Assayquant荧光底物简介

Assayquant公司致力于开发激酶和磷酸酶的荧光底物。Assayquant的底物含SOX (sulfonamido-oxine) 荧光团，可以实时的测量酶活性，用持续的反应曲线来了解抑制剂的作用机理，而非用市面上其它技术采用的终点测试法。Assayquant采用体内自然底物的序列，测试的结果生理相关，生化实验和体内实验具有强的相关性。

荧光团 – Sox 荧光团非常小，具有低的疏水性。当Sox 荧光团和镁子以及磷酸结合后可以在485nm发射荧光。市面上广泛应用的读板仪都可以用来读取荧光。 不仅如此，用铕离子（Eu3+）代替镁离子 （Mg2+），可以终止持续反应，用时间分辨荧光，在620nm检测信号，从而避免化合物的自身荧光干扰。标记荧光团的底物多肽- Assayquant拥有>30,000 种荧光多肽，包括针对野生型以及突变体的丝/苏氨酸和酪氨酸激酶。Sox荧光团通过共价键连接到底物多肽磷酸位点的附近。至今为止， AssayQuant 已经发展了 针对>400多种激酶和磷酸酶的 测量试剂盒以及荧光多肽底物。Assayquant还提供抑制剂机理测试以及激酶组的特异性测试。

Assayquant技术主要成分

持 续

持续的反应曲线提供 大量的反应数据，对比其它技术只能拿到一个终数据

直 接 直接测量激酶反应，而不是间接多步测量酶反应的产品生理相关 底物序列采用人体内自然底物序列，无需加入其它非自然的氨基酸序列简单易用 只要拥有市面上常见的荧光读板仪即可，实验操作超级简单创 新 全新概念，突破市面上其它技术的局限灵 活 不受ATP浓度的限制，可以在ATP Km以及生理浓度（1mM）测试适用广 不需转换不同平台， 适用于整个药物开发过程-从HTS到临床前期

用 I C50, EC50 and Ki 来衡量抑制剂的效能可以同时比较多种抑制剂的效能Tarceva，EGFR的抑制剂梯度稀释到0.085nM-5000nM 之后与EGFR 野生型和突变体 （T790M/L858R）混合反应。结果证明突变体比野生型对抑制剂的敏感性降低了380倍，表明突变体具有较强的抗药性。

Assayquant的技术即适用于动力研究，也适用于终点测试。只需在动力反应结束后加入Eu3+，即可把反应变成红移（red shift）反应测试。对于HTS，采用加入Eu3+ 进行终点测试可以在620nm用时间分辨荧光以及加入100µsec读取延迟来读取数据。从而避免化合物自身荧光的干扰。