线性聚乙烯亚胺PEI MW40000说明书

 

 

产品描述

Jinpan 线性聚乙烯亚胺PEI MW40000 转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）的产品，因其较高的转染效果，已广泛应用于AAV，LV和重组蛋白等工业化生产。

聚乙烯亚胺是一种具有较高阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔两个碳原子，即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体(proton sponge)，因此，非常容易结合带负电荷的核酸分子，形成带正电荷的复合物颗粒，该颗粒与细胞表面阴离子结合，很容易通过内吞作用进入细胞；并且可抵御溶酶体的降解作用，从而提高核酸分子的表达水平。

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基本信息

CAS 49553-93-7

分子式 (C2H5N)n . xHCl

分子量 40,000 (~22,000 free base)

熔点 73-75℃

溶解性 溶于冷水

不溶于 常用有机溶剂（乙醇、丙酮、四氢呋喃）

形式 白色固体粉末

生物毒性 未知

安全防护 手套，护目镜，口罩

存储 粉末至少可以保存一年， PEI内含自由氨基，建议开封后4℃干燥保存，减缓氧化过程。

运输 常温运输

特点 大量实验数据反馈，细胞通用性好，有非常好的转染效果，尤其对293，CHO细胞系有特别显著的转染效果。

配置方法

转染操作流程：(贴壁细胞转染方法)

1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（Jinpan Cat#78CL10002)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔加入的细胞量参考下图表1，一般18-24小时（sf9细胞为3-4小时）后转染。转染时细胞汇合度应至少达到 70~80%以上。转染前更换为含5%血清的生长培养基。

2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。用 Opti-MEM ITM或其他适合的无血清培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。 （稀释PEI和DNA的体积为培养体积的1/10-1/20, DNA浓度为1ug/ml）

3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。转染4-6小时（sf9细胞为2小时 )后，更换为生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快 7 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合的检测时间。

5. 转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍 以上），在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

转染操作流程：(悬浮细胞转染方法)

1. 转染前准备：悬浮细胞传代接种于适量含悬浮细胞生长培养基中，合适条件下培养。根据培养瓶大小调整细胞密度（例100mL培养瓶，1X10 ⁶ cells/mL），然后旋紧瓶口放入摇床继续培养，2~4小时后可以进行转染。

2. 准备 DNA-PEI 复合物：DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他适合的无血清培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞：将PEI-DNA转染复合物逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床合适培养条件下培养至可以分析检测。

4. 孵育细胞和分析结果：转染后一般24-72h即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合的检测时间。

5. 如果要获得更多的蛋白产量，有文献表明转染后24小时，可以适当稀释细胞，稀释比例参考范围（1:2—1:5）之间，可以增加蛋白产量，稀释效应与最佳稀释比率应根据经验确定。

 

 

产品背景

        Jinpan 生产的78Bio PEI是一种优化的线性阳离子聚合物转染试剂,分子量分别为 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 转染效率高，但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表达系统中，相比于市面上的脂质体 78BioPEI 都表现出高的蛋白表达量（无 论是 96 孔板还是 100L 的细胞反应器），以及更小的细胞毒性、更高的转染效和更高的可 重复性，并且十分经济的高性价比转染试剂。产品具有以下特点：

1.转染效率高，细胞毒性低；  蛋白表达量高；

2.节约成本：Jinpan 78 PEI转染试剂 ，进口品质，亲民价格，至少能够降 40% 的转染试剂总成本；

3.适用于 HEK293 等真核细胞的转染；

4.适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染；

5.适用于有血清和无血清的转染条件；

6. 无机试剂，无动物源成分；

7. 产品稳定，质控严格；

8. 工艺流程适用范围广，容易优化 适合小规模培养板，培养瓶到大规模的生物反应器。

产品反馈

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

  2. 本产品主要用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

  3.加热或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。当然酸可能不用加那么多，详细用量可试加一点 ,搅拌看看，足够溶解就行，不一定需要加到 pH 那么低。 

  4.一定要溶解充分，溶解不充分会影响后续的转染效率.

  5.冷冻后可能会影响其后续转染效果。

 

  特别提醒：初次使用 78PEI 进行不同基因转染时应先做预试，优化出适合自己实验的， 最佳 PEI 和 DNA 的比例，通常筛选范围在 1:1 到 5:1 之间，如果之前用过Polysciences品牌的 PEI，用 78BioPEI 时应适当降低使用浓度。