DNA & siRNA 转染试剂
ScreenFect™ A plus
- 产品特性
- 相关资料
- Q&A
- 参考文献
ScreenFect A+
DNA & siRNA 转染试剂！
◆原理
ScreenFect ™A+是通过点击化学（Click Chemistry）方法筛选出的阳离子脂质体转染试剂。适用于各种真核细胞，也可直接添加到含有抗生素或者血清的培养基中。使用 ScreenFect ™A+转染试剂可将 DNA 和 siRNA 转入常见实验室培养的细胞株（HeLa、HepG2、MDCK 等）、干细胞（小鼠ES细胞等），血液细胞（巨噬细胞、THP-1、RAW264 等），小胶质细胞和原代细胞。由于低细胞毒性，不含有任何有毒有害成分，转染后无需更换培养基。
※1 Biomaterials. 2012 Nov; 33(32):8160-6. 2012
◆优点、特色
● DNA 用量少。
● 高效一步转染法。
● 转染效率高＆细胞毒性低。
● 使用成本低
◆案例、应用
【ScreenFect ™ A+ 转染性能（流式细胞仪检测）】
用于不同细胞的高效脂质体转染试剂!!
用于不同细胞的高效脂质体转染法!!
适用于难转染的悬浮细胞!!
一步法和两步法实验流程的比较
|
产品名称 |
ScreenFect ™ A plus |
Ａ厂家新产品 （+试剂） |
Ａ厂家产品 |
|
推荐的实验流程 |
一步法 |
两步法 |
|
|
实验用时 |
２天 |
３天 |
|
|
所需DNA量 |
低 |
高 |
|
|
细胞数目调整 |
灵活 |
不灵活 |
|
|
胰酶消化 |
需要 |
需要 |
|
|
适于高通量筛选 |
+++++ |
+ |
|
|
培养基的更换 |
取决于细胞系 |
||
一步法比两步法节省24小时！
ScreenA+.pdf
高性价比的高性能基因导入试剂
ScreenFect ™ 通信
基因导入人 iPS 细胞实验数据
介绍使用 ScreenFect ™A plus 将基因导入人iPS细胞的实验结果和操作步骤。本文记载了作为 iPS 细胞支架使用的 Matrigel 孔板包被方法、配制含有 Y-27632 的细胞悬浮液的操作步骤以及最优的试剂比例，供您参考。
◆导入人iPS细胞（201B7株）的转染操作实例
在这里，我们将介绍一些使用 StemSure® hPSC 培养基Δ（产品编号：197-17571）的操作实例。该操作步骤的完整版和使用 mTeSR1 培养基的操作步骤，请查看 FUJIFILM Wako 公司的官网。http://db.screenfect.jp/ja/documents/list/protocol
<转染试剂的配制>
将 2.0 μL 的 ScreenFect ™ A plus reagent、4.0 μg 的质粒 DNA 加入到 160 μL 的 Opti-MEM 中制成 DNA-lipid complex。
< Matrigel 包被孔板>
1. ４°C下溶解 Matrigel hESC-Qualified Matrix 。为防止发生凝固，请避免在室温下溶解。
2. 用 25 mL 冷却的 D-MEM/Ham's F-12 稀释 300μL 的 Matrigel。
3. 稀释后的 Matrigel 溶液按照 1 mL/well 加入到 12 孔板中。
4. 在室温下孵育１小时以上。
<细胞悬液的配制>
1. 将 StemSure® hPSC 培养基Δ在 2-8℃ 下放置数小时或过夜缓慢融解。不要在 37° C下解冻，并在一周内使用。
2. 将 bFGF（产品编号：064-05381,068-05384）按照终浓度 35-100ng/mL 添加到融解后的 StemSure® hPSC 培养基△中，配制成完全培养基（以下称为 sshPSC 培养基）。
3. 使用前将 sshPSC 培养基恢复至室温。不要使用温水浴。
4. 将 Y-27632 按照终浓度 10 μmol/L 添加到 sshPSC 培养基中（以下称为 ROCKi+培养基）。
5. 去除 hiPS 细胞培养孔板中的培养基，用 PBS（-）清洗细胞一次。
*请在细胞汇片达到80％且处于对数增殖期时进行细胞转染。
6. 除去 PBS（-），添加 Stempro Accutase。
7. 在 37°C，5％CO2 培养箱中静置５分钟。
8. 用 1 mL 微量移液枪添加 ROCKi+培养基，将细胞从培养板上分离并吹散成单细胞。
9. 转移至 15 mL离心管中。
10. 室温下 1000 rpm（约170×g）离心３分钟。
11. 去除上清，用ROCKi+培养基重悬细胞。
12. 计算活细胞的数量。
13. 用 ROCKi+培养基将细胞浓度调整至 5×105 cells/mL。
<转染>
添加 1 mL 配制好的 DNA-lipid complex 到细胞悬液中，使用移液器充分混匀，并接种在 12 孔板中。
※要点
接种 24 小时后请更换培养基。此时的培养基不需要含有 Y-27632。
◆实验数据
通过反向转染（1-STEP）将 GFP 融合基因导入 hiPS 细胞（201B7株），并通过荧光显微镜比较基因的导入效率。
<StemSure® hPSC 培养基Δ的使用>
细胞数：5×105 cells/well
质粒 DNA 量：4 μg/assay
转染试剂混合比例：DNA 量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 0.5
容器：12 孔板
备注：用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。
<mTeSR1 培养基的使用>
细胞数：5 x 105 cells/well
质粒 DNA 量：1 μg/assay
转染试剂混合比例：DNA数量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 2
容器：12 孔板
备注：用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。
◆使用上的注意
● 建议在单细胞状态下进行人iPS细胞的基因导入。
● 建议基因导入时的细胞数约为 5×105 cells/well。
● 当质粒 DNA 量多时，导入基因的表达量高会引起细胞死亡。
◆产品列表
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
|
293-77101 |
ScreenFect ™ A plus |
基因研究用 |
0.2 mL |
|
299-77103 |
1 mL |
||
|
297-77104 |
1 mL×5 |
|
[1] |
Diefenbacher, Markus E., et al. "The LIM Domain Protein nTRIP6 Recruits the Mediator Complex to AP-1-Regulated Promoters." PLoS ONE 9.5 (2014): e97549. |
|
[2] |
Freise, Christian, and Uwe Querfeld. "Inhibition of vascular calcification by block of intermediate conductance calcium-activated potassium channels with TRAM-34." Pharmacological Research (2014). |
|
[3] |
Hagiwara, Akane, et al. "Luteinizing Hormone-Induced Expression of Ptger4b, a Prostaglandin E2 Receptor Indispensable for Ovulation of the Medaka Oryzias latipes, Is Regulated by a Genomic Mechanism Involving Nuclear Progestin Receptor." |
|
[4] |
Peng, Yanyan, Ruidan Xu, and Xiaofeng Zheng. "HSCARG Negatively Regulates the Cellular Antiviral RIG-I Like Receptor Signaling Pathway by Inhibiting TRAF3 Ubiquitination via Recruiting OTUB1." PLoS pathogens 10.4 (2014): e1004041. (3) |
|
[5] |
Wakimoto, Hiroaki, et al. "Targetable signaling pathway mutations are associated with malignant phenotype in IDH-mutant gliomas." Clinical Cancer Research (2014). (2) |
|
[6] |
Fischer, Simon, et al. "Breaking limitations of complex culture media: Functional non-viral miRNA delivery into pharmaceutical production cell lines." Journal of biotechnology 168.4 (2013): 589-600. |
|
[7] |
Bai, Dongmei, et al. "Regulation of the HDM2-p53 pathway by ribosomal protein L6 in response to ribosomal stress." Nucleic acids research 42.3 (2014): 1799-1811. |
|
[8] |
Liu, Xing, et al. "Isocitrate dehydrogenase 2 mutation is a frequent event in osteosarcoma detected by a multi‐specific monoclonal antibody MsMab‐1." Cancer medicine 2.6 (2013): 803-814. |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 293-77101 | ScreenFect™ A plus | 0.2 mL | – | – |
| 299-77103 | ScreenFect™ A plus | 1 mL | – | – |
| 297-77104 | ScreenFect™ A plus | 5 x 1 mL | – | – |
|
|
