血浆游离血红蛋白测定

实验原理

  血红蛋白具有类过氧化物酶活性,可催化H2O2释放新生态氧,使邻甲联苯胺氧化发生颜色变化,由无色zui终变为蓝紫色。根据显色深浅与标准进行比较,可测出其含量。

实验方法

  材料:

  1.2g/L邻甲联苯胺溶液

  2.1%H2O2

  3.10%醋酸溶液

  4.分光光度计

  方法:

  1.抽取静脉血2-3ml,枸橼酸钠抗凝,离心分离血浆。

  2.按下表进行操作,用分光光度计,波长为530nm,以空白管调零,测定测定管的吸光度。

试剂 (ml)

测定管

空白管

2 g/L邻甲联苯胺溶液

0.5

0.5

患者血浆

0.02

/

1% H2O2

0.5

0.5

混匀后室温放置10min

10%醋酸溶液

5.0

5.0

室温放置10min

  3.计算公式

  血浆游离Hb(mg/L)=测定管吸光度/标准管吸光度×100

实验结果计算

  参考范围:0-40mg/L

注意事项

  1.一切容器避免血红蛋白污染;

  2.采血要顺利,器皿要干燥,检测血浆要新鲜,及时分离,防止人为溶血;

  3.邻联苯胺溶液具致癌性,检测时要小心,废液要妥善处理,以免污染;

  4.双氧水要新鲜配置,浓度要准确。