qiagen REPLI-g线粒体DNA试剂盒说明书

REPLI-g Mitochondrial DNA Kit

REPLI-g线粒体DNA试剂盒

从人类和非人类线粒体DNA高度均匀地扩增全基因组

• 不同样品类型的灵敏扩增
• 适用于扩增人类和非人类mtDNA
• 克服了耗时的mtDNA分离的需求
• 核DNA降解的样品提供的信息性结果
• 血卡和头发的DNA扩增

REPLI-g线粒体DNA试剂盒可从总DNA样品中选择性扩增线粒体DNA，而无需事先分离线粒体DNA。该试剂盒提供了DNA聚合酶，缓冲液和试剂，用于从总DNA样品中的人类和非人类线粒体DNA小样品中特异性和均匀地扩增整个基因组。为了扩增非人类mtDNA，需要用适合该物种的合适引物混合物替换REPLI-g人类mt引物混合物（试剂盒未提供）。REPLI-g线粒体DNA试剂盒基于多置换扩增技术（MDA），可富集线粒体DNA，而核DNA污染小，从而避免了耗时的线粒体DNA分离，并提高了下游测定的灵敏度。

REPLI-g线粒体DNA试剂盒适用于分子生物学应用。本产品不用于诊断，预防或治疗疾病。

产品详情

性能

总DNA制剂通常包含约0.1％的线粒体DNA（例如，0.1 ng的总人类DNA包含0.1 pg的线粒体DNA）。REPLI-g线粒体DNA试剂盒提供了整个人类线粒体基因组的特异性扩增，每个反应产生约4 µg扩增的线粒体DNA。根据起始量，这相当于多达4000 万倍的线粒体DNA富集（见图“ 线粒体DNA富集 ”）。扩增后的基因组DNA的残留量降至低，并且不会干扰线粒体特异性的下游方法，例如qPCR或直接Sanger测序。

原理

线粒体DNA使用的限制之一是需要将其与核DNA分离，特别是在需要提高线粒体DNA标记物检测灵敏度的情况下。分离过程涉及许多耗时的步骤，并导致线粒体DNA大量损失。REPLI-g线粒体DNA试剂盒通过富集总DNA样品中的线粒体DNA序列来克服此限制。

REPLI-g线粒体DNA技术可在整个线粒体基因组中提供快速且高度一致的DNA扩增。该方法基于多重置换扩增（MDA）技术，该技术利用*的过程性DNA聚合酶进行等温基因组扩增。与基于PCR的扩增方法相比，REPLI-g DNA聚合酶由于具有很高的持续合成能力和链置换活性，因此能够扩增至100 kb，而不会与DNA模板分离，并且大程度地减少了序列和基因座的不等代表。

程序

使用REPLI-g线粒体DNA试剂盒扩增线粒体DNA仅涉及两个基本步骤（请参见流程图“ 纯化的线粒体DNA程序 ”）。首先，通过在REPLI-g mt反应缓冲液和REPLI-g人mt引物混合物中于75°C孵育5分钟使总的人类DNA样品变性，然后冷却以终止变性。但是，要使非人类物种的DNA样品变性，应将REPLI-g人类mt引物混合物替换为该物种的适当引物混合物（不包括在试剂盒中）。接下来，添加REPLI-g DNA聚合酶，并且等温扩增反应在33℃下进行8小时。

应用领域

REPLI-g扩增的线粒体DNA可用于多种下游应用，包括：

• 基因分型（例如，SNP，缺失，插入）
• 终点PCR，实时定量PCR 
• 序列分析

技术指标