PUREfrex® 2.0 PUREfrex® 酶无细胞蛋白合成试剂盒

PUREfrex® 2.0
PUREfrex® 酶无细胞蛋白合成试剂盒

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PUREfrex® 2.0PUREfrex® 2.0                              PUREfrex® 酶无细胞蛋白合成试剂盒

PUREfrex® 酶无细胞蛋白合成试剂盒

自2022年12月起,PUREfrex® 试剂盒内的Solution I的原材料已更换,详情请点击:PUREfrex® 系列试剂盒部分组成及制备方法变更通知

自2023年8月起,250 µL×5反应用规格已停产,并推出新规格产品“2 mL 反应用”。停产产品将在库存售罄后停售。

PUREfrex® 2.0 改良了 PUREfrex® 1.0(#PF001-0.25)的反应液成分,保留 PUREfrex® 特点(RNase和LPS 等的污染少)的同时提高了合成效率。适用于需要大量蛋白的实验,如蛋白的功能评估等。

本产品的改良旨在提高蛋白的合成活性,因此,根据研究内容不同,PUREfrex® 1.0 的实验结果可能会更理想。PUREfrex® 1.0 和PUREfrex® 2.0 的对比详情点击此处查看。

PUREfrex® 2.0 不含分子伴侣,因此根据合成蛋白不同,可能无法形成正确的高阶结构,也可能不溶于水。这时,只需在蛋白合成过程中添加分子伴侣即可解决。本试剂盒也提供了DnaK mix(#PF003-0.5)GroE mix(#PF004-0.5)作为添加剂。

 

PUREfrex® 2.0 含有还原剂GSH,因此可在还原条件下进行蛋白合成反应。合成需要形成二硫键(SS键:SS-bond或二硫桥:disulfide bridge)的蛋白时,建议添加DsbC Set (#PF005-0.5)PDI Set (#PF006-0.5)

◆产品组成

关于PUREfrex® 2.0 中各Solution具体成分保密。

250 µL反应用

产品规格

产品成分

开封后的储存温度 *1

Solution Ⅰ

125 μL

氨基酸、NTP、tRNA、酶底物等

-20℃

Solution Ⅱ

12.5 μL

蛋白(30% 甘油溶液)

-20℃或-80℃*2

Solution Ⅲ

25 μL

核糖体(20 µM)

-80℃ *2

DHFR DNA *3

碱基序列  

10 μL

含大肠杆菌DHFR基因的

PCR 产物(20 ng/μL)

-20℃

2 mL 反应用

产品规格

产品成分

开封后的储存温度*1

Solution Ⅰ

1,000 μL

氨基酸、NTP、tRNA、酶底物等

-20℃

Solution Ⅱ

100 μL

蛋白(30% 甘油溶液)

-20℃或-80℃ *2

Solution Ⅲ

200 μL

核糖体(20 µM)

-80℃ *2

DHFR DNA *3

碱基序列  

10 μL

含大肠杆菌 DHFR 基因的

PCR产物(20 ng/μL)

-20℃

*1)试剂盒开封前,请在-80℃条件下储存。

*2)在-80°C条件下储存使用后的剩余反应溶液时,应在储存前使用液氮或干冰/乙醇等进行速冻。请根据需求进行分装,避免反复冻融。

*3)当用作蛋白合成的阳性对照时,请在20 µL合成反应溶液中添加1 µL DHFR DNA。

使用方法

使用PUREfrex®2.0 时,可在任意体积的反应液下进行蛋白合成。例如,20 μL时的制备方法如下所示。

1.  将Solution Ⅰ在室温~37℃下加热1 min左右至完全融解,随后置于冰上。

2.  将Solution Ⅱ和Solution Ⅲ置于冰上融解。

3.  将融解的SolutionⅠ,Ⅱ,Ⅲ轻轻涡旋后,离心并收集试管底部的内容物。

4.  请根据以下配比制备反应液。(DNA 添加量为每kbp 0.5-3 ng/ μL)

  RNase-Free Water

  7-X μL

  Solution Ⅰ

  10 μL

  Solution Ⅱ

  1 μL

  Solution Ⅲ

  2 μL

  模板DNA 注1

  X μL

  Total

  20 μL


5.在37°C的加热块或水浴中反应 2~6 h,合成蛋白注2

6.合成的蛋白可用于多种用途注3

注意事项

注1) 模板DNA请根据目标蛋白自行制备。关于制备方法,请参阅“关于模板DNA”。

注2) 如果在气相恒温槽(如培养用恒温器)中进行反应,反应液的温度上升需花费更多的时间,合成量会有所降低

注3) 通过SDS-PAGE确认合成时,请用水稀释反应液后进行电泳。详情请点击PUREfrex反应液的SDS-PAGE查看。

使用注意事项

PUREfrex® 为研究用试剂,不可用于包含人在内的动物给药、临床和诊断等其他用途。此外,请勿用于食品或家庭用途。

使用 PUREfrex® 时,请使用不含RNase的水、试剂和设备。 此外,建议佩戴手套和口罩。

点击此处查看相关产品详情:PUREfrex® 酶无细胞蛋白合成试剂盒

点击此处查看相关产品详情:PUREfrex®1.0

点击此处查看相关产品详情:PUREfrex® 2.1

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