T细胞尼龙毛柱分离法

上海金畔生物科技有限公司提供T细胞尼龙毛柱
简单介绍
在研究体内及体外的免疫系统时,分离淋巴细胞群是一个关键步骤。因为现在市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清,所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用
了尼龙毛对B细胞的亲和力,从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。
 
T细胞尼龙毛柱分离法的详细介绍
T细胞尼龙毛柱分离法
在研究体内及体外的免疫系统时,分离淋巴细胞群是一个关键步骤。因为现在市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清,所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用
了尼龙毛对B细胞的亲和力,从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。因为这个方法不像流式和磁珠费用昂贵,而且操作简便,所需要的条件也不高,是一种非常实用的方法

(在此我向各位解释一下,现在分离T细胞的方法主要是三种,流式,磁珠法,尼龙毛法。与前两种方法相比,尼龙毛法的优势在于无需特定的设备仪器,一般的实验室均有条件操作;价格相
对低廉;可以进行大量样本操作。)
首先要指出的是实验中所使用的是分离T细胞专用的尼龙毛(Nylon Fiber),不是化工上的尼龙纤维,曾经有人问过我这种问题,如果你买错了,可是做不出来的!其次,现在市面上的尼龙毛
也是良隽不齐,也有同仁反应买到的尼龙毛加入缓冲液以后成了一团糨糊,根本没法使用,这个问题就要靠各位的慧眼了。
现在市面上有尼龙毛填料,也已经有了商品化的尼龙毛柱子,这两者的区别主要是以下两点:
1.       商品化的柱子的填料量是已经定好的,有一个确定的上样量范围。而自己买填料装柱可以控制填料量,也就是可以控制上样量,这对于样本量非常少,或是样本量非常大的实验需求
非常合适。
2.       商品化的柱子已经经过了无菌处理(一般是辐射灭菌),而自己装柱当然就要自己灭菌了。
3.       商品化的柱子在实验的重复性上有着绝对的优势。自己装的柱子在填料的处理和装柱的松紧等方面不容易控制,差异性的控制就看你的实验技巧了。
操作方法:
1.秤取1.5g尼龙毛装入20-30ml玻璃或一次性注射器内(要可以灭菌的),填料的体积控制在15毫升左右(注射器上有标记,所以还是比较好控制的),因为尼龙毛的松紧关系到T细胞的回收率,
所以要特别注意。注射器下端配接5厘米左右长的带有弹簧夹的橡皮管。
2. 加入大量的PBS平衡柱子后,用铝箔包裹,并置于适当的容器内,高压灭菌15分钟。
(商品化尼龙毛柱以上步骤可以省略,经过无菌PBS平衡后直接进行下列步骤。)
3. 灭菌的尼龙毛柱垂直固定后放于超净台内,顶部以铝箔覆盖,避免污染。
4. 橡皮管,弹簧夹用无水酒精消毒后接注射器下端,打开弹簧夹调节流速在大约3-4ml/min。
5.首先,加入3-4倍柱体的无血培养基平衡;随后,之后加入相同体积的含有血清的培养基平衡(上述培养基都要预热),最后等培养基页面接近柱填料页面时,关闭弹簧夹。
6. 样本细胞悬浮液浓度控制在5×108cells/ml的,上样量一般是1/3-1/5柱体积(商品化的柱子一般都有推荐上样量)。样品加入之后,再加入少量培养液,然后关闭弹簧夹。
7. 柱上覆盖铝箔,移置于消毒过的容器中,37℃孵育1小时。此过程中柱子必须要保持垂直状态。
8. 从培养箱中拿出柱子,置于超净台内,除去铝箔。接上按照4.中的方法消毒的弹簧夹和橡皮管,加入适当体积经37℃预热的培养基,打开弹簧夹控制流速在3-4 mL/min,流出约5ml之后,
流出的培养液基变得不透明,此时其中含有T细胞,收集这一部分培养基。
9. 基本上何时结束收集取决于流出液体中细胞的浓度,实际上,收集的量达到一个柱体积时就可以停止收集,因为即使收集更多的量,回收率几乎不会增加。
10 。参考数据:
样本:小鼠脾脏(T细胞含量在30-40%,B细胞含量在55-60%)
细胞回收率:13-25%
B细胞污染率:小于15%
 
样本:大鼠脾脏(T细胞含量在30-35%,B细胞含量在55-65%)
细胞回收率:大于25%
B细胞污染率:小于15%
 
样本:人或兔外周血
细胞回收率 : 20-30% (人);25-35% (兔)
B细胞污染率:小于5% (人、兔)
 
(注)收集粘附于尼龙毛上的细胞时,将T细胞收集完毕后的尼龙毛在无菌操作的状态下取出,转移到适当的容器中,用镊子小心的将尼龙毛松开,粘附的细胞可以洗到培养基中。或者将注射
器芯插入注射器内,通过压力使的粘附的细胞随着液体流出。
 
产品信息
品牌     品名                   规格
Wako  T细胞尼龙毛柱          0.5g*10  (推荐用于小鼠脾脏)
Wako  T细胞尼龙毛柱L型      1g*10   (推荐用于大鼠脾脏、人或兔子的外周血)
Wako  T细胞尼龙毛            2g*5   (可按照自己的需要装柱,控制上样量)
Wako  小鼠淋巴细胞分离试剂  30mL*5  用于从小鼠脾脏,淋巴结,淋巴结悬浮液中分离淋巴细胞
Wako  人淋巴细胞分离试剂  100ml*6  用于从人血中提取淋巴细胞
Wako  铁粉(羰基铁)Iron Powder, from Iron Carbonyl  25g   直径25um,用于清除巨噬细胞
Wako  κ-卡拉胶κ-Carrageenan  25g
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疫苗灭活剂——β-丙内酯热卖中

上海金畔生物科技有限公司提供疫苗灭活剂——β-丙内酯热卖中

β-丙内酯(β-propionolactone,BPL) 是杂环类化合物(C 3H 4O 2),沸点162℃,常温下是无色粘稠状液体,对病毒具有很强的灭活作用。β-丙内酯作用于病原体DNA或RNA,改变病毒核酸结构达到灭活目的,而不直接作用于蛋白。从1984年作为狂犬疫苗的灭活剂以来,已被广泛应用于多种动物疫苗的生产,包括甲型肝炎病毒、狂犬病病毒、家禽流行性感冒病毒等。β-丙内酯作为理想的灭活剂有以下突出优点:

  1. 易水解、无残留,水解产品无危害;
  2. 直接作用于病毒或病原物核酸,保持免疫原性,强灭活效果;
  3. 灭活时间短,缩短了疫苗生产周期。

β-丙内酯和甲醛作为疫苗灭活剂的比较如下:

  β-丙内酯 甲醛
灭活对象 作用于病原体DNA或RNA,改变病毒核酸结构达到灭活目的,而不直接作用于蛋白,保持免疫原性 对病毒核酸和病毒蛋白质都有破坏作用,作用于病毒含氨基的核苷酸碱基(如A,G,U)
灭活时间 灭活时间短,从而显著地缩短了疫苗生产周期,提高了经济效益 灭活时间长,一般需要在37-39℃处理24h以上或更长时间
灭活效果影响 保存时间过长引起自身聚合 易受温度、pH、浓度、是否存在有机物、病原体的种类和含氮量等因素影响
灭活残留 水解产物对机体无毒无害,不必考虑在成品疫苗中的残留 残留的游离甲醛随疫苗注入机体后会产生制激性反应

  产品信息:

基本信息:
名称:beta-Propiolactone
CAS.NO.: 57-57-8
分子式:C 3H 4O 2
分子量:72.06

质量标准:
外观:Colorless – nearly colorless, clear liquid
纯度:95.0+% (毛细管气相色谱)
密度:1.146〜1.153g/ml (20℃)
屈折率:1.410~1.415(20℃/D)

产品编号 产品名称 规格
168-21011 β-Propiolactone 5 mL
166-21012 25 mL

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硫酸葡聚糖191-08365 SODIUM DEXTRAN SULFATE 5000 500G Wako 

硫酸葡聚糖系列 Dextran Sulfate
上海金畔生物科技有限公司提供硫酸葡聚糖系列 Dextran Sulfate 191-08365 SODIUM DEXTRAN SULFATE 5000 500G Wako 
硫酸葡聚糖10,000       Dextran Sulfate  50 g/580RMB            
描述:Ultra Pure Grade, >99.0% 1Kg 询价
硫酸葡聚糖40,000       Dextran Sulfate  100 g/500g          
描述:Ultra Pure Grade 
硫酸葡聚糖5000       Dextran Sulfate  50 g/580RMB      
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硫酸葡聚糖500,000       Dextran Sulfate  50 g/580RMB     
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198-13405-500      SODIUM DEXTRAN SULFATE 5000        500G      Wako      13440RMB 
196-13401-100      SODIUM DEXTRAN SULFATE 5000             100G      Wako      3128RMB     
194-13402-25      SODIUM DEXTRAN SULFATE 5000               25G      Wako      1360RMB     
for Biochemistry 
199-08361      SODIUM DEXTRAN SULFATE 5000      100G      Wako      2856RMB 
197-08362      SODIUM DEXTRAN SULFATE 5000      25G      Wako      1224RMB     
191-08365      SODIUM DEXTRAN SULFATE 5000      500G      Wako      12800RMB         
199-09983      SODIUM DEXTRAN SULFATE 500,000       50G      Wako      2040RMB 
197-09984      SODIUM DEXTRAN SULFATE 500,000       100G      Wako      3536RMB     
193-09981      SODIUM DEXTRAN SULFATE 500,000       10G      Wako      571.2RMB     
以下为聚合物标准品
硫酸葡聚糖 500,000       Dextran sulfate 500,000  500mg    
硫酸葡聚糖 50,000       Dextran Sulfate 50,000      500mg      
硫酸葡聚糖 40,000       Dextran Sulfate 40,000      500mg      
硫酸葡聚糖 10,000       Dextran Sulfate 10,000      500mg      
硫酸葡聚糖 5,000       Dextran Sulfate 5,000      500mg          
硫酸葡聚糖 3,000       Dextran Sulfate 3,000      500mg
硫酸葡聚糖 2,000       Dextran Sulfate 2,000      500mg     
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WAKO LabAssay™ Uric Acid 尿酸定量检测试剂盒

上海金畔生物科技有限公司提供 WAKO LabAssay™ Uric Acid  尿酸定量检测试剂盒
WAKO LabAssay™ Uric Acid  尿酸定量检测试剂盒
可用于人,大鼠以及小鼠血清样本的检测
(本试剂盒仅为研究试剂,不可用于诊断或做其他用途。)
LabAssay™ Uric Acid  尿酸定量检测试剂盒
【摘要】
尿酸是嘌呤衍生物的代谢产物,血清中的尿酸是核蛋白的分解产物和食物性物质,核蛋白代谢异常和肾脏机能障碍与尿酸量的变化存在联系。本品是利用尿酸酶与N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-甲基苯胺钠(TOOS),进行酶促反应生成青紫色色素,根据生成物质的吸光值检测血清中、尿中的尿酸量的试剂盒。与微孔板配套使用,可进行多样品检测。
【检测原理】
尿酸酶氧化样品中的尿酸,产生过氧化氢。生成的过氧化氢,在过氧化物酶的作用下,与N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-甲基苯胺钠(TOOS) 及4-氨基安替比林定量氧化缩合,产生青紫色色素。测量这个青紫色色素的吸光值,计算出样品的尿酸浓度。
 
292-64001 LabAssay TM尿酸 [尿酸酶、TOOS法]
与微孔板配套使用,可用于小鼠血清中尿酸的检测。
【特点】
蒸馏水作为样品时,吸光值为0.15以下。
测量已知浓度的血清时,结果在已知浓度的±15%以内。
【试剂盒组成】
缓冲液————————100ml×4瓶(磷酸缓冲液(pH6.4),TOOS)
显色剂————————100ml用×4瓶
(溶解时:尿酸酶,过氧化物酶,4-氨基安替比林,脂蛋白脂肪酶,抗坏血酸氧化酶)
尿酸标准液——————–10ml×1瓶
【试剂的配制】
显色剂:将1瓶显色剂(100mL用)溶解于1瓶缓冲液(100mL)中。
配制后,2~10℃保存,可保存3星期。
【标准操作法】
向微孔板内添加5μl样品和300μl显色剂,充分混合,37℃孵育5分钟。以此作为空白对照值,测量样品及标准液的吸光值。
【检测波长】
主波长555nm(副波长700nm)
【性能】
蒸馏水测量时的吸光值<0.15。
特定浓度标准液(尿酸10mg/dL)测量时的吸光值为0.04~0.26。
 
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产品货号 名称 包装
292-63901 LabAssay™ A/G(白蛋白与球蛋白比值检测试剂盒) 1000次
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