genebridges K002说明书

计数器选择BAC修改套件

对于使用反选择盒的BAC修饰，也用于细菌染色体

• ID：K002

Counter Selection BAC Modification Kit

计数器选择BAC修改套件

特征

• 快速BAC修改（2-3周）

• 高红/ ET重组效率

• 方便地去除Red / ET质粒

• 效率远高于pSacB-neo系统

应用

• 片段交换

• 标记插入和删除，不留选择标记或任何不需要的序列

• 引入短序列，例如点突变，loxP位点，限制性位点等。

• 也可用于细菌染色体修饰和常见的ColE1起源质粒

描述

这是基于链霉素选择的反选择盒pRpsL-neo的新版本。该试剂盒设计用于通过使用反选择盒在2-3周内修饰任何类型的细菌人工染色体（BAC）。包括的反选择盒pRpsL-neo基于链霉素选择，其显示出比pSacB-neo或类似系统高得多的效率。该试剂盒还可用于细菌染色体和常见的ColE1起源质粒。该试剂盒结合了高Red / ET效率以及重组后方便去除Red / ET重组蛋白表达质粒pRedET。

内容

• 红/ ET重组蛋白表达质粒pRed / ET。通过用该质粒转化，可以使任何大肠杆菌菌株Red / ET熟练

• BAC宿主大肠杆菌菌株DH10B已携带Red / ET质粒

• pRpsL-新霉素模板用于您自己的实验

• 在150kb BAC中引入点突变的阳性对照

• 详细的方案，质粒描述，图谱和序列

Sequences

rpsL-kan^R/neo^R selection cassette

promoter  rpsL  kan^R/neo^R 

GGCCTGGTGATGATGGCGGGATCGTTGTATATTTCTTGACACCTTTTCGGCATCG CCCTAAAATTCGGCGTCCTCATATTGTGTGAGGACGTTTTATTACGTGTTTACGA AGCAAAAGCTAAAACCAGGAGCTATTTAATGGCAACAGTTAACCAGCTGGTACGC AAACCACGTGCTCGCAAAGTTGCGAAAAGCAACGTGCCTGCGCTGGAAGCATGCC CGCAAAAACGTGGCGTATGTACTCGTGTATATACTACCACTCCTAAAAAACCGAA CTCCGCGCTGCGTAAAGTATGCCGTGTTCGTCTGACTAACGGTTTCGAAGTGACT TCCTACATCGGTGGTGAAGGTCACAACCTGCAGGAGCACTCCGTGATCCTGATCC GTGGCGGTCGTGTTAAAGACCTCCCGGGTGTTCGTTACCACACCGTACGTGGTGC GCTTGACTGCTCCGGCGTTAAAGACCGTAAGCAGGCTCGTTCCAAGTATGGCGTG AAGCGTCCTAAGGCTTAAGGAGGACAATCATGATTGAACAAGATGGATTGCACGC AGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGCTATTCGGCTATGACTGGGCACAACAG ACAATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTTCCGGCTGTCAGCGCAGGGGCGCCCGG TTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGTGCCCTGAATGAACTGCAGGACGAGGC AGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGGGCGTTCCTTGCGCAGCTGTGCTCGAC GTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCTGCTATTGGGCGAAGTGCCGGGGCAGG ATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCCGAGAAAGTATCCATCATGGCTGATGC AATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGGCTACCTGCCCATTCGACCACCAAGCG AAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCGGATGGAAGCCGGTCTTGTCGATCAGG ATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTCGCGCCAGCCGAACTGTTCGCCAGGCT CAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATCTCGTCGTGACCCATGGCGATGCCTGC TTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCGCTTTTCTGGATTCATCGACTGTGGCC GGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGACATAGCGTTGGCTACCCGTGATATTGC TGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACCGCTTCCTCGTGCTTTACGGTATCGCC GCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTATCGCCTTCTTGACGAGTTCTTCTGA

genebridges K003说明书 

BAC Subcloning Kit

BAC亚克隆试剂盒

用于从BAC和粘粒亚克隆DNA片段

• ID：K003

特征

• 不需要限制站点

• 高20 kb的碎片可以亚克隆

• 高红/ ET效率

• 重组后方便地去除Red / ET重组蛋白表达质粒pRedET。

应用

• Basepair将来自BAC的DNA片段亚克隆到高拷贝质粒骨架中

描述

可以包含大插入物的大肠杆菌载体，例如细菌人工染色体（BAC），为功能基因组学提供了若干优势。它们可携带足够的DNA以包含大多数真核基因，包括所有顺式作用调节元件，以及许多真核基因簇，原核调节子和许多完整的病毒基因组，在单个分子中。然而，常规克隆方法依赖于使用限制酶和体外纯化步骤，这阻碍了大分子的工程化。因此，这种分子的有用性直到近才受到限制。

BAC亚克隆试剂盒旨在通过Red / ET重组从任何类型的细菌人工染色体（BAC）有效地将高达20kb的大DNA片段亚克隆到质粒载体中。

红色/ ET重组（重组工程）是允许设计任何大小的DNA分子的方法，包括非常大的DNA分子，如BAC或大肠杆菌染色体。它依赖于在体内同源重组的大肠杆菌，并允许范围广泛的具有DNA分子修饰在任何选定的位置上。

内容

• 红/ ET重组蛋白表达质粒pRed / ET，任何大肠杆菌菌株均可通过该质粒转化而成为Red / ET精通

• 携带ColE1复制起点加上氨苄青霉素抗性基因的线性载体用于亚克隆实验

• 阳性对照将来自对照BAC的15kb片段亚克隆到用试剂盒递送的载体中

• 详细的方案，质粒描述，图谱和序列

Sequences

ColE1-amp minimal vector

amp^R ColE1 ORI

GCTCTCCTGAGTAGGACAAATCCGCCGGGAGCGGATTTGAACGTTGCGAAGCAAC GGCCCGGAGGGTGGCGGGCAGGACGCCCGCCATAAACTGCCAGGCATCAAATTAA GCAGAAGGCCATCCTGACGGATGGCCTTTTTGCGTTTCTACAAACTCTTTTGTTT ATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAA ATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCG CCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAAC GCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATC GAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTT TTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGT TGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTG GTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAG AATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCT GACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGAT CATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACG ACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATT AACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAG GCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTA TTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACT GGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAG GCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTA AGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTACG CGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGAC CGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTT CTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAG GGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGA TGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTG GAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTTGAACAACACTCAACC CTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTG GTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTA ACGTTTACAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACC AAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGA TCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAAC AAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACT CTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTC TAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATA CCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGT CTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCT GAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACT GAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAG GCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGC TTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTG ACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAAC GCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACA TGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGA GTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGC GAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTA TTTCACACCGCATAGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGAC GCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGT

genebridges代理

genebridges K001说明书

Quick & Easy BAC Modification Kit

快速简便的BAC修改套件

• ID: K001

特征

• 快速可靠地克隆大DNA分子

• 在选择的位置进行的DNA修饰

• 独立于限制网站

• 没有尺寸限制

应用

• 简单的BAC修饰，如插入选择标记，删除带有选择标记基因的片段，插入功能片段和选择标记基因

• 该试剂盒也可用于细菌染色体修饰

描述

该试剂盒旨在通过革命性的Red / ET重组技术对BAC进行修饰 – 这是一种强大的工具，可在2周内将修饰（如插入和缺失）引入任何类型的BAC。

红/ ET重组使用体内重组和校对活动来小化构建体中不需要的突变。套件中包含了修改BAC所需的所有必要内容以及执行控制实验所需的所有材料，旨在让您熟悉这种新技术。另外，转化任何大肠杆菌的载体提供了用于应用Red / ET重组的感受态菌株的菌株。pSC101-BAD-gbaAtet带有四环素抗性盒。该盒含有温度敏感的复制起点（ori），只能在30°C繁殖 – 在37°C时质粒会丢失。这允许在不再需要质粒时简单地去除质粒。为了引入突变（即选择盒，如该试剂盒中包含的新霉素抗性盒），首先必须将同源序列引入选择盒。这可以通过简单的PCR反应来完成。这些短的同源序列（每个50nt）可以根据您的实验需要自由选择。只需选择要修饰的位置，并使用Red / ET重组技术将选择盒直接插入所需的核苷酸。然后需要用诱导的Red / ET重组系统在细菌中电穿孔PCR产物。在成功进行Red / ET重组后，可以使用常规DNA微量制备方法回收修饰的DNA。

内容

• pSC101-BAD-gbaA（tet）是基于Red / ET表达质粒的pSC101 ori（温度敏感起源）的衍生物

• 携带pSC101-BAD-gbaA（tet）的BAC宿主

• 用于修饰150kb BAC的阳性对照实验（携带pSC101-BAD-gbaA的宿主中的BAC克隆，用于在BAC骨架中缺失的新PCR产物，在宿主中作为阳性重组体的BAC-neo克隆）

• 方案，质粒描述，寡核苷酸图谱和序列

Sequences

Tn5-kan^R/neo^R selection cassette

Tn5-promoter  kan^R/neo^R

TGGACAGCAAGCGAACCGGAATTGCCAGCTGGGGCGCCCTCTGGTAAGGTTGGGA AGCCCTGCAAAGTAAACTGGATGGCTTTCTTGCCGCCAAGGATCTGATGGCGCAG GGGATCAAGATCTGATCAAGAGACAGGATGAGGATCGTTTCGCATGATTGAACAA GATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGCTATTCGGCTATG ACTGGGCACAACAGACAATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTTCCGGCTGTCAGC GCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGTGCCCTGAATGAA CTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGGGCGTTCCTTGCG CAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCTGCTATTGGGCGA AGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCCGAGAAAGTATCC ATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGGCTACCTGCCCAT TCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCGGATGGAAGCCGG TCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTCGCGCCAGCCGAA CTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATCTCGTCGTGACCC ATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCGCTTTTCTGGATT CATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGACATAGCGTTGGCT ACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACCGCTTCCTCGTGC TTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTATCGCCTTCTTGA

CGAGTTCTTCTGACTCGAG