jembio T4 DNA聚合酶说明书

T4 DNA聚合酶

来源：大肠杆菌噬菌体T4

描述：

• 表现出 5'->3' 聚合酶和 3'->5' 核酸外切酶活性 (1, 2)。

• 将标记的核苷酸添加到 DNA 片段的凹陷 3' 末端。

• 聚合酶需要单链DNA 模板和引物。

• 核酸外切酶比在 DNA 聚合酶 I 中发现的更强，对单链 DNA 的活性比对双链 DNA 的活性更高。

• 超纯重组酶。

• 核酸外切酶活性可用于从双链 DNA 的 3' 端去除一个或几个核苷酸。

• 酶适用于：o 去除 3' 悬垂以形成钝端 (3,4)o 5' 填充物以形成钝端 (3,4)o 使用置换合成进行探针标记 (3,4)o 单链缺失亚克隆 (5)o 定点诱变中的第二链合成 (6) 单位定义：1 单位是在 37oC 下 30 分钟内催化 10 nmole 总核苷酸掺入酸不溶性产物中的酶量。

储存条件：储存于 –20oC。储存缓冲液：20 mM 磷酸钾 (pH 6.5)、5 mM 二硫苏糖醇和 50% (v/v) 甘油。

检测条件：67 mM Tris-HCl（pH 8.8，22oC）、6.7 mM MgCl2、10 mM 二硫苏糖醇、16.6 mM 硫酸铵、6.7 µM EDTA、20 µg 牛血清白蛋白、45 µg 活化小牛胸腺 DNA3 mM 3 mM C0 和 0。 、dGTP、dTTP 和 [a-32P]dATP。在 100 µl 反应体积中，在 37oC 下孵育 30 分钟 (1)。质量控制：测试所有制剂的污染核酸内切酶活性。

参考：

1. Goulian, M.、Lucas, ZJ 和 Kornberg, A. (1968) J. Biol。化学 243, 627-638。

2. Lehman, IR (1981) 酶 14, 51-65。

3. Tabor, S. 和 Struhl, K (1989) 在 Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, FM, et al., eds) pp. 3.5.10-3.5.12, John Wiley&Sons, New York。

4. Sambrook, J.、Fritsch, EF 和 Maniatis, T. (1989) 分子克隆：实验室手册，第二版，第 5.44-5.47 页，冷泉港。

5. Dale, R., McClure, B. 和 Houchins, J., (1985) Plasmid 13, 31-40。

6. Kunkel, TA, Roberts, JD 和 Zakour, RA (1987) Methods Enzymol.154, 367-382。

T4 DNA 聚合酶是嗜中性聚合酶，表现出非常强的 3'->5' 核酸外切酶活性。