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KlenTaq1说明书

KlenTaq1是一种热稳定性 DNA 聚合酶，由基因的 5' 缺失表达，编码 Thermus Aquaticus DNA 聚合酶，留下高活性甚至更耐热的 DNA 聚合酶活性。在反应缓冲液 PC2 中反复暴露于 980°C 似乎不会降低酶活性。即使暴露于 990°C 后仍保持显着活性。全长酶不能耐受这些处理。              ‍‍‍

  所述   KlenTaq1 ™酶缺少野生型全长Taq DNA聚合酶的N-末端部分。这部分蛋白质与大肠杆菌 DNA 聚合酶 1 的 5' – 核酸外切酶区域同源。  因此，KlenTaq1 ™ 与 Hoffman LaRoche 的 Stoffel 片段相似但又不同。           

     对于KlenTaq1不含甘油（目录号1001 NGKT）：储存酶，并于4℃下的缓冲液中。储存缓冲液为 50 mM 硫酸铵、20 mM Tris-HCl pH 8.55、0.1 mM EDTA、10 mM 巯基乙醇、无明胶和 0.5% Thesit。               

对于50% 甘油中的KlenTaq1 （货号 1001）：将酶储存在 -200°C，将缓冲液储存在 40°C。储存缓冲液中的甘油可防止在 -20°C 下冻结，但 Thesit 在此温度下会导致一些增稠。它是可选的，但建议在分配前在冰上加热至 0°C。对于长期储存，可以采用 -70°C 或 -80°C，但我们建议酶不要冷冻超过一次。重新冷冻和解冻会导致酶活性降低。储存缓冲液为 50% 甘油 (v/v; 63% w/v)、50 mM 硫酸铵、20 mM Tris-HCl pH 8.55、0.1 mM EDTA、10 mM 巯基乙醇、无明胶和 0.5% Thesit。               

  浓度：5 个  KlenTaq1™单位（72°C 下 30 分钟内掺入 60 nmole）。活化的鲑鱼精z DNA 是模板；PC2（见下文）是缓冲区。注意，这些单位比标准单位大 6 倍。以标准单位（10 nmole/30 分钟）计算，此处的酶浓度约为 30 单位/毫升。                   

尽管该酶在各种条件下都能很好地发挥作用，但推荐的反应缓冲液 PC2 是：50 mM Tris-HCl pH 9.1、16 mM 硫酸铵、3.5 mM MgCl2 和 150 mg/ml BSA（随订单提供） . 请注意，与热稳定 DNA 聚合酶的其他缓冲液相比，不含 KC1 和明胶。dNTP 浓度可以从每个 50 µM 到每个 1.2 mM，但通常使用 200 µM。如果 DNA 掺入超过 500 bp，您将需要比 Taq 蛋白更多的KlenTaq1™蛋白。如果使用与全长 Taq DNA 聚合酶相同的量（罗氏推荐），KlenTaq1™ 以 25-30 u/µl 的浓度运输，因此它可以轻松整合 2000 bp。
                   

 1 DNA 掺入单位 = 10 nmoles / 30 min='标准单位'。罗氏的酶每微升含有 5 个“标准单位”。KlenTaq1™每微升含有 25-30 个“标准单位”。               

      罗氏建议每 100 微升反应使用 0.5 微升；也就是说，1 微升将催化 2 个反应。进行反应所需的KlenTaq1™量取决于掺入的长度。对于KlenTaq1™ ，在 100 微升反应中，1 微升将催化 15-20 次 500 bp 反应和 8-10 次 1 kb 反应和 3-5 次 2kb 模板 DNA 反应。由于过量的 KlenTaq1™ 是无害的，我们保守地建议每次反应使用 0.50 微升，以确保最大 2.5 kb 的所有物质都有效。这就是我们检查和滴定酶的方法。

参考巴恩斯，WM，基因，卷。112，第 29-35 页，1992 年。巴恩斯，WM，PNAS，卷。19，第 2216-2220 页，1994 年 3 月。Baskaran, N. 等，基因组研究，卷。6，第 633-638 页，1996 年。
NB 对于KlenTaq1不含甘油（目录号1001 NGKT）：储存酶，并于4℃下的缓冲液中。  对于50% 甘油中的KlenTaq1 （目录号 1001）：将酶储存在 -200°C，将缓冲液储存在 40°C。