Biosensis BEK-2216说明书
帕金森病生物标志物
Parkinson’s Disease Biomarkers5
尊敬的研究员，
*，α-突触核蛋白单体及其低聚物、聚集和磷酸化形式的水平在帕金森病中会发生变化。Parnetti et al. (2019) 发表在《柳叶刀神经病学》上的一篇综述讨论了 α-突触核蛋白亚型的生物标志物潜力及其临床实用性。
Biosensis 正在通过发布其针对这一重要靶标的 NEW RapidTM ELISA 试剂盒 (BEK-2216) 来解决可靠和准确定量 α-突触核蛋白的需求。它代表了 Biosensis 收集的 α-突触核蛋白 ELISA 试剂盒中的一个测定方法，更多的试剂盒正在开发中！
我们新的α-synuclein RapidTM ELISA试剂盒的特点是：
·人血和脑脊液准确定量的真实验证数据
·较低的批内和批间CVs<10%
·完整的工具和精确的说明
·快速（<4小时）和可靠的分析性能
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒说明书
产品详情
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货号 |
规格 |
价格 |
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78EA10011-100T |
100T |
询价 |
产品描述
浆核蛋白的分离提取属于生物学研究的重要实验之一，对于探究细胞中的不同组分以及蛋白在细胞中的定位具有重要的意义，促进亚细胞蛋白组学发展，提取的核蛋白可以用于后续转录调控方面研究，例如Pull Down，EMSA，footprinting等，为分子机制深入探索提供可靠技术支持。
基本原理如下：细胞在低渗条件下胞膜会发生胀破，释放浆蛋白，离心得到细胞核沉淀，最后利用高盐溶液抽提得到核蛋白，本试剂盒利用该原理，优化配方组分和提取方法提供了一种高效提取浆核蛋白的方法，较大保持蛋白的天然活性，同时浆蛋白与核蛋白之间存在极少的交叉污染，为后续研究提供可靠的样本。本试剂盒只适用于细胞样品的核浆蛋白提取，每T约适用于约一个大皿细胞量的提取。
产品组成
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名称 |
规格 |
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细胞浆蛋白抽提试剂A |
50 mL |
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细胞核蛋白抽提试剂B |
5 mL |
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试剂C |
0.5 mL |
运输与保存
–20℃保存，一年有效
实验步骤
1.试剂准备：
室温溶解试剂盒中三种组分，溶解后混匀冰上放置备用
（1）自备100 mM PMSF母液；
（2）浆蛋白抽提工作液：用细胞浆蛋白抽提试剂A将试剂C稀释至1X用，临用前加入PMSF母液使其终浓度为1mM（现配现用）；
（3）核蛋白抽提工作液：用细胞浆蛋白抽提试剂B将试剂C稀释至1X用，临用前加入PMSF母液使其终浓度为1mM（现配现用）。
2. 收集细胞沉淀
①对于贴壁细胞：弃去原来培养基，PBS清洗一遍，用细胞刮或消化收集细胞沉淀，尽可能吸净上清，留下沉淀备用（推荐使EDTA溶液代替胰酶消化，以免胰酶残留降解目的蛋白；每个样品可用小离心机或原来离心机进行二次离心，充分弃去残留上清以保证后续提取效果不受影响）；②对于悬浮细胞：离心收集细胞，PBS清洗一遍，尽可能吸净上清，留下沉淀备用。
3. 浆蛋白的提取
（1）约50 μL体积的细胞沉淀中加入200 μL细胞浆蛋白抽提工作液，反复吹打混匀十多次至沉淀散离，冰浴10 min后再次吹打混匀十多次，继续冰浴裂解5 min。
（2）高速剧烈涡旋5s，4℃ 600g离心5 min，此时得到的沉淀为细胞核沉淀，上清为粗提的浆蛋白，将此上清再次4℃ 12000g离心10 min去除杂质即得到纯净的细胞浆蛋白。
4.核蛋白的提取
（1） 对于步骤3-(2)中获得的细胞核沉淀加入400 μL细胞浆蛋白抽提试剂A（此时使用的试剂A不含试剂C），吹打混匀十多次至沉淀分散，4℃，冰浴5 min 600 g离心5 min，弃去上清保留沉淀，得到的沉淀重复该操作一次，最后尽最大努力弃去上清保留沉淀。
（2）对于步骤4-(1)中获得的沉淀加入100 μL细胞核蛋白抽提工作液，冰浴裂解30min，期间多次涡旋振荡10-15s以充分裂解（核蛋白裂解后，如果条件允许建议使用超声以大功率的提取核蛋白，增加蛋白质的溶解度，提高实验结果一致性，超声3次，每次5秒，功率90w）。
（3）4℃ 12000g离心10 min收集上清为细胞核蛋白。抽提得到的浆核蛋白可立即使用，也可-80℃保存备用。
实验案例分析
细胞刮收集A549，H1299，Hela三种细胞沉淀样品，每种细胞约一个大皿的细胞量，按照试剂盒使用说明进行核浆蛋白的分离提取，得到的浆蛋白和核蛋白用于western blot分析，考察其核浆分离效果，结果如下图所示：
图3.三种细胞样品的浆核蛋白western blot分析结果
注意事项
（1）需自备PMSF。PMSF母液用无水乙醇配制，临用前2-3 min内加入，以免在水溶液中很快失效；
（2）所有的抽提步骤都需要在冰上或者4℃进行；
（3）本试剂盒只适用于细胞样品浆核蛋白的提取分离，提取到的蛋白样品可直接用BCA法进行蛋白浓度测定；
（4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套；
（5）本产品仅作科研用途！
rPeptide是一家生物技术公司，在美国佐治亚州雅典市及其周边设有办事处，是为阿尔茨海默病和帕金森病研究提供研究产品（重组肽和蛋白质，抗体，试剂）的市场先进者。rPeptide还提供一系列定制服务，从分子生物学，蛋白质表达和纯化，到13C和15N均匀标记肽和蛋白质。
rPeptide拥有专有的平台载体技术，能够在大肠杆菌中表达历*难以处理的肽/蛋白质作为可溶性肽/蛋白质（如β-淀粉样蛋白，瘦蛋白，前胰岛素）。
rPeptide的产品系列提供了许多超纯肽，大部分产品都是“净肽含量”，而不是“总含量”。
rPeptide α-突触核蛋白说明书
Alpha-Synuclein
产品名称
α-突触核蛋白
尺寸
0.5毫克1.0毫克
目录 ＃
S-1001-1
存储
-20℃下
序列
MDVFMKGLSK AKEGVVAAAE KTKQGVAEAA GKTKEGVLYV GSKTKEGVVH GVATVAEKTK EQVTNVGGAV VTGVTAVAQK TVEGAGSIAA ATGFVKKDQL GKNEEGAPQE GILEDMPVDP DNEAYEMPSE EGYQDYEPEA
资源
重组。编码人α-突触核蛋白（1-140）序列的DNA序列在大肠杆菌中表达。
描述
α-突触核蛋白（α-突触核蛋白）是14kD（140个氨基酸）的酸性突触前蛋白。它是帕金森病聚集体的主要成分，并且涉及帕金森病和相关神经退行性疾病的发病机理。α-突触核蛋白在散发性帕金森病患者的大脑中积聚，作为路易体的主要成分，其是帕金森病*的神经元内细胞质内含物。α-突触核蛋白似乎与聚集的其他蛋白质相关，并且在阿尔茨海默氏病中的B-淀粉样斑块和神经炎缠结中发现3。
分子质量
14,460 Da
纯度
通过SDS-PAGE和质谱测定> 95％。
费用（美元）
$ 300
参考：
1）Conway，KA等。al。，（2000）Biochemistry，39：2552
2）Jakes，R。等。（1994），FEBS Letters，345：27
3）Masliah，E。等。al。，（2001）Proc。国家科。科学院。Sci。，USA，98：12245
4）Ueda，K。，et。人。（1993）Proc。国家科。科学院。Sci。，USA，90：11282
抗磷酸化α-突触核蛋白抗体
路易小体标志物
路易小体标志物
抗磷酸化α-突触核蛋白抗体
◆抗磷酸化α-突触核蛋白，单克隆抗体（pSyn＃64）
在帕金森、路易体痴呆症（DLB）等神经细胞中特异性表达的路易小体，含有在丝氨酸129残基处特异性磷酸化的α-突触核蛋白1）2）。
本产品不与正常的α-突触核蛋白反应，只识别累积的磷酸化α-突触核蛋白，因此可用于路易小体相关的病理研究。
◆产品特性
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组成 |
含血清培养基上清，0.05 % Sodium Azide |
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克隆号 |
pSyn#64 |
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亚型 |
小鼠IgG |
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抗原 |
丝氨酸129磷酸化的人α-突触核蛋白124-134序列 |
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储存条件 |
-20℃ |
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实用稀释倍率 |
免疫组织染色（1:1,000～10,000） |
使用示例（免疫组织染色）
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左图为使用本产品对路易体痴呆症的大脑切片进行免疫组织染色的图像。 发生病变的路易小体被特异性染色。 数据提供：东京大学研究生院医学系研究科 岩坪老师 |
◆生物素标记抗磷酸化 α-突触核蛋白抗体（pSyn#64）
本产品为上述抗磷酸化α-突触核蛋白，单克隆抗体（pSyn＃64）（产品编号：015-25191）进行生物素标记后的抗体。
特点
● 已进行标记，无需使用二抗
● 低背景
● 已完成免疫染色的使用评估
产品特性
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标记物 |
生物素 |
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抗原 |
合成肽（S129磷酸化的人α-突触核蛋白124-134序列） |
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缓冲液 |
PBS，0.05 %叠氮化钠 |
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亚型 |
小鼠IgG |
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适应性 |
免疫组织染色（1:200～5,000） |
使用示例（免疫组织染色）
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■ 实验条件 ▪ 样品：将凝集的α-突触核蛋白脑内注射到 ▪ 样品：6个月大的野生型小鼠纹状体 ▪ 切片：50 µm厚 振动切片 ▪ 染色方法：ABC法+DAB染色 ▪ 抗体浓度：1/1,000 |
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抗磷酸化α-突触核蛋白，单克隆抗体（pSyn＃64）， 生物素结合 |
抗磷酸化α-突触核蛋白，单克隆抗体（pSyn＃64） （产品编号：015-25191）+生物素标记二抗 |
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结果显示，与使用二抗时相比，背景被抑制且能观察到清晰的染色。 |
数据提供：东京大学研究生院医学系研究科 桑原老师、岩坪老师
参考文献
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1） |
Fujiwara, H., Hasegawa, M., Dohmae, N., Kawashima, A.,Masliah, E., Goldberg, S. M., Shen, J., Takio, K. and Iwatsubo,T. : Nature Cell Biology, 4, 160, (2002). |
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2） |
Saito, Y., Kawashima, A., Ruberu, N. N., Fujiwara, H.,Koyama, S. , Sawabe, M. , Arai , T. , Nagura, H., Yamanouchi, H., Hasegawa, M., Iwatsubo, T. and Murayama,S. : Journal of Neuropathology and Experimental Neurology, 62, 644 (2003). |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 015-25191 | Anti Phosphorylated α-Synuclein, Monoclonal Antibody (pSyn#64) 抗磷酸化α-突触核蛋白，单克隆抗体（pSyn＃64） |
50 μL | 免疫化学用 | – |
| 010-26481 | Anti Phosphorylated α-Synuclein, Monoclonal Antibody(pSyn#64), Biotin-conjugated 抗磷酸化α-突触核蛋白单克隆抗体 （pSyn#64），生物素 |
100 μL | 免疫化学用 |
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α-突触核蛋白聚集检测试剂盒
(ALPHA)-Synuclein Aggregation Assay Kit
α-突触核蛋白聚集检测试剂盒
(ALPHA)-Synuclein Aggregation Assay Kit
α-突触核蛋白聚集检测试剂盒模拟在路易体痴呆、帕金森病、多系统萎缩中发现的细胞内α-突触核蛋白聚集。
本试剂盒可用于在细胞培养水平上，检测目标活性物质对细胞聚集的抑制和/或预防作用。
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◆背景
痴呆症是导致记忆和辨别能力退化的疾病，还没有根治的方法。经过多年的科学研究证实，许多神经变性病（包括痴呆症）的大脑退化部位会发生蛋白凝聚，表明这种聚集的出现与这些疾病的发生和发展密切相关。 正常蛋白形式因特定原因形成异常结构并在细胞中积累时，会发生蛋白聚集，每种疾病有不同的聚集蛋白。目前已知在帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩病人脑内，α-突触核蛋白结构形成异常结构。 α-突触核蛋白聚集检测试剂盒模拟细胞内“α-突触核蛋白”的聚集情况，可用于在体外筛选活性成分。 |
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◆试剂盒组成
| 组成 | 容量 | 规格 | 保存 |
| pCMV-SNCA（α – Synuclein 表达质粒，红盖） （浓度1.25 μg/μL） |
32 μL | 1 小瓶 | 4°C 不冻结 |
| pCMV-NC（阴性对照，绿盖） （浓度1.25 μg/μL） |
5 μL | 1 小瓶 | |
| pCMV-dGFP（dGFP 表达质粒，蓝盖） （浓度1.25 μg/μL） |
5 μL | 1 小瓶 | |
| 20 mM Tris-HCl Buffer（pH 7.4） | 10 mL | 1 瓶 | |
| F-αSyn（α – Synuclein 纤维，黄盖） （浓度1 μg/μL） |
32 μL | 1 小瓶 | |
| Multifectam（基因转染试剂） | 0.33 mg | 1 瓶 |
◆检测流程
◆实例
一 免疫印迹法 Western blotting（使用各种突触核蛋白抗体）
1、除去培养基。
2、每个孔添加 1 mL PBS，用移液器收集细胞。
3、离心（4,500 rpm [1，800 x g]，5 分钟，室温），收集沉淀。
4、添加 0.1 mL 裂解缓冲液（10 mM Tris-HCl，pH 7.5 含 0.8 M NaCl，1 mM乙二醇双（2-胺基乙基醚）-N，N，N，N-四乙酸（EGTA）,
1 mM DTT 和 1% N-月桂酰肌氨酸钠）, 超声波混合。
5、离心（50,000 rpm [100,000 x g]，20 分钟，室温）。
6、添加 40 µL 2 x SDS Buffer（0.125 M Tris-HCl pH6.8，200 mM 1,4二硫苏糖醇（DTT），4% 十二烷基硫酸钠（SDS），10%蔗糖，
0.01% BPB）至颗粒中，超声波混合，加热 (100 °C，5 分钟)，进行 10 µL/well 的免疫印迹。
突触核蛋白抗体详情请点击此处。
二 淀粉样蛋白/物质荧光染色试剂盒
使用淀粉样蛋白/物质荧光染色试剂盒（Cosmo Bio，产品编号：CSR-SYN02-COS），可对已发生聚集的α-突触核蛋白和核仁进行双重染色。
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阴性对照载体（pCMV-NC） |
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| 相位图 |
核染色 |
突触核蛋白聚集 |
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使用α-突触核蛋白（pCMV-SNCA+F-α Syn） |
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| 相位图 |
核染色 |
突触核蛋白聚集 |
仅用于研究。不得用于人类基因治疗或临床诊断。
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| α-突触核蛋白聚集检测试剂盒 |
参考文献
Nonaka T. et al. J Biol Chem. 2010 Nov 5;285(45):34885-98.
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| CSR-SYN01-COS | (ALPHA)-Synuclein Aggregation Assay Kit, 300 tests | 1 kit | – | |
| CSR-SYN02-COS | Amyloid Fluorescent Staining Kit, 100 tests | 1 kit | – | |
| CSR-SYN03-COS | (ALPHA)-Synuclein Fibrils | 0.1 mg | – | |
| CSR-SYN04-COS-C100 | (ALPHA)-Synuclein | 0.1 mg | – | |
| CSR-SYN04-COS-M001 | (ALPHA)-Synuclein | 1 mg | – | |
| CSR-SYN02-COS | Amyloid Fluorescent Staining Kit, 100 tests 淀粉样蛋白荧光染色试剂盒 |
1 kit |
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