hookelabs EK-2110说明书

Hooke由免疫学家Suzana Marusic医学博士于2007 年创立。该公司以Robert Hooke,FRS(1635-1703)命名,他是世界上位专业科学家和细胞发现者。

我们有两个业务部门 – 我们是临床前CRO,专门研究炎症和自身免疫性疾病的啮齿动物模型,我们的产品业务为研究人员提供抗原,组织和试剂。我们的CRO客户包括先进的制药公司,风险投资的生物技术公司,大学和小型创业公司。我们的产品客户更加多样化,包括大学,基金会和商业科学家。

hookelabs EK-2110说明书

Hooke Kits™用于C57BL / 6小鼠的EAE诱导

也用于(C57BL / 6×SJL)F1小鼠中的EAE诱导

 

在预先填充的注射器中提供的乳液,随时可用。

  • 在雌性C57BL / 6小鼠中持续诱导EAE

EAE将在90-100%的小鼠中发育。疾病发作在免疫后9至14天。平均高分将为3.0至3.5。每批产品都经过测试和单独调整,以确保一致的疾病诱导。

在第0天,注射MOG 35-55 / CFA或MOG 1-125 / CFA乳液和百日咳毒素。
在第1天,注射第二剂量的百日咳毒素。

  • 消除了繁琐的乳液制备

适当制备的乳液对于许多自身免疫疾病模型的可靠诱导至关重要。我们的乳液经过精心制作并预先注入注射器中,随时可用,以减少设置实验所需的时间。

  • 节省时间和老鼠测试单个试剂

批次间试剂的变化可引起诱导的自身免疫疾病严重程度的显着变化。预先表征的Hooke Kits™的一致效力消除了耗时的测试。

  • 减少您的鼠标设施暴露于病原体污染

预填充注射器在无菌条件下制备,并在灭菌塑料袋中输送,以便在引入鼠标设施之前易于消毒。

实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是常用于研究用于治疗多发性硬化(MS)的潜在药物的功效的模型。

由于其与MS的许多相似性,EAE用于研究自身免疫,CNS炎症,脱髓鞘,细胞运输和耐受诱导的发病机理。

EAE的特征在于瘫痪(在一些模型中麻痹是复发 – 缓解),CNS炎症和脱髓鞘。EAE由髓鞘特异性CD4 + T细胞介导,但CD8 +细胞和B细胞也可能在某些EAE模型中发挥作用。

推荐MOG 35-55抗原用于研究EAE的发生和发展以及测试潜在治疗的功效; MOG 1-125推荐用于检测特异性靶向B细胞的治疗剂[1,2,3]。

货号 Hooke Kit™ 应变 年龄 描述 尺寸 价格
(套)
价格(每个
附加套件)
EK-2110 MOG 35-55 / CFA Emulsion PTX C57BL / 6 9至13周 注射器中的乳液,PTX 10只老鼠 338美元 288美元
EK-2160 MOG 1-125 / CFA Emulsion PTX C57BL / 6 9至13周 注射器中的乳液,PTX 10只老鼠 1770美元 1415美元

这些套件可以定制,只需支付少量额外费用。

使用给定的Hooke Kit™,老年小鼠通常会发生更严重的疾病和更均匀的疾病发作。

 

协议

C57BL / 6小鼠主动免疫诱导EAE

注意:这些试剂盒也可用于在(C57BL / 6×SJL)F1小鼠中诱导EAE。

详细内容

每个试剂盒为10只小鼠提供足够的试剂。

EK-2110抗原是髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG 35-55)大鼠,小鼠,序列MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK。

EK-2160抗原是人重组髓鞘少突胶质细胞糖蛋白1-125(MOG 1-125),序列MGQFRVIGPRHPIRALVGDEVELPCRISPGKNATGMEVGWYRPPFSRVVHLYRNGKDQDGDQAPEYRGRTELLKDAIGEGKVTLRIRNVRFSDEGG 
FTCFFRDHSYQEEAAMELKVEDPFYWVSPGHHHHHH。

数量 描述
3 预填充0.7 mL抗原/ CFA乳剂
~1 mg MOG 35-55 / mL乳剂(EK-2110) 
~0.5 mg MOG 1-125 / mL乳剂(EK-2160) 
~2-5 mg杀死结核分枝杆菌H37Ra的注射器/ mL乳液 
(通过批次调整所有浓度以实现一致的EAE诱导)
1 在甘油缓冲液中含有5μg百日咳毒素(PTX)的小瓶
1 数据表:推荐的实验方案,典型结果

典型的结果

 

C57BL / 6小鼠中的EAE诱导

方案:C57BL / 6小鼠中通过主动免疫的EAE诱导

数据来自单个实验中的三个独立组。免疫使用Hooke Kit TM MOG 35-55 / CFA Emulsion PTX(EK-2110),具有11-13周龄雌性C57BL / 6小鼠(Taconic Biosciences)。

在给药前合并来自3个小瓶的百日咳毒素。

使用来自The Jackson Laboratory的C57BL / 6小鼠以及使用推荐方案的MOG 1-125 / CFA Emulsion PTX(EK-2160)获得了类似的结果。

只/组 免疫接种年龄 平均高
分±SD
发病日
±SD
疾病
发病率
1 11 11-13周 3.46±0.14 11.3±1.4 100%
2 11 11-13周 3.36±0.32 11.7±1.8 100%
3 11 11-13周 3.18±0.56 11.3±1.7 100%

储存和稳定性

在2-4°C下储存稳定20天。
不要冻结。

参考

[1] Lyons JA等,Eur J Imm 29:3432(1999)
[2] Svensson L等,Eur J Imm 32:1939(2002)
[3] Lyons JA等,Eur J Imm 32:190(2002) )

E&K SCIENTIFIC EK-680187说明书

 

E&K SCIENTIFIC EK-680187说明书

24毫米Transwell聚酯膜插入物

  • 膜孔径0.4 µm
  • 10 µm厚的透明聚酯膜
  • TC处理过的表面可实现宜的细胞附着

24毫米Transwell聚酯膜插入物方便,易于使用的可渗透性支撑装置,可以使依赖于贴壁的和不依赖贴壁的细胞系感到羞耻。插入物通过伽马射线灭菌,在相衬显微镜下具有出色的可见性。生长表面积为4.5cm 2。其获得专有技术的自定心悬挂设计可防止插入件和外部孔之间出现中等芯吸。设计允许通过插入壁上的窗户进入下部隔室。将6个插入物包装在6孔板中,每箱4个板。

thomassci 8600A46

厂家货号:3450

也称为:EK-680187

描述

 

24毫米Transwell聚酯膜插入物

 

标价/数量

$ 148.06 / CS(24 / CS)

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit
SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit

SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

试剂盒组成

20 Reactions

RT酶混合物(20×)

20 µL x 1支

一步反应混合物(2×)

200 μL x 1支

484E Wild Type Primer & Probe   Mixture(probe:FAM)
484E野生型引物&探针混合物(探针:FAM)

10 µL x 1支

E484K Mutant Type Primer & Probe   Mixture(probe:FAM)
E484K突变型引物&探针混合物(探针:FAM)

10 µL x 1支

200 Reactions

RT酶混合物(20×)

200 µL x 1支

一步反应混合物(2×)

1 mL x 2支

484E Wild Type Primer & Probe   Mixture(probe:FAM)
484E野生型引物&探针混合物(探针:FAM)

100 µL x 1支

E484K Mutant Type Primer & Probe   Mixture(probe:FAM)
E484K突变型引物&探针混合物(探针:FAM)

100 µL x 1支

背景

新冠病毒突变株在世界范围内不断扩散,感染人数也在不断增多。

有报告指出,新冠病毒Beta(B.1.351)突变株和Gamma(P.1)突变株含有的E484K突变或会逃避免疫,使疫苗的效果降低1-3)


※ Beta(B.1.351)突变株:在南非首次发现的突变株

※ Gamma(P.1)突变株:在巴西首次发现的突变株

 

通过FUJIFILM Wako开发的Primer设计技术,可以高灵敏检测难以被检测的基因点突变。本产品是快速简便检测E484K突变的试剂盒。

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

特点

判定容易

通过比较使用突变株与野生株Primer/Probe Set时的Ct值来判定

一步法RT-qPCR快速检测突变

约70 min即可完成

使用FUJIFILM Wako研发的Primer/Probe,高灵敏检测突变

所有突变株均可在相同的反应条件下检测

由于N501Y、E484K、L452R、E484Q的PCR反应条件均相同,可在同一个96孔板中进行检测。

 

 

检测原理

采用TaqMan®探针的一步法RT-qPCR。

利用FUJIFILM Wako开发的Primer,高灵敏度检测点突变。

▼使用前

病毒RNA量较多情况下,在突变株中使用常规株(非突变)检测用“484E Wild type Primer & Probe Mixture”,也可以观察到扩增信号。务必使用常规株(非突变)检测用的“484E Wild type Primer & Probe Mixture”和突变株检测用的“E484K Mutant Type Primer & Probe Mixture”两种试剂进行检测。

比较两个Ct值,若突变株检测用“E484K Mutant Type Primer & Probe Mixture”的Ct值小,则可判断病毒为E484K突变株。

突变株的检测应用数据

本试剂盒已经检出以下3种新冠病毒(SARS-CoV-2)株。

● Gamma株(P.1)突变株(TY7-501、E484K突变N501Y突变,由日本国立感染症研究所提供)

● Beta株(B.1.351)突变株(TY8-612、E484K突变、N501Y突变,由日本国立感染症研究所提供)

● Alpha株(B.1.1.7)突变株(QHN001、E484K无突变N501Y突变,由日本国立感染症研究所提供)

● VR-1986HK(E484K无突变N501Y突变ATCC)

样品拷贝份数:5000、500、50 copies/Well

循环数:45

 


 gamma(P.1)株:TY7-501(E484K突变、N501Y突变)

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

5000 copies

500 copies

50 copies

Gamma株

(含有E484K突变)

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SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

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对于含有E484K突变的gamma株(P.1)突变株,使用突变株检测用的“E484K Mutant type Primer & Probe”,可以确认到扩增信号

常规株(非突变)检测用的“484E Wild type Primer & Probe”,在5000 copies的条件下可以观察到扩增信号,但可以在更低Ct值下检测到突变株,由此判断为E484K突变株。在500 copies和50 copies的条件下,未能检测到常规(非突变)的扩增信号。



 Beta株(B.1.351):TY8-612(E484K突变、N501Y突变)

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5000 copies

500 copies

50 copies

Beta株

(含有E494K突变)

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对于含有E484K突变的beta株(B.1351)突变株,使用突变株检测用的“E484K Mutant type Primer/Probe”,可以确认到扩增信号

常规株(非突变)检测用的“484E Wild type Primer/Probe”,在5000 copies的条件下可观察到轻微的扩增信号,但可以在更低的Ct值下检测到突变株,由此判断为E484K突变株。在500 copies和50 copies的条件下,未能检测到常规(非突变)的扩增信号。



 Alpha株(B.1.1.7):QHN001(E484K无突变N501Y突变)

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5000 copies

500 copies

50 copies

alpha株

(含有E484K突变)

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对于不含E484K突变的alpha株(B.1.1.7)突变株,利用常规(非突变)检测用的“484E Wild type Primer&Probe”,可以确认到扩增信号

突变株检测用的“E484K Mutant type Primer&Probe”,在5000copies的条件下可观察到扩增信号,但可以在更低的Ct值下检测到常规(非突变),由此判断为常规株的突变株。在500 copies和50 copies的条件下,未能检测到突变株的扩增信号。

 


④ VR-1986HKE484K无突变N501Y无突变)

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5000 copies

500 copies

50 copies

无突变

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对于不含N501Y突变和E484K突变的VR-1986HK,利用常规(非突变)检测用的“484E Wild type Primer&Probe”,可以确认到扩增信号

关于突变株检测用的“E484K Mutant type Primer&Probe”,在5000 copies的条件下可观察到扩增信号,但可以在更低的Ct值下检测到常规(非突变),由此判断为常规株的突变株。在500 copies和50 copies的条件下,未能检测到突变株的扩增信号。

PCR反应条件

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

◆常规株以及突变株的基因型

SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit                              SARS-CoV-2 E484K 突变检测试剂盒

FAQ

Q:能否判定新冠病毒阳性/阴性?

A:本试剂盒检测阳性样品中是否存在基因突变,无法判定阳性/阴性。

Q:能否检测用直接PCR法简单提取的RNA样品?

A本试剂盒无法检测简单提取的RNA。请使用RNA提取/纯化试剂盒等生成的RNA。

      离心柱:ISOSPIN Viral RNA(产品编号: 310-08931, 日本基因)

      自动核酸提取仪:QuickGene-Auto 12S/24S(倉敷紡績,还需要QuickGene AutoS RNA Virus Kit)

Q:试剂盒包装“200 Reactions”是什么意思?

A:【200 Reactions】是指实时PCR可以分开200孔进行。1个样品需要2个孔,即100个样品。

 ①    含有常规株的Primer&Probe的孔

 ②    含有突变株的Primer&Probe的孔

Q:试剂盒中是否包含病毒的阳性对照RNA?

A:本试剂盒不含阳性对照。若有需要,请向FUJIFILM Wako客服咨询。

Q:当野生株和突变株的扩增曲线均起峰时,应如何判断?

A如果病毒量高,无论是突变株样品,还是野生株,都有可能在其Primer&Probe中观察到扩增信号。然而,在此情况下,突变株的扩增信号上升

      得更快(Ct值小)。请务必通过突变株和常规株用的两种Primer&Probe进行检测,以确定 Ct 值的差异。

Q:是否存在E484K单独突变?

A不含N501Y突变、但含E484K突变的E484K单独突变株,已被确认为R.1株。但目前的信息较少,日本国立传染病研究所认为它是需要关注的突

      株(VOI),而不是高关注突变株(VOC)。

参考文献

1.

Nelson, G., Buzko, O., Spilman, P., Niazi, K., Rabizadeh, S., Soon-Shiong, P. : bioRxiv (2021). doi:https://doi.org/10.1101/2021.01.13.426558

2.

 Jangra, S., Ye, C., Rathnasinghe, R., Stadlbauer, D., PVI study group, Krammer,F., Simon, V., Martinez-Sobrido, L., García-Sastre, A., Schotsaert, M. : medRxiv (2021). doi:https://doi.org/10.1101/2021.01.26.21250543

3.

Wang, Z. et al. : Nature (2021). doi:10.1038/s41586-021-03324-6

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
287-35603 SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit 
SARS-CoV-2 E484K突变检测试剂盒
20 Reactions
281-35601 SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit 
SARS-CoV-2 E484K突变检测试剂盒
200 Reactions