货号：P7600L
品名：EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-)（MMLV逆转录酶RNase H-）
产品描述：
EnzScript™（M-MLV Reverse Transcriptase RNase H minus）是一种RNA依赖性DNA聚合酶，不具有可检测的RNase H活性。EnzScript™可用于从polyA mRNA或总RNA中产生*链cDNA，用于下游应用，如RT-PCR，cDNA克隆或RNA-Seq的文库构建。RNase H结构域中的点突变增加了酶的热稳定性，并支持比野生型M-MLV逆转录酶（1）更高的全长转录产物的cDNA产量。
|
规格： |
10,000 U |
|
浓度： |
200,000 U/mL |
|
纯度（SDS-PAGE） |
> 99％ |
|
活性： |
≥ 280,000 U/mg |
|
SS核酸外切酶 |
2000U <5.0％ |
|
DS核酸外切酶 |
2000U <1.0％ |
|
DS内切核酸酶 |
2000U = no conversion |
|
大肠杆菌 DNA污染 |
2000U <10 copies |
|
RNAse污染 |
2000U=没有可检测到的非特异性RNA酶 |
|
功能性RT-PCR分析 |
9.4kb cDNA转录物的合成 |
蛋白质来源
携带Moloney-Murine白血病病毒逆转录酶基因的重组大肠杆菌菌株，在RNase H结构域中具有3个点突变，消除了可检测的RNase H活性。
提供：
20 mM Tris-HCl,
100 mM NaCl,
0.1 mM EDTA ,
1 mM DTT,
0.01% NP-40 Alternative,
50% glycerol,
pH 7.5 @ 25°C.
随附：
5X M-MLV Reverse Transcriptase RNAse H- Reaction Buffer (B7601) and 100mM DTT (B9060)
单位定义
1单位定义为使用poly r（A）/ oligo（dT）作为底物，在37℃下10分钟内将1 nmol dTTP掺入酸不溶物质所需的酶量。
分子量
75,938Da
试剂盒组成：
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描述 |
货号 |
|
EnzScript™ |
P7600 |
|
5X M-MLV Reverse Transcriptase RNase H- Buffer |
B7601 |
|
100 mM DTT |
B9060 |
聚合酶属性
分子量：75.9kDa
*延伸温度：42℃
RNA酶H活性：未检测到
单位浓度：200U /μl
转录物长度：12.3 kB
常见应用
EnzScript™（M-MLV Reverse Transcriptase RNase H minus）是RNA-依赖性DNA聚合酶，通常用于合成用于RT-PCR扩增，cDNA克隆或RNASeq的First-Strand cDNA。与标准M-MLV RT相比，降低的RNA酶H活性使得全长cDNA转录物产量更高（> 5kb）并且热稳定性更高。
*链反应方案
建立*链反应，如使用不含核酸酶的水，RNase抑制剂，无RNA酶的试管和带过滤器的无菌移液吸头时，应采取防止RNA酶降解模板RNA的一般预防措施。以下程序可用作制备20μlFirst-Strand cDNA反应的指导原则。
材料：
•无菌，无核酸酶水
•引物（oligo dT （15-20） 或 随机六聚体 或 基因特异性）
•dNTP混合物（dATP，dCTP，dGTP，dTTP）
•RNA模板
•RNA酶抑制剂
过程 ：
1、将以下组分添加到冰上的不含RNase的微量离心管中。对于多个反应，准备一个mastermix。
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产品 |
量 |
|
50μM寡聚dT（15-20）或50μM随机六聚体或10μM基因特异性引物 |
1至2μl |
|
5mM dNTP混合物 |
2μl |
|
RNA模板*（ 1 ng至1μg总RNA 或 1至250 ng mRNA） |
Xμl |
|
无菌，无核酸的水 |
到12ul |
2. 将微量离心管加热至65℃5分钟，并在冰上快速冷却2分钟以将引物退火至RNA模板。短暂旋管以收集冷凝物。
3. 将以下组分（每个*链反应）添加到冰上的微量离心管中：
|
产品 |
量 |
|
5X M-MLV逆转录酶RNase H-缓冲液 |
4ul |
|
100mM DTT |
2μl |
|
核糖核酸酶抑制剂（可选）或无核酸酶水 |
1μl |
|
200 U EnzScript™ |
1μl |
4.按照以下步骤孵育每个20μl*链反应：
1）25℃2分钟（oligo dT（15-20），基因特异性引物）或25℃10分钟（随机六聚体）
2) 42℃30-60分钟
3）在70°C热杀15分钟
5.在下游应用中使用cDNA或在-20°C保存。对于RT-PCR，通常将1至2μl来自First-Strand反应的cDNA作为模板添加到PCR中。可选：在PCR之前去除RNA链，向cDNA：RNA杂交体中加入1μlRNA酶H（5U），在37℃孵育20分钟和65℃孵育10分钟（热杀灭）。RNase H治疗推荐用于扩增长扩增子（> 5 kB）。
部分产品信息：
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货号 |
品名 |
规格 |
浓度 |
品牌 |
|---|---|---|---|---|
|
N2070-10-L |
ATP Solution |
50 µmol |
10 mM |
Enzymatics |
|
N2050-10-L |
10 mM dNTP Solution Mix |
100 µmol |
10 mM |
Enzymatics |
|
N2010L |
100 mM 75µmol dNTP Solution Set |
75 µmol |
100 mM |
Enzymatics |
|
N2010-A-L |
100 mM dATP Solution |
75 µmol |
100 mM |
Enzymatics |
|
N2050L |
100µmol dNTP Solution Mix |
100 µmol |
25 mM |
Enzymatics |
|
Y9180L |
10x Uracil Cleavage System |
750 Reactions |
N/A |
Enzymatics |
|
P7670 |
2x HiFi PCR Master Mix |
1 rxn |
2x |
Enzymatics |
|
Y9420L |
5x ER/A-Tailing Enzyme Mix |
24 reactions |
N/A |
Enzymatics |
|
Y9380L |
E. coli Pyrophosphatase |
50 U |
100 U/mL |
Enzymatics |
|
Y9030L |
E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein |
1.5 mg |
2.75 mg/ml |
Enzymatics |
|
Y9140-HC-L |
End-Repair Mix (High Concentration) |
75 Reactions |
1 Rxn/µL |
Enzymatics |
|
Y9140-LC-L |
End-Repair Mix (Low Concentration) |
200 Reactions |
1 Rxn/µL |
Enzymatics |
|
Y9080L |
Endonuclease VIII |
10,000 U |
10,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7600L |
EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-) |
10,000 U |
200,000 U/mL |
Enzymatics |
|
X8010L |
Exonuclease I |
30,000 U |
20,000 U/ml |
Enzymatics |
|
X8020L |
Exonuclease III |
50,000 U |
100,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7010-HC-L |
Klenow (3′→ 5′ exo-) (High Concentration) |
10,000 U |
50,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7010-LC-L |
Klenow (3′→ 5′ exo-) (Low Concentration) |
10,000 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7060L |
Klenow Fragment |
2,500 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
X8030L |
Lambda Exonuclease |
10,000 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7040L |
M-MuLV Reverse Transcriptase |
100,000 U |
200,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7090L |
Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-) |
3,000 U |
30,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7140-HC-L |
Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration) |
100,000 U |
400,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7140-LC-L |
Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration) |
100,000 U |
40,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7610L |
NGS Library Prep: 2X VeraSeq™ PCR Mix – 250 Reactions |
250 Reactions |
2X |
Enzymatics |
|
P7590L |
Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase |
500 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7460L |
Poly(A) Polymerase |
1,000 U |
5,000 U/mL |
Enzymatics |
|
Y9260L |
RecA |
1.5 mg |
2.0 mg/mL |
Enzymatics |
|
Y9220L |
RNAse H |
5,000 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
Y9240L |
RNAse Inhibitor |
20,000 U |
40,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6010L |
T3 DNA Ligase |
900,000 U |
3,000,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6030-LC-L |
T4 DNA Ligase |
150,000 U |
120,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6030-HC-L |
T4 DNA Ligase (Rapid) |
240,000 U |
600,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7080L |
T4 DNA Polymerase |
2,000 U |
3,000 U/ml |
Enzymatics |
|
Y9130L |
T4 Gene 32 Protein |
1.0 mg |
10 mg/mL |
Enzymatics |
|
Y9040L |
T4 Polynucleotide Kinase |
10,000 U |
10,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6050L |
T4 RNA Ligase 1 |
10,000 U |
20,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6080L |
T4 RNA Ligase 2 |
4,500 U |
30,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6070L |
T4 RNA Ligase 2 Truncated |
500 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6020L |
T7 DNA Ligase |
900,000 U |
3,000,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7260L |
T7 DNA Polymerase |
3,500 U |
10,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7180L |
T7 RNA Polymerase |
50,000 U |
50,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6060L |
Taq DNA Ligase |
20,000 U |
40,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7110L |
Taq DSC 2.0 DNA Polymerase |
1,250 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7250L |
Taq-B DNA Polymerase |
10,000 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7620L |
TaqIT |
5,000 U |
50,000 U/mL |
Enzymatics |
|
P7070L |
Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT) |
6,000 U |
20,000 U/ml |
Enzymatics |
|
G5020L |
Thermolabile UDG |
500 U |
1,000 U/ml |
Enzymatics |
|
Y9370L |
Thermostable Pyrophosphatase |
1,250 U |
2,000 U/ml |
Enzymatics |
|
G5010L |
Uracil DNA Glycosylase |
10,000 U |
2,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7511L |
VeraSeq™ 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase |
500 U |
2,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7520L |
VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase |
500 U |
2,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6030-W-L |
WGS Ligase |
24 Reactions |
N/A |
Enzymatics |
|
P7640L |
ZipScript™ One-Step RT-qPCR Kit |
1000 Reactions |
N/A |
Enzymatics |
|
P7020-HC-L |
φ29 DNA Polymerase (High Concentration) |
2,000 U |
100,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7020-LC-L |
φ29 DNA Polymerase (Low Concentration) |
2,000 U |
10,000 U/ml |
Enzymatics |
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