UPTT™ 未激活的部分凝血活酶时间检测使用说明书

 

货号：105997

品名：UPTT™ 检测试剂

 

检测试剂基本信息

 

产品描述：

UPTT是标准化冻干兔脑脑磷脂（部分凝血活酶），磷脂浓度≤0.1％，可代替血小板提供凝血催化表面，是进行活化部分凝血酶时间测试的理想试剂。该试剂符合包括ASTM F2382-01,04,12，FDA蓝皮书备忘录E95-1和ISO 10993-4中规定的血液相容性评估要求。

 

 

用途：

生物相容性或对生命的影响是医疗或血管设施是否适合于体内使用的关键衡量指标，UPTT检测试剂用于体外测定未激活的部分凝血活酶时间，通过测量关键凝血酶活性来特异性评估医用设备和材料对血液或血液相容性的影响。

 

 

检测原理：

在缺乏钙离子的情况下，全血暴露在外源物质时发生接触激活^[1,2,3]。UPTT通过检测凝血时间来测量参与内源性血浆促凝血酶原生成的血浆因子^[4,5]。该检测应重复三次，将检测结果与非处理血浆和阴性对照进行比较。

 

 

产品优点：

UPTT试剂已经过手动和光学检测系统的测试，具有可靠的精度和灵敏度，可为基于接触活化的血液相容性和血栓形成试验提供可靠的结果^[1.3,6,7]。

 

 

试剂盒包含：

20 x 3.0mL的UPTT试剂，

含约~0.1%兔脑脑磷脂，缓冲液和稳定剂。

 

 

试剂储存：

冻干的UPTT试剂可在2-8°C储存直至有效期；在原装容器中重悬的UPTT试剂可于2-8°C密闭储存7天。

 

 

 

注意事项：

（1）本试剂不得用于人体或动物诊断测试。

（2）在整个试剂准备，样本收集，样本制备和分析过程中须严格遵守标准的预防措施。

（3）根据实验室管理制度处理锐器（如针头等）和生物废弃物。

 

 

额外所需材料（本试剂盒未提供）：

1.纯化水，pH 5.3 – 7.2（蒸馏水，去离子水或试剂级）

2.移液器（10ml, 3ml和0.1mL）。

3.氯化钙，0.025M（C / N 100989）

4.柠檬酸钠，0.11M（C / N 100994）

5.凝血参照血浆

 

检测准备

 

 

试剂配制：

在试剂配制前将UPTT小瓶置于室温。

1.轻轻敲击小瓶使附着在塞子上的试剂掉于瓶底；

2.取下铝质密封圈；

3.取出塞子，用3.0 mL纯净水溶解小瓶内容物。

4.盖上塞子并翻转小瓶以*混合内容物。在使用前至少要保持15分钟以确保内容物*溶解。

注意：试剂一旦配置完成，在2 – 8°C储存在密封的原始容器中可稳定7天。

 

 

测试血浆的采集：

UPTT检测的样本必须是由抗凝血全血制备的无血小板或贫血小板血浆。^[8-10]

样本采集

采血时应小心谨慎，当血液在收集管中可见时立即释放止血带，避免停滞，溶血，组织液污染或暴露于玻璃表面。

（建议使用）^[10]

1.采用实验室的蝶翼式采血管套，
2.将血液抽入含有0.11M柠檬酸钠抗凝血剂的真空塑料标本收集管，

3. 轻轻颠倒试管4-5次以混匀样本。

注意：确认使用的抗凝剂类型和浓度，彩色标本管头不能*显示柠檬酸盐的浓度。

 

注射器采血（可选）^[11]

1.采用实验室的蝶翼式采血管套，

2.抽取9.0mL血液进入塑料注射器中，避免吸力过大。

3.取下针头，立即轻轻地将血液加入到含有1.0mL 0.11M柠檬酸钠（血液：抗凝血剂为9：1）的聚丙烯管中，

4..盖上试管并轻轻颠倒4-5次混合，

5.在测试前在室温下样品zui多保持2小时。

 

贫血小板血浆制备（以下两种方法均可）

（一）PDQ®血小板功能离心机

1.将样品放入PDQ，

2.选择PFP设置，

3.按下开始键。

 

 

（二）台式离心机制备贫血小板血浆^[10,12-14]

1.将样品放入离心机中

2.在2500×g离心15分钟。

收获样品

1.使用塑料移液器

2.小心地吸取贫血小板血浆，小心勿接触白细胞层（白膜层）。

3.将样品转移到塑料管并盖上盖子。

4.样品在测试前可以在15 – 28°C下保存zui多两个小时。

 

 

注意事项：

（1）废弃管的收集应符合实验室管理制度。

（2）当红细胞压积<30％或> 55％时需根据样本的血细胞比容调整标本体积使血液比抗凝剂为9比1。^[4,10,15]

（3）在手术过程中，不要将全血样本或测试样本暴露在玻璃表面。^[12,14]

（4）不要对明显溶血，黄疸或脂血症的样品进行UPTT测试。^[10]

注意：为获得*检测结果，溶解的UPTT试剂的应在使用前一刻通过磁力搅拌或轻轻颠倒混匀，或使用塑料涂层的一次性搅拌棒搅拌。

 

检测步骤

 

 

部分凝血活酶时间终点可通过凝血分析仪和手动凝血方法检测。

凝血分析仪检测法

凝血分析仪测试方法与用于激活的部分凝血活酶时间测试（aPTT）的方法相同，按照仪器说明进行检测即可。注意必须采用实验室测试的UPTT参考范围^[16]，所有测试应重复进行三次。 间接血液接触的检测设备需要1克样品，直接血液接触的检测设备需要2.5克样品。 必须控制检测中设备与测试样品接触的时间。

 

 

手动检测

注意：此测试程序仅适用于手动方法，如使用自动或半自动分析仪，请按照分析仪操作手册中的说明进行操作。

1.将0.1mL测试或对照血浆移入测试比色杯中，并在37℃下孵育血浆2分钟

2.在37℃下预孵育0.025M氯化钙

3.将0.1mL UPTT试剂移入含有血浆的测试容器中。

4.在37°C孵育血浆/试剂混合物2到5分钟或根据具体实验方案确定。

5.加入0.1mL预孵育的氯化钙，同时启动计时器。

6.记录凝血时间。

所有测试应重复进行三次。 间接血液接触的检测设备需要1.0克样品，直接血液接触的检测设备需要2.5克样品。 必须控制检测中设备与测试样品接触的时间。

 

检测结果

 

 

UPTT测试凝血终点的结果应以秒为单位。测试和参照均应重复测试三次，结果取平均值，然后与实验室已建立的参考范围进行比较。^{[12,14,15,17]}

测试结果中应包括表示测试有效性的p值，比较未暴露血浆的平均结果与暴露于检测装置的血浆的结果，要通过测试，设备统计的p值必须≥0.05。

预期结果，正常血浆和对照1,2和3的CV应小于5％。

正常血浆: >60秒

Level 1: >60 秒

Level 2: > 90 秒

Level 3: >120秒

注意：使用UPTT在光电光分析仪上用正常对照血浆进行测试时，结果将大于60秒，接触激活会缩短这一时间。由于检测方法和分析仪/人员之间的操作的差异，每个实验室必须为UPTT检测建立参考范围。实验方案，样品制备和终点确定方法均可能会影响测试结果。

 

 

影响因素：

UPTT测试结果的度和准确性可能受到许多因素的影响。实验方案和实验室间的差异来自用于测量凝固终点的凝血系统的数量.5,15在同一实验室中影响测试结果的因素包括用于溶解试剂的纯净水的pH值，移液技术，孵育时间和温度的把握，试剂污染或试剂批号的变化等^[18,19]。定期进行质量控制测试有助于确定和排除影响测试结果的因素。

 

 

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