cytoskeleton BK165-S说明书
新的Signal-Seeker™：PTM检测试剂盒，抗体和试剂
| 简单
全面的套件可大限度地缩短优化时间，同时大化PTM检测 质量 的灵敏度和度，可以自信地识别低丰度的PTM 积分 使用相同的系统研究多个PTM
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新的Signal-Seeker™SUMOylation 1检测试剂盒（10种检测）
量
10种检测方法（Cat。＃BK165-S）
Signal-Seeker™系列产品的开发旨在简化专家和非专业人士对关键调节蛋白修饰的分析。全面的Signal-Seeker™试剂盒提供亲和珠系统，可从任何给定的细胞或组织裂解液中分离和富集修饰的蛋白质。然后使用针对靶蛋白的抗体通过标准蛋白质印迹程序分析富集的蛋白质群体。
产品用途包括
- 调查瞬态监管机制
- 测量多种途径成员蛋白的信号传导事件
- 发现您感兴趣的蛋白质的新修改
- 深入了解监管机制
- 测量内源性或瞬时表达的蛋白质信号传导事件
套件内容
SUMOylation 1试剂盒包含以下组分：
| 裂解和蛋白质定量步骤 | IP和预清除步骤 | 洗步骤 | 洗脱步骤 | 西部一步 |
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BlastR™裂解缓冲液 BlastR™稀释缓冲液 BlastR™过滤器 蛋白酶抑制剂鸡尾酒 去SUMO化抑制剂鸡尾酒 Precision Red™蛋白质分析试剂 |
SUMOylation 1 Affinity Beads IP控制珠
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BlastR™洗涤缓冲液
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旋转列 珠子洗脱缓冲液
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化学发光试剂A. 化学发光试剂B. 抗SUMO1抗体
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示例结果
这些套件有很多应用，这里我们描述一个有趣的例子：
应用1：研究重要的SUMOylation 1事件
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与旧的SUMO1工具相比，使用Signal-Seeker™SUMOylation 1检测试剂盒免疫沉淀总SUMO1谱 （A）使用BlastR裂解和过滤系统获得HAP1野生型（WT）或SUMO1敲除（KO）裂解物。将1mg每种裂解物与40mg每种SUMO1亲和试剂一起温育：ASM11-珠（Cytoskeleton），21C7（Invitrogen纯化的），21C7（DSHB-上清液），D11-珠（Santa Cruz）和缀合的SUMO1 IgG对照珠。 （CIG03）。用蛋白G琼脂糖珠捕获21C7抗体以富集SUMO-1修饰的蛋白。通过SDS-PAGE分离样品并转移至PVDF。使用1：5000的ASM01（Cytoskeleton）抗体和5％牛奶中1：1000的小鼠Trubelot Ultra-HRP二抗，通过蛋白质印迹分析富集的SUMO1样品。Trueblot secondary用于小化21C7样品的重链和轻链检测。
（B）：使用ASM11进行IP，如图1A所示。SUMO1修饰的蛋白质用ASM01 1：5000显示，抗小鼠以1：20,000显示，以突出在64-30kDa范围内SUMO化蛋白质的分布，当使用未缀合的抗体时，可能被重链和轻链干扰掩盖。 IP。 |
与旧的SUMO1工具相比，使用Signal-Seeker™SUMOylation 1检测试剂盒免疫沉淀SUMO1修饰的靶蛋白
使用BlastR裂解和过滤系统获得HAP1野生型（WT）或SUMO1敲除（KO）裂解物。1毫克每裂解物与40孵育米 ASM11珠（细胞骨架），21C7（DSHB上清液），和共轭SUMO1 IgG对照珠（CIG03）：g各自SUMO1亲和试剂的。用蛋白G琼脂糖珠捕获21C7抗体以富集SUMO-1修饰的蛋白。通过SDS-PAGE分离样品并转移至PVDF。靶蛋白：通过蛋白质印迹分析（A）TFII-I，RanGAP1和（B）schmd1的SUMO1修饰形式。抗兔-HRP标记的第二抗体以1：10,000使用。所有三种一抗均为兔多克隆抗体，不应结合来自IP抗体的重链和轻链片段。
在这一研究领域可以尝试的其他实验包括：
•参与调节靶蛋白的SUMOylating和去SUMOylating酶的药理学研究。
•在各种不同的生长因子或药物治疗下研究SUMO化。
•检查SUMOylated靶蛋白与其下游效应子的相互作用。
•检查SUMOylation 1和其他PTM之间对目标蛋白的串扰。