描述

更少的siRNA，更少的脱靶效应

一些出版物表明，转染低浓度的 siRNA 可避免脱靶效应。事实上，当以高浓度转染 siRNA 时，会观察到这些不需要的非特异性副作用 (1,2)。因此，可以通过使用尽可能少的 siRNA 来提高实验数据的可靠性。这就是 INTERFERin ^®专门设计用于使用低 siRNA 浓度提供高沉默效率的原因。
INTERFERin ^®介导的 1 nM 特定 siRNA 递送显示出选择性和高效的基因表达敲低，而竞争对手 (L2K) 需要至少 10 nM siRNA 才能达到 50% 的沉默效率（图 1）。

图 1：INTERFERin ^®只需要 1 nM siRNA 即可实现有效的基因沉默。根据制造商的建议，使用 INTERFERin ^®或竞争产品 L2K用抗 Luc siRNA 转染稳定表达萤火虫荧光素酶的 3LL 细胞。48 小时后使用常规测定法测量荧光素酶表达。对照siRNA未观察到抑制作用。

令人惊讶的是，在 10 pM siRNA 下仍然实现了 50% 的沉默（图 2）。

图 2：即使在 siRNA 浓度极低的情况下，INTERFERin ^®也非常高效。A549-染GL3Luc细胞在血清的存在下与使用INTERFERin抗吕克的siRNA的递减浓度转染^®。48 小时后使用常规测定法测量荧光素酶表达。对照siRNA未观察到抑制作用。

用 INTERFERin ^®转染靶向内源性核纤层蛋白 A/C 的 1 nM siRNA显着降低了核纤层蛋白基因表达至几乎检测不到的水平（图 3）。

图 3：用 INTERFERin ^®转染 1 nM siRNA导致高效和特异的基因沉默。使用 INTERFERin ^®用 1 nM lamin A/C siRNA 转染 CaSki 细胞。48 小时后，通过免疫荧光显微镜确定核纤层蛋白 A/C 的沉默效率。

1. Birmingham, A. et al., (2006) Nature Methods, Vol.3, No3, 199-204 
2. Caffrey, D. et al., (2011) PLoS One。2011;6(7):e21503。电子版 2011 年 7 月 5 日。

适用于miRNA转染

microRNA (miRNA) 寡核苷酸的转染越来越多地用于分析特定 miRNA 对细胞功能的生物学影响。INTERFERin ^®是递送miRNA、miRNA 模拟物或 pre-miRNA的试剂。
INTERFERin ^®是最新一代的siRNA & miRNA 转染试剂，专为在多种细胞中实现高转染效率而设计，从而实现高基因沉默或刺激基因表达。事实上，还已知一些 miRNA 通过与感兴趣基因的启动子结合来诱导基因表达。例如，INTERFERin ^®介导的 miR-373 递送导致 E-钙粘蛋白表达增加 3 倍（图 4）。

图 4：用 INTERFERin ^®转染 miR-373增强了 E-钙粘蛋白的表达。将 PC-3 细胞接种在 6 孔板中并使用 miR-373 (25 nM) 转染，每孔使用 8 µl INTERFERin ^®。转染后 72 小时，通过 RT-qPCR 测定 E-cadherin mRNA 表达水平。该测定用HPRT-1基因表达标准化。

INTERFERin ^®的阳离子成分只需要很少量的寡核苷酸，因此转染过程温和。此外，简单而强大的协议确保了可重复的结果。可以用少量的 INTERFERin ^®转染像 miRNA 这样的寡核苷酸，导致强烈的基因沉默或基因表达的刺激。无论使用何种浓度的 INTERFERin ^®，其效果大致相同，使 INTERFERin ^®成为一种经济的试剂。例如，使用不同体积的 INTERFERin ^®的倍数变化始终在 1.5 和 1.8 之间（图 5）。

图 5：INTERFERin ^®已经在非常低的用量下有效。PC-3 细胞接种在 6 孔板中，并使用 miR-373 (10 nM) 转染，每孔使用 4、6 或 8 µl INTERFERin ^®。转染后 72 小时，通过蛋白质印迹分析 E-钙粘蛋白表达。使用β-肌动蛋白表达对测定进行标准化。量化以控制情况为参考表示。

与高细胞活力相关的高转染效率使 INTERFERin ^® 成为为科学出版物生成相关数据的试剂。事实上， 自推出以来，使用 INTERFERin ^®研究 miRNA 和 miRNA 相关分子的出版物数量呈指数增长（图 6）。

图 6：INTERFERin ^®参与了越来越多关于 miRNA 转染的出版物。

超过 90% 的基因沉默

对于许多贴壁细胞系或原代细胞，1 nM siRNA 足以获得 90% 以上的基因沉默。对于悬浮细胞系，使用 5 nM siRNA的 INTERFERin ^®仍然可以达到 80% 的沉默（表 1）。

表 1：成功转染的细胞系和使用 INTERFERin ^®获得的沉默效率。

我们的Polyplus 转染数据库中提供了各种细胞系的特定条件。

出色的细胞活力

在细胞活力方面，INTERFERin ^®优于其他转染试剂。用 1 nM siRNA 转染 48 小时后，用 INTERFERin ^®转染的细胞看起来很健康，而用试剂 S 可以清楚地观察到毒性（图 7）。

图 7：INTERFERin ^®对细胞非常温和，如使用 INTERFERin ^®或竞争试剂转染 siRNA 48 小时后的细胞形态比较所示。A549-GL3Luc 细胞在血清存在下使用 INTERFERin ^®或竞争者 S 或 H 根据制造商的方案用 1 nM 荧光素酶 siRNA 转染。

简单的标准协议

INTERFERin ^®可以立即使用，并且协议简单明了。1 nM siRNA 的起始浓度可确保大多数细胞类型中的大多数基因沉默（图 8）。
INTERFERin ^®是与血清和抗生素兼容，因此避免任何耗时洗涤和介质变化; 此外，INTERFERin ^®可以留在细胞上而不会产生任何不利影响。

图 8：INTERFERin ^®协议