋白酶k的保存

  保存:保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,有效保证12月。

 

  孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。

 

编辑本段广泛应用

  蛋白酶K已广泛应用在皮革毛皮丝绸医药食品酿造等方面。皮革工业的脱毛软化已大量利用蛋白酶,既节省时间,又改善劳动卫生条件。蛋白酶还可用于蚕丝脱胶、肉类嫩化、酒类澄清。临床上可作药用,如用胃蛋白酶治疗消化不良,用酸性蛋白酶治疗支气管炎,用弹性蛋白酶治疗脉管炎以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对外科化脓性创口的净化及胸腔间浆膜粘连的治疗。加酶洗衣粉是洗涤剂中的新产品,含碱性蛋白酶,能去除衣物上的血渍和蛋白污物,但使用时注意不要接触皮肤,以免损伤皮肤表面的蛋白质,引起皮疹、湿疹等过敏现象。

产品简介:
货号: GPE-2009001
批号: 201003008
规格: 每个独立包装中含有100毫克的蛋白酶K冻干粉
比活性值: 40 U/mg蛋白,17.5 U/mg干粉
来源种属: 林伯氏白色念球菌(Tritirachium album limber)
相对分子质量:29,730
贮存条件:
干粉状态可在2~4ºC条件下低温保藏。使用时,建议将每个独立包装的干粉全部溶解,分装为适当体积后,-20ºC贮存。
正确的贮存条件下,干粉状态的有效期可达一年。液体状态的有效期为半年。打开包装使用后,如果在2~8ºC环境下放置超过一周时间,建议过滤除菌后再用于实验。
贮存缓冲液:20 mM Tris-HCl (pH 7.4),1 mM氯化钙,50%甘油(稀释用缓冲液不含甘油)。
质量控制:
活性单位定义
37ºC、pH 7.5条件下,每分钟可水解底物酪蛋白生成1 μmol酪氨酸的蛋白酶K 的量,定义为一个单位(U)。
脱氧核糖核酸酶残留
以λ DNA为底物,37ºC消化6小时以上,未检测到脱氧核糖核酸酶活性。
核糖核酸酶残留
25ºC消化16小时以上,未检测到核糖核酸酶活性。
产品用途:
蛋白酶K是一种用途广泛的非特异性的丝氨酸蛋白酶。在pH 4到pH 12的条件下均有活性,在SDS、尿素或EDTA存在时亦很稳定。常用于提取mRNA、基因组DNA,或用于从各种细胞中提纯DNA和RNA时消化杂蛋白。还可用于糖蛋白的修饰,以及蛋白质结构研究等方面。

 

 

订货信息:

货号 产品名称 规格 纯度 活性单位 单价(元/100mg) 品牌
3508838103 蛋白酶K 100mg ≧95% ≧35U/mg RMB:300 ROCHE
1.24568.0100  蛋白酶K 100mg ≧95% ≧35U/mg RMB:300 MERCK