Cygnus technologies, Inc.是美国一家专门从事生物工程和制药过程中残留物检测的一系列产品。生物制品生产过程中存在许多影响产品质量的残留物，诸如特殊重组表达系统中宿主细胞蛋白（ Host Cell protein, HCP ）的残留以及生物制品加工过程中培养物残留的污染物。公司提供了广泛而灵敏度*的一系列用于检测生物工程残留物的产品，

        Cygnus公司检测产品覆盖了常用于基因工程的培养细胞以及一些用于细胞培养的添加物。CHO细胞即中国仓鼠卵巢细胞（Chinese hamster ovary），该细胞具有不死性，可以传代百代以上，是目前生物工程上广泛培养的细胞。*批准正式应用于人类疾病治疗或疾病预防的基因工程产品约有三十多种，其中只有一种（乙肝疫苗）是由酵母菌生产的，其余所有产品都是由CHO细胞和大肠杆菌生产的，大肠杆菌不能形成有活性的二聚体（如白介素2），也不具有糖基化的功能（如EPO），而CHO却具有如上的功能，因此CHO成为表达复杂生物大分子的理想宿主。另外CH0细胞在基因工程使用中还有一个优点，该细胞属于成纤维细胞（fibroblast），是一种非分泌型细胞，它本身很少分泌CHO内源蛋白，因而检测起来很困难。

上海金畔现货Cygnus F300说明书

MRC5 HCP ELISA Kit (F300)

描述

MRC5（人类胎儿肺成纤维细胞）细胞系是生产疫苗的经济有效的方法，可支持多种病毒的生长。我们的检测资格确定该试剂盒的LOD为〜1.8 ng / ml。

产品信息

产品类别：

ELISA试剂盒

存储：

所有试剂盒试剂2°C至8°C

目标表达系统：

MRC5

物种组：

哺乳动物

种类：

人的

预期用途

本试剂盒用于测定MRC5细胞重组表达产物中MRC5宿主细胞蛋白杂质的存在。

该工具包仅用于研究和制造，不用于人类或动物的诊断用途。

总结与说明

在mrc5细胞系中进行重组蛋白表达或病毒复制是生产疫苗或其他治疗性蛋白的一种经济有效的方法。

这些产品中的许多是作为治疗剂用于人和动物，因此必须高度纯化。制造业和

这些产品的纯化过程使得MRC5中的宿主细胞蛋白（HCP）有可能产生杂质。这些杂质会降低治疗剂的疗效，并导致不良的毒性或免疫反应。因此，将hcp杂质降低到低水平是可取的。通常采用western blot和elisa等抗hcp抗体的实用免疫学方法。虽然western blot是一种有助于鉴别hcps的有效方法，但它有许多局限性。western blot是一个复杂的、依赖于技术的过程，需要主观的

结果解释。此外，它本质上是一种定性方法，不适合于获得定量答案。western blot的灵敏度受到可检测样品体积和高浓度预期产品干扰的严重限制。虽然western blot可以在纯化过程中检测到上游样品中的hcps，但它往往缺乏足够的敏感性和特异性来检测纯化下游和终产品中的hcps。本试剂盒采用微量平板免疫酶联免疫吸附试验（elisa）方法，克服了western blots检测灵敏度高达100倍的局限性，操作简便，灵敏度高，客观。半定量elisa是一种有助于纯化工艺优化、工艺控制、常规质量控制和产品释放度检测的有效方法。该试剂盒是“通用”的，其目的是与所有可能污染产品的六氯环己烷反应，而不受净化过程。抗体已经产生并具有亲和力 用温和的MRC5细胞裂解液纯化，得到HCP，通常在初始产品回收步骤中遇到。western blot作为一种初步的方法，证实抗体对page分离得到的大多数hcp条带有反应。如果你需要一种更敏感和更具体的方法来证明你的样品中的单个HCP的反应性，如果你需要一种更敏感的方法来证明你的过程中HCP的覆盖率，Cygnus Technologies推荐一种优于Western Blot的方法，称为抗体亲和提取（aae）。aae-is对western blot的敏感性和特异性大大提高，使其成为elisa中抗体表现的更好的预测因子。