KAMIYA KT-26867说明书

KAMIYA KT-26867说明书

 

KAMIYA BIOMEDICAL COMPANY

人蛋白零点,髓鞘 (MPZ) ELISA

用于定量测定组织匀浆、细胞培养上清液和其他生物体液中的人 MPZ

目录号编号KT-26867

仅供研究使用。不得用于诊断程序。

产品信息

人蛋白零点,髓鞘 (MPZ) ELISA

目录号编号KT-26867

 

Human Protein Zero, Myelin

(MPZ) ELISA

 

预期用途

该试剂盒是一种夹心酶免疫分析法,用于体外定量测定组织匀浆、细胞培养上清液和其他生物体液中的人 MPZ。仅供研究使用。不适用于  用于诊断程序。

 

组件

 

试剂

数量

预包被、即用型 96 孔板条板

1

校准品(冻干)

2

校准品稀释液

1 × 20 mL

检测试剂 A

1 × 120 µL

检测试剂 B

1 × 120 µL

试验稀释剂 A(2X 浓缩液)

1 × 6 mL

试验稀释剂 B(2X 浓缩液)

1 × 6 mL

TMB 底物

1 × 9 mL

终止液

1 × 6 mL

清洗缓冲液(30X 浓缩液)

1 × 20 mL

96 孔封板膜

4

需要但未提供的材料

  • 带有 450±10 nm 滤光片的酶标仪。
  • 精密单通道和多通道移液器和一次性吸头。
  • 用于稀释样品的 Eppendorf 管。
  • 去离子水或蒸馏水。
  • 吸水纸吸干微量滴定板。
  • 清洗液容器。

 

储存

所有试剂应根据小瓶上的标签进行保存。接收后,校准品、检测试剂 A、检测试剂 B 和 96 孔板条应储存在-20 ℃。未使用的试剂条应保存在密封袋中,并提供干燥剂,以尽量减少暴露于潮湿空气中。开封的检测试剂盒将在所示失效日期前保持稳定,前提是其按照上述规定储存。

 

原理

该试剂盒中提供的微量滴定板已用 MPZ 特异性抗体预包被。然后将校准品或样品加入到含有 MPZ 特异性生物素结合抗体制剂的适当微量滴定板孔中。然后,向每个微孔板小孔中加入与辣根过氧化物酶 (HRP) 结合的抗生物素蛋白并孵育。然后向各孔中加入 TMB 底物溶液。只有那些含有 MPZ、生物素偶联抗体和酶偶联抗生物素蛋白的孔才会出现颜色变化。

 

加入硫酸溶液终止酶-底物反应,并采用分光光度法在 450 nm±10 nm 波长处测定颜色变化。然后通过比较样品的 O.D. 值与校准曲线,测定样品中 MPZ 的浓度。

 

 

样本采集和储存

 

组织匀浆

组织匀浆的制备因组织类型而异。对于本试验,在冰冷 PBS (0.02 mol/L,pH 7.0-7.2) 中冲洗组织,以*除去过量血液,并在匀浆前称重。将组织制成小块,置于冰上,用玻璃匀浆器在 5-10 mL PBS 中匀浆化(Micro tissue Grinders 也工作)。用超声细胞破碎仪对所得混悬液进行超声处理或进行两次冻融循环以进一步破碎细胞膜。然后,将匀浆在 5,000 xg 下离心 5 min。立即除去上清液并进行试验,或等分并储存在≤-20 ℃ 下。

 

细胞培养上清液和其他生物体液

以 1,000 xg 离心样品 20 min。立即除去微粒并进行测定,或将样品等分试样储存在-20 ℃ 或-80 ℃ 下备用。避免反复冻融循环。

注:

1. 5 天内使用的样品可在 4 ℃ 下储存,否则样品必须在-20 ℃(≤1 个月)或-80 ℃(≤2 个月)下储存,以避免生物活性损失和污染。

  • 样本溶血会影响结果,因此溶血标本无法检出。
  • 进行分析时,将样品缓慢恢复至室温。

 

试剂制备

使用前,将所有试剂盒组分和样本置于室温 (18-25 ℃) 下。

 

校准品

用 0.1 mL 校准品稀释液复溶校准品,在室温下保持 10 min,轻轻振摇(不要起泡)。储备液中校准品的浓度为 10 ng/mL。请制备 7 支含 0.5 mL 校准品稀释液的试管,并根据下图制备双倍稀释系列。在下一次转移前,充分混合各试管。设置 7 个点的稀释校准品,如 10 ng/mL、5 ng/mL、2.5 ng/mL、1.25 ng/mL、0.625 ng/mL、0.312 ng/mL、0.156 ng/mL,后一个含有校准品稀释液的 EP 管作为空白 (0 ng/mL)。

 

 

 
 

 

 

 

1

2

3

4

5

6

7

8

ng/mL

10

5

2.5

1.25

0.625

0.312

0.156

0

 

试验稀释剂 A 和 B

用 6 mL 去离子水或蒸馏水稀释 6 mL 试验稀释剂 A 或 B 浓缩液 (2X),制备 12 mL 试验稀释剂 A 或 B。制备的工作稀释液不能冷冻。

 

检测试剂 A 和 B

使用前短暂旋转或离心储备检测试剂 A 和检测试剂 B。分别用工作试验稀释剂 A 或 B 稀释至工作浓度 (1:100)。

 

清洗溶液

用 580 mL 去离子水或蒸馏水稀释 20 mL 清洗液浓缩液 (30X),制备 600 mL 清洗液 (1X)。

 

TMB 底物

用无菌吸头吸取所需剂量的溶液,不得将残留溶液再次倒入小瓶中。

 

 
 

 

 

注:

1. 不允许在孔中直接进行连续稀释。

2. 在测定前 15 min 内制备校准品。请勿在 37 ℃ 下直接溶解试剂。

  • 请按照说明仔细复溶校准品或工作检测试剂 A 和 B,避免起泡并轻轻混合,直至晶体*溶解。为尽量减少移液引起的不精密度,应使用小体积并确保移液器经过校准。建议抽吸 10µL 以上,用于一次移液。

4. 复溶的校准品、检测试剂 A 和检测试剂 B 只能使用一次。

5. 如果在清洗溶液浓缩液 (30X) 中形成晶体,则加热至室温并轻轻混合,直至晶体*溶解。

6. 试剂配制用水或容器受污染会影响检测结果。

 

 

样品制备

  • Kamiya Biomedical Company 仅对试剂盒本身负责,不对检测过程中消耗的样本负责。用户应计算整个测试中可能使用的样本数量。请提前预留足够的样本。

 

2. 请在测定前预测浓度。如果这些值不在校准曲线范围内,则用户必须确定其特定实验的样本稀释度。

 

3. 如果手册中未指明样本,则需要进行初步实验以确定试剂盒的有效性。

 

4. 用化学裂解缓冲液制备的组织或细胞提取样品,由于某些化学物质的影响,可能会引起意想不到的 ELISA 结果。

 

  • 由于其他来源的抗原可能与我们试剂盒中使用的抗体不匹配(例如,抗体靶向构象表位而不是线性表位),我们的产品可能无法识别其他生产商的一些天然或重组蛋白。

 

6. 受细胞活性、细胞数量和取样时间等因素的影响,试剂盒可能无法检测细胞培养上清液样本。

 

7. 建议使用未经长期储存的新鲜样本进行试验。否则,这些样品可能发生蛋白质降解和变性,终导致错误的结果。

 

试验程序

  • 测定稀释校准品、空白和样本孔。校准品制备 7 孔,空白制备 1 孔。向适当孔中分别加入 100µL 校准品稀释液(读取试剂制备液)、空白和样本。用封板覆膜覆盖。在 37 ℃ 下孵育 2 小时。

 

2. 清除每个孔中的液体,不要清洗。

 

  • 向各孔中加入 100µL 检测试剂 A 工作溶液。用封板覆膜覆盖后,在 37 ℃ 下孵育 1 小时。

 

  • 吸取溶液,使用喷射瓶、多通道移液器、歧管分配器或自动清洗器用 350µL 1X 清洗液清洗每个孔,静置 1-2 min。通过将平板卡在吸水纸上,*去除所有孔中的剩余液体。重复 3 次。后一次洗涤后,通过抽吸或倾析去除任何剩余的洗涤缓冲液。倒置平板,在吸水纸上吸干。

 

  • 向各孔中加入 100µL 检测试剂 B 工作溶液。用封板覆膜覆盖后,在 37 ℃ 下孵育 30 min。

 

6. 按照步骤 4 重复抽吸/清洗过程 5 次。

 

  • 向各孔中加入 90µL 底物溶液。用新的封板机盖住。在 37 ℃ 下孵育 15-25 min(不得超过 30 min)。避光保存。加入底物溶液后,液体将变为蓝色。

 

  • 向各孔中加入 50µL 终止液。加入终止液后,液体将变为黄色。轻敲微孔板一侧,混匀液体。如果颜色变化不均匀,轻敲平板以确保充分混合。

 

  • 除去任何一滴水和平板底部的指纹,并确认液体表面无气泡。然后,运行酶标仪,立即在 450 nm 处测定。

注:

  • 试验制备:保留适当数量的条带用于 1 次实验,并从微量滴定板中取出额外的条带。取出的试剂条应重新密封,并在-20 ℃ 下储存,直至试剂盒失效日期。
  • 样本或试剂添加:请使用新鲜制备的校准品。请小心地将样品加入孔中,并轻轻混合以避免起泡。尽可能不要接触孔壁。对于程序中的每个步骤,将试剂或样本添加到测定板的总分配时间不应超过 10 min。这将确保每个移液步骤的运行时间相等,不会中断。尽管不要求,但建议重复检测所有校准品和标本。为避免交叉污染,在每个校准品水平添加之间、样本添加之间和试剂添加之间更换移液器吸头。此外,每种试剂使用单独的储液器。
  • 孵育:为确保结果准确,孵育步骤期间必须适当粘附封板覆膜。在各孵育步骤之间,请勿使微孔长时间处于未覆盖状态。试剂加入微孔板条后,在检测过程中的任何时间都不要让板条变干。必须观察培养时间和温度。
  • 清洗:清洗程序至关重要。每个步骤*去除液体对于良好性能至关重要。后一次清洗后,通过抽吸或倾倒除去任何剩余的清洗液,并除去平板底部的水滴和指纹。清洗不充分将导致精密度较差和吸光度读数假性升高。
  • 反应时间的控制:观察加入 TMB 底物后颜色的变化(如 10 min 观察一次),如颜色过深,应提前加入终止液,避免反应过强而导致吸光度读数不准确。

6. TMB 底物容易被污染。请避光保存。

 

7. 小于 60% 的环境湿度可能会对终性能产生一些影响,因此,建议在该条件下使用湿化器。

 

结果计算

计算各校准品、质控品和样本重复两次读数的平均值,并减去平均零校准品光密度。在 log-log 图形纸上创建校准曲线,y 轴为 MPZ 浓度,x 轴为吸光度。通过校准品点绘制拟合直线,可通过回归分析确定。还建议使用一些 plot 软件。如果样本已被稀释,则从校准曲线中读取的浓度必须乘以稀释因子。

 

性能

检测范围

0.156–10 ng/mL。

用于 ELISA 的校准曲线浓度为 10 ng/mL、5 ng/mL、2.5 ng/mL、1.25 ng/mL、0.625 ng/mL、0.312 ng/mL、0.156 ng/mL。

 

灵敏度

人 MPZ 的小可检测剂量通常低于 0.052 ng/mL。本试验的灵敏度或检测下限 (LLD) 定义为可与零区分的低蛋白浓度。测定零校准品 20 次重复测定的平均 O.D. 值加上 3 个标准差。

 

特异性

该方法检测人 MPZ 具有较高的灵敏度和*的特异性。未观察到人 MPZ 和类似物之间存在显著的交叉反应性或干扰。

注:受当前技能和知识的限制,我们不可能完成人 MPZ 与所有类似物的交叉反应检测,因此交叉反应可能仍然存在。

 

分析方法总结

1. 准备所有试剂、样本和校准品;

2. 向每个孔中加入 100µL 校准品或样本。在 37 ℃ 下孵育 2 小时;

3. 加入 100µL 制备好的检测试剂 A。在 37 ℃ 下孵育 1 小时;

4. 抽吸并清洗 3 次;

5. 加入 100µL 制备好的检测试剂 B。在 37 ℃ 下孵育 30 min;

6. 抽吸并清洗 5 次;

7. 加入 90µL 底物溶液。在 37 ℃ 下孵育 15-25 min;

8. 加入 50µL 终止液。立即在 450 nm 处读数。

 

 

重要说明

1. 终的实验结果将与终端用户的操作技能和实验环境密切相关。请确保有足够的样本可用。

  • 不同批次的试剂盒在检测范围、灵敏度和显色时间上可能略有不同。请严格按照试剂盒随附说明书进行实验,同时使用我们网站的电子版(www.k-assay。。com)仅供参考。

3. 请勿将一批试剂盒中的试剂混合或替换为另一批试剂盒。仅使用制造商提供的试剂。

4. 储存和孵育期间,所有试剂均应避免强光照射。所有试剂瓶盖应盖紧,防止微生物蒸发和污染。

 

  • 次开板时孔内可能有一些雾状物质。不会对终试验结果产生任何影响。在需要之前,请勿从储存袋中取出微量滴定板。
  • 试剂制备和上样过程中的错误操作,以及酶标仪参数设置不正确可能导致结果不正确。在 450±10 nm 波长下,带宽为 10 nm 或更低、光密度范围为 0-3 O.D. 或更高的酶标仪可用于吸光度测量。实验前请仔细阅读说明书并调整仪器。
  • 即使是同一个操作员也可能在两个独立的实验中得到不同的结果。为了获得更好的重现性结果,应控制试验中每个步骤的操作。此外,建议在各批次测定前进行初步实验。
  • 每个试剂盒均通过了严格的质量控制检测。然而,由于一些非预期的运输条件或不同的实验室设备,终端用户的结果可能与我们的内部数据不一致。不同批次试剂盒之间的批内方差也可能由上述因素引起。
  • 来自不同生产商的相同产品的试剂盒可能会产生不同的结果,因为我们尚未将我们的产品与其他生产商进行比较。
  • 建议与该试剂盒一起使用的终止液为酸性溶液。使用本材料时,请佩戴眼睛、手、面部和衣物。

 

 

 

仅供研究使用。不得用于诊断程序。

kamiyabiomedical KT-470*

kamiyabiomedical KT-470*

Mouse Cardiac Troponin-I ELISA

 

 

小鼠心肌肌钙蛋白-I酶联免疫吸附试验
用于小鼠血浆肌钙蛋白I的定量测定。
货号 KT-470
仅供研究使用

产品信息
小鼠心肌肌钙蛋白-I酶联免疫吸附试验
猫。KT-470号
产品
K-分析小鼠心肌肌钙蛋白-I酶联免疫吸附试验是一种酶免疫分析法,用于定量测定心肌
小鼠血浆肌钙蛋白-I。仅供研究使用。
介绍
心肌肌钙蛋白-I(ctni)是调节肌肉收缩的肌钙蛋白复合物的组成部分。心脏损伤后,CTNI
被释放到血液中。因为它在心脏中有特殊的表达,所以它是心脏损伤的一个*的生物标志物。在
人CTNI水平在受伤后12-24小时达到峰值,2-6天内恢复到基线水平。在小鼠中,水平早在1
1-3天内恢复正常。
原理
本试验用于血浆样品。酶联免疫吸附试验使用两种不同的抗体,它们识别相对
CTNI上的蛋白酶抗性表位。一种用于固相固定(微量滴定井)。第二个是共轭的
对辣根过氧化物酶(HRP)进行检测。首先用三体积的血浆稀释血浆样品。
稀释剂。然后将校准器和稀释样品与HRP共轭物在微量滴定池中培养1小时。这个
结果CTNI分子夹在固定和检测抗体之间。洗井到
去除未结合的HRP共轭物。加入TMB,孵育20分钟。如果存在CTNI,则形成蓝色。颜色
通过添加停止溶液停止显影,将颜色变为黄色,并在450 nm处测量吸光度。
CTNI的浓度与吸光度成正比,由校准曲线得出。
组件
•防CTNI涂层板(12 x 8孔条)
•CTNI库存校准器(冻干)
•校准器稀释剂,25毫升
•血浆稀释剂,25 ml
•HRP共轭物,11 ml
•20倍洗涤液,50毫升
•TMB溶液,11毫升
•停止溶液,11毫升

所需但未提供的材料
•移液器和吸管头
•蒸馏水或去离子水
•聚丙烯或玻璃管
•涡流搅拌机
•吸水纸或纸巾
•培养皿/摇床
•板垫圈
•能够测量450 nm吸光度的读板器。
•曲线拟合软件
洗涤液准备
洗涤液作为20倍的储备提供。使用前,用950毫升蒸馏水稀释瓶子(50毫升)的内容物。
或去离子水。
校准器准备
1。按照小瓶标签上的详细说明,用去离子水或蒸馏水重新配制冻干的CTNI储备。轻轻搅拌直到溶解的
2。将7根聚丙烯管标记为10、5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 ng/ml。
三。在标记为10 ng/ml的试管中,移液管446.1微升校准稀释液。然后加入53.9μl的原料,轻轻搅拌。这个
提供10 ng/ml校准仪。
4。用移液管将250微升校准稀释液移入标有5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 ng/ml的试管中。
5。通过将250μl的10 ng/ml校准器与250μl的稀释剂在管中稀释和混合,制备5 ng/ml校准器。
标记为5 ng/ml。同样,通过两倍串联稀释准备剩余的校准仪。
重组后的CTNI储备应在使用后立即冷冻。冷冻时保持稳定或至少1
-20°C时为一个月,-70°C时为6个月。使用后丢弃工作校准仪。
样品采集与制备
血浆(EDTA、柠檬酸盐或肝素)应在血液采集后尽快制备,并在4°C下保存。
应同样处理样品(即所有样品的储存时间和温度应相同)。中频等离子体
样品不能在采集后4小时内进行分析,应在-70°C下冷冻,使用前仅解冻一次。
我们建议对样品进行一式两份的分析。分析前,血浆样品应稀释四倍
血浆稀释剂。这可以很容易地通过将100μl的每个血浆样品与300μl的血浆稀释剂混合
聚丙烯微型离心管。
一般说明
1。所有试剂在使用前应达到室温。
2。解冻后,校准器稀释剂中可能会出现沉淀物。应通过离心法去除沉淀物。
在台式离心机中以约3000转/分的转速运行5分钟。使用干净的上清液。
三。在*理解
指导并遵守良好的实验室惯例。
4。清洗程序至关重要。洗涤不足将导致精度差和吸光度读数错误升高。
5。实验室温度会影响吸光度读数。我们的酶联免疫吸附测定试剂盒是用设置在
150转/分和25°C。在较低温度下进行分析会导致吸光度值较低。

测定程序
1。将所需数量的8孔条固定在支架中。未使用的板条应存放在重新密封的袋子中
4°C的干燥剂,以备将来使用。
2。在每个孔中添加100μl的HRP共轭物。
三。向井中注入100微升校准仪和稀释样品(我们建议校准仪和样品试运行
复制品)。
4。在150转/分和25°C的摇板机上培养1小时。
5。使用平板垫圈(400μl/孔)排空并用1X洗涤液清洗5个微量滴度孔。
6。在吸水纸或纸巾上用力敲打油井,清除所有残留的液滴。
7。向每个孔中分配100μl TMB。
8。在150转/分和25°C的轨道式微型平板振动筛上培养20分钟。
9。20分钟后,通过向每个孔中添加100μl的停止溶液来停止反应。
10。轻轻混合。务必确保所有蓝色变为黄色。
11。在5分钟内用平板阅读器读取450纳米的吸光度。
计算结果
1。使用曲线拟合软件,通过绘制校准器的吸光度值与对数10的关系来构建校准曲线。
浓度。
2。将校准曲线拟合为四参数逻辑回归(4pl)方程(x轴=log10浓度),并确定
样品的浓度(导出反对数)。
三。将导出浓度乘以稀释系数,以确定原始样品中的实际浓度。
4。如果A450值超出校准曲线,应适当稀释样品并重新测试。如果进一步稀释
需要时,新鲜解冻的血浆样品应先用三体积的血浆稀释剂(4倍稀释)稀释。这个
然后用校准器稀释剂稀释所得混合物。
典型校准曲线
典型的校准曲线如下所示。这只是为了说明。必须为每个实验生成校准曲线。

存储
将冻干后的原料储存在-20°C或以下。试剂盒的剩余部分应储存在4°C,微量滴定板应
放在装有干燥剂的密封袋中。自购买之日起,套件将保持稳定6个月。

 

 

k-assay KT-7519说明书

k-assay KT-7519说明书

Human Apoptosis InducingFactor (AIF) ELISA

诱导人凋亡
因子(AIF)ELISA
用于定量测定血清、血浆中的人类AIF,
组织匀浆和其他生物液体
货号:KT-7519

预期用途
该试剂盒是一种夹心酶免疫分析法,用于体外定量测定人体AIF
血清、血浆、组织匀浆和其他生物液体。仅供研究使用。不适用于
诊断程序。

需要但未提供的材料
1.带450±10 nm滤光片的微孔板阅读器。
2.单通道或多通道移液管,具有高精度和一次性j端。
3.微量离心管。
4.去离子水或蒸馏水。
5.用于吸干微孔板的吸水纸。
6.洗涤液容器。
7.0.01 mol/L(或1×)磷酸盐缓冲盐水(PBS),pH值7.0-7.2。
存储
所有试剂应按照瓶上的标签保存。校准器、检测试剂A、,
检测试剂B和96孔条形板在接收时应储存在-20°C下,而其他试剂则应储存在-20°C下
温度应为4°C。未使用的板条应保存在密封袋中,并向其提供干燥剂
尽量减少暴露在潮湿空气中。打开的测试套件将在1个月内保持稳定,前提是将其储存为
如上所述。

测试原理
本试剂盒中提供的微孔板已预涂有AIF特异性抗体。校准器
然后,将样品添加到适当的微孔板孔中,并加入一种特定于
AIF。接下来,将结合辣根过氧化物酶(HRP)的抗生物素蛋白添加到每个微孔板中,并
孵化。加入TMB底物溶液后,只有那些含有AIF、生物素结合抗体和酶结合亲和素的孔才会出现颜色变化。酶底物反应为
通过添加硫酸溶液终止,并测量颜色变化
在450 nm±10 nm的波长下进行分光光度测定。样品中的AIF浓度为
然后通过将样品的外径与校准曲线进行比较来确定。

样本收集和储存
血清
使用血清分离管,让样本在室温下凝结两小时,或在室温下凝结过夜
在大约1000 x g的条件下离心20分钟前,温度为4℃。测定新鲜制备的血清
立即或在-20°C或-80°C下等分储存样品,以备日后使用。避免反复冻融
周期。
等离子体
使用EDTA或肝素作为抗凝剂收集血浆。在1000 x的温度下离心样品15分钟
g在收集后30分钟内,在4°C下。立即清除血浆并进行分析,或将样品储存在
在-20°C或-80°C下等分供日后使用。避免重复冻融循环。
组织匀浆
组织匀浆的制备取决于组织类型。
1.在冰冷的PBS中冲洗组织,*清除多余的血液,并称重
均质化。
2.将组织切碎成小块,并在新鲜的溶解缓冲液(不同的溶解缓冲液)中均质
需要根据目标蛋白质的亚细胞位置进行选择(w:v=1:20-1:50,例如1毫升裂解
使用冰上玻璃均质器(微型组织研磨机)将缓冲液添加到20-50 mg组织样品中
也很有效)。
3.使用超声波细胞破碎机对所得悬浮液进行超声波处理,直到溶液澄清。
4.然后,匀浆在10000×g下离心5分钟。收集上清液并
立即测定或等分并储存在≤-20摄氏度。
其他生物液体
以1000 x g离心样品20分钟。收集上清液并立即进行分析或储存
在-20°C或-80°C下等分取样,以备日后使用。避免重复冻融循环。
注:
1.5天内使用的样品可储存在4°C下,否则样品必须储存在-20°C下
(≤1个月)或-80°C(≤2个月)以避免生物活性丧失和污染。
2.样本溶血会影响结果,因此不应使用溶血样本。
3.进行分析时,将样品置于室温。
4.根据我们的检测结果,强烈建议使用血清而不是血浆进行检测
内部数据

试剂制备
使用前,将所有套件组件和样品置于室温(18-25℃)。如果不使用该套件
一次完成后,请只取出当前实验的试纸和试剂,剩下的留着
所需条件下的试纸条和试剂。
校准器
用1.0 mL校准液稀释校准液,在室温下保存10分钟,
轻轻摇动(不要起泡)。储备溶液中校准器的浓度为4000 pg/mL。
请先将储备液稀释至1000pg/mL,稀释后的校准液为最高值
校准器(1000 pg/mL)。然后准备7根含有0.5 mL校准液稀释液的试管,并使用稀释液
根据下图所示,校准器产生双稀释系列。混合每根管子
在下一次转移前*检查。设置7点稀释校准器,如1000pg/mL、500pg/mL、,
250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.2 pg/mL、15.6 pg/mL,以及最后一支带有校准器的EP管
稀释剂为空白,为0 pg/ml。

氯吡苯脲(KT-30,cppu)99%

产品型号

品       牌

产品简介

本公司各种实验室生化试剂大量备现货,欢迎广大新老客户订购

详情介绍

生根粉 Rooting Powde(850倍稀湿) BBL
N6-苯甲酰基酰嘌呤 N6-Benzoyladenine BBL
氯吡苯脲(KT-30,cppu)  99% BBL
2-4-表油菜素内酯 2,4-Epibrassinolide BBL
除草剂 USA
苦味酸Picric acid 别名:2,4,6-三硝基* USA
Colchicine* SigmaC9754
Colchicine* Amresco
Colchicine* Amresco
Colchicine* Amresco
CTAB (溴代十六烷基*胺) Sigma
CTAB (溴代十六烷基*胺) Amresco
CTAB (溴代十六烷基*胺) Amresco
2.4-D (2,4-二氯苯氧乙酸) SigmaD7299
2.4-D (2,4-二氯苯氧乙酸) SigmaD7299
胆酸钠    SigmaC1254
脱氧胆酸 Deoxycholic acid SigmaD-2510
脱氧胆酸钠 FlukaD2510
脱氧胆酸钠 FlukaD2510
脱氧胆酸钠 FlukaD2510
DEPC(焦碳酸二乙脂) SigmaD5758
DEPC((焦碳酸二乙脂) AmrescoE174
DEPC((焦碳酸二乙脂) AmrescoE174
DEPC((焦碳酸二乙脂) AmrescoE174
2,6-二氯靛酚钠(DCIP;DPIP) SigmaD1878
* Amresco
二氯二甲基硅烷 Fluka 40140分装
四乙氧基硅烷 Tetraethyl orthosilicate  BBL
* Natrii Salicylas  USA
5-磺基水杨酸 5-Sulfosalicylic Acid Amresco0610
组胺 sigmaH 7125
组胺双盐酸盐 USA
三碘季铵酚 USA
(DMF)N,N-二甲基甲酰胺 Amresco
(DMF)N,N-二甲基甲酰胺 Amresco
DMSO(二甲基亚砜) SigmaD8779
DMSO(二甲基亚砜) Amresco
DMSO(二甲基亚砜) Amresco
EDTA 乙二胺四乙酸 Amresco
EDTA 乙二胺四乙酸 Amresco
EDTA Na2 (乙二胺四乙酸二钠) Amresco
EDTA Na2 (乙二胺四乙酸二钠) Amresco
EDTA Na4 (乙二胺四乙酸四钠) Amresco
EDTA Na4 (乙二胺四乙酸四钠) Amresco
EDTA FeNa2 (乙二胺四乙酸铁钠盐) Amresco
EDTA 2K (乙二胺四乙酸二钾盐) USA
EGTA (乙二醇-双-(2-氨基乙基)四乙酸 Amresco
EGTA (乙二醇-双-(2-氨基乙基)四乙酸 Amresco
N-乙基顺丁烯二酰亚胺(NEMI) N-Ethylmaleimide BBL
BAEE (N-Benzoyl-DL-arginine ethyl ester hydrochloride) BBL
BAPNA(Na-苯甲酰-DL-*-对硝基酰胺盐酸盐) USA
BTEE (N-苯甲酰-L-酪氨酰乙酯) BBL

kamiyabiomedical KT-12247说明书

kamiyabiomedical KT-12247说明书

Rat Creatine Kinase MB Isoenzyme (CKMB) ELISA

大鼠肌酸激酶同工酶(CKMB)ELISA
货号:KT-12247

预期用途
该试剂盒是一种用于大鼠CKMB体外定量测定的夹心酶免疫分析方法
血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体。为了
仅供研究使用。

COMPONENTS

Reagents Quantity

Pre-coated, ready to use 96-well strip plate 1

Calibrator 2

Calibrator Diluent 1 × 20 mL

Detection Reagent A 1 × 120 μL

Detection Reagent B 1 × 120 μL

Assay Diluent A 1 × 12 mL

Assay Diluent B 1 × 12 mL

TMB Substrate 1 × 9 mL

Stop Solution 1 × 6 mL

Wash Buffer (30X concentrate) 1 × 20 mL

Plate sealer for 96 wells 4

需要但未提供的材料
一。带450±10纳米滤光片的微孔板阅读器。
2。单通道或多通道移液管,具有高精度和一次性。
3。微离心管。
4。去离子水或蒸馏水。
5。吸墨纸吸墨纸吸墨纸。
6。洗涤液容器。
7。0.01 mol/L(或1x)磷酸盐缓冲盐(PBS),pH值7.0-7.2。

储存
所有试剂应按小瓶上的标签保存。校准器,检测试剂A,
检测试剂B和96孔板条板在收到后应存放在-20℃下,其他试剂应存放在-20℃下
应为4°C。未使用的板条应保存在密封袋中,并提供干燥剂
尽量减少暴露在潮湿空气中。打开的测试包将保持稳定1个月,前提是它存储为
如上所述。

试验原理
本试剂盒中提供的微孔板已预涂有CKMB特异性抗体。然后将校准品或样品添加到适当的微孔板上,微孔板上有一种针对CKMB的生物素结合抗体。接着,将亲和素与辣根过氧化物酶(HRP)结合后,加入到每个微孔板中并孵育。加入TMB底物溶液后,只有含有CKMB、生物素结合抗体和酶结合亲和素的微孔才会出现颜色变化。加入硫酸溶液终止酶-底物反应,并测量颜色变化
在450 nm±10 nm波长下进行分光光度测定。然后通过比较样品的外径和校准曲线来确定样品中CKMB的浓度。
样品收集和储存
血清
使用血清分离管,使样品在室温下凝结2小时,或在4℃下凝结过夜,然后在约1000×g的条件下离心20分钟。立即对新制备的血清进行分析,或在-20℃或-80℃下将样品分批储存,以备日后使用。避免反复冻融
循环。

等离子体
用EDTA或肝素作为抗凝剂收集血浆。在收集后30分钟内,将样品在1000 x g、4°C下离心15分钟。立即取出血浆并进行分析,或在-20°C或-80°C下将样品分批储存,以备日后使用。避免重复冻融循环。
组织匀浆
组织匀浆的制备取决于组织类型。
一。组织在冰冻PBS中冲洗以*去除多余的血液,并在均质前称重。
2。将组织切成小块,在新鲜的裂解缓冲液(根据目标蛋白的亚细胞位置需要选择不同的裂解缓冲液)(w:v=1:20-1:50,例如在20-50毫克的组织样品中加入1毫升裂解缓冲液)中用玻璃均质机在冰上均质(微型组织研磨机也可以)。
三。所得悬浮液用超声波细胞破胶剂进行超声处理,直到溶液澄清。
四。然后,将匀浆在10000×g下离心5分钟,收集上清液,立即或等分测定,并在≤-20℃下保存。
细胞裂解物在按照以下说明进行分析之前,需要对细胞进行裂解。
一。贴壁细胞用冷PBS轻轻洗涤,用胰蛋白酶分离,1000×g离心5分钟(悬浮细胞可直接离心收集)。
2。在冷PBS中清洗细胞三次。
三。在浓度为107个/mL的新鲜溶解缓冲液中重新培养细胞,如有必要,可对细胞进行超声波处理,直至溶液澄清。
四。在1500 x g下,在4°C下离心10分钟,以去除细胞碎片。立即测定或等分,并储存在≤-20°C下。
细胞培养上清液和其他生物液体
在1000 x g下离心样品20分钟。收集上清液并立即进行分析,或在-20°C或-80°C下分批储存样品以备日后使用。避免重复冻融循环。