SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit
SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒
◆试剂盒组成
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20 Reactions
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RT酶混合物（20×）
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20 µL x 1支
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一步反应混合物（2×）
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200 μL x 1支
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484E Wild Type Primer & Probe Mixture（probe：FAM）
484E野生型引物＆探针混合物（探针：FAM）
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10 µL x 1支
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E484K Mutant Type Primer & Probe Mixture（probe：FAM）
E484K突变型引物＆探针混合物（探针：FAM）
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10 µL x 1支
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200 Reactions
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RT酶混合物（20×）
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200 µL x 1支
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一步反应混合物（2×）
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1 mL x 2支
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484E Wild Type Primer & Probe Mixture（probe：FAM）
484E野生型引物＆探针混合物（探针：FAM）
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100 µL x 1支
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E484K Mutant Type Primer & Probe Mixture（probe：FAM）
E484K突变型引物＆探针混合物（探针：FAM）
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100 µL x 1支
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◆背景
新冠病毒突变株在世界范围内不断扩散，感染人数也在不断增多。
有报告指出，新冠病毒Beta（B.1.351）突变株和Gamma（P.1）突变株含有的E484K突变或会逃避免疫，使疫苗的效果降低1-3）。
※ Beta（B.1.351）突变株：在南非首次发现的突变株
※ Gamma（P.1）突变株：在巴西首次发现的突变株
通过FUJIFILM Wako开发的Primer设计技术，可以高灵敏检测难以被检测的基因点突变。本产品是快速简便检测E484K突变的试剂盒。
◆特点
● 判定容易
通过比较使用突变株与野生株Primer/Probe Set时的Ct值来判定
● 一步法RT-qPCR快速检测突变
约70 min即可完成
● 使用FUJIFILM Wako研发的Primer/Probe，高灵敏检测突变
● 所有突变株均可在相同的反应条件下检测
由于N501Y、E484K、L452R、E484Q的PCR反应条件均相同，可在同一个96孔板中进行检测。
◆检测原理
采用TaqMan®探针的一步法RT-qPCR。
利用FUJIFILM Wako开发的Primer，高灵敏度检测点突变。
▼使用前
病毒RNA量较多情况下，在突变株中使用常规株（非突变）检测用“484E Wild type Primer & Probe Mixture”，也可以观察到扩增信号。请务必使用常规株（非突变）检测用的“484E Wild type Primer & Probe Mixture”和突变株检测用的“E484K Mutant Type Primer & Probe Mixture”两种试剂进行检测。
比较两个Ct值，若突变株检测用“E484K Mutant Type Primer & Probe Mixture”的Ct值小，则可判断病毒为E484K突变株。
◆突变株的检测应用数据
本试剂盒已经检出以下3种新冠病毒（SARS-CoV-2）株。
● Gamma株（P.1）突变株（TY7-501、E484K突变、N501Y突变，由日本国立感染症研究所提供）
● Beta株（B.1.351）突变株（TY8-612、E484K突变、N501Y突变，由日本国立感染症研究所提供）
● Alpha株（B.1.1.7）突变株（QHN001、E484K无突变、N501Y突变，由日本国立感染症研究所提供）
● VR-1986HK（E484K无突变、N501Y无突变、ATCC)
样品拷贝份数：5000、500、50 copies/Well
循环数：45
① gamma（P.1）株：TY7-501（E484K突变、N501Y突变）
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5000 copies
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500 copies
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50 copies
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Gamma株
（含有E484K突变）
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对于含有E484K突变的gamma株（P.1）突变株，使用突变株检测用的“E484K Mutant type Primer & Probe”，可以确认到扩增信号。
常规株（非突变）检测用的“484E Wild type Primer & Probe”，在5000 copies的条件下可以观察到扩增信号，但可以在更低Ct值下检测到突变株，由此判断为E484K突变株。在500 copies和50 copies的条件下，未能检测到常规株（非突变）的扩增信号。
② Beta株（B.1.351）：TY8-612（E484K突变、N501Y突变）
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5000 copies
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500 copies
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50 copies
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Beta株
（含有E494K突变）
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对于含有E484K突变的beta株（B.1351）突变株，使用突变株检测用的“E484K Mutant type Primer/Probe”，可以确认到扩增信号。
常规株（非突变）检测用的“484E Wild type Primer/Probe”，在5000 copies的条件下可观察到轻微的扩增信号，但可以在更低的Ct值下检测到突变株，由此判断为E484K突变株。在500 copies和50 copies的条件下，未能检测到常规株（非突变）的扩增信号。
③ Alpha株（B.1.1.7）：QHN001（E484K无突变、N501Y突变）
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5000 copies
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500 copies
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50 copies
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alpha株
（含有E484K突变）
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对于不含E484K突变的alpha株（B.1.1.7）突变株，利用常规株（非突变）检测用的“484E Wild type Primer＆Probe”，可以确认到扩增信号。
突变株检测用的“E484K Mutant type Primer＆Probe”，在5000copies的条件下可观察到扩增信号，但可以在更低的Ct值下检测到常规株（非突变），由此判断为常规株的突变株。在500 copies和50 copies的条件下，未能检测到突变株的扩增信号。
④ VR-1986HK（E484K无突变、N501Y无突变)
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5000 copies
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500 copies
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50 copies
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无突变
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对于不含N501Y突变和E484K突变的VR-1986HK，利用常规株（非突变）检测用的“484E Wild type Primer＆Probe”，可以确认到扩增信号。
关于突变株检测用的“E484K Mutant type Primer＆Probe”，在5000 copies的条件下可观察到扩增信号，但可以在更低的Ct值下检测到常规株（非突变），由此判断为常规株的突变株。在500 copies和50 copies的条件下，未能检测到突变株的扩增信号。
◆PCR反应条件
◆常规株以及突变株的基因型
