ELISA试剂盒在实验室已 经相当普及，绝大多数ELISA试剂盒都是用于检测未知样本中抗原的浓度。用试剂盒当然比自己慢慢摸条件快得多，ELISA试剂盒不仅可以让实验更便利， 往往还更加。现在市面上的ELISA试剂盒既有国产也有进口，数量繁多令人目不暇接，怎样才能选出zui适用的产品呢？首先当然得根据我们所要检测的分子 进行检测，除此以外也还有一些需要加以考量的因素，本文就来为您介绍一二。

1. 实验类型

ELISA试剂盒有多种类型，不过它们都有一个共同特点，就是进行抗原捕获。一般捕获形 式包括将抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗体进行捕获。In-cell ELISA和酶联免疫斑点ELISPOT是两种特殊的类型，In-cell ELISA需要将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化，然后再用抗体原位检测。ELISPOT有点像蛋白印迹Western blot，先在带膜的微孔板中培养细胞，然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。此外，我们还需要根据自身需要选择96孔板或是384孔板进行ELISA 实验。

通常人们使用双抗夹心法进行ELISA实验，双抗夹心法中抗原被夹在捕获抗体和检测抗体 之间，这种方法既灵敏又有效，受到了许多研究者的青睐。不过有时候双抗夹心法并不是*选择，例如有时候抗原特别小让两个大抗体难以附着，又或者抗体只有 一个抗体结合位点。在上述情况下，竞争性ELISA就更为适用，这种方法是采用带标记的纯化抗原与样本中无标记的抗原进行竞争，以结合捕获抗体。

2. 抗体类型

单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA，实际上有时候二者结合效果更好。例如，对于双抗夹心法而言，用多抗进行捕获而单抗进行检测有时更有帮助。多抗能够确保捕获所有抗原，随后单抗再特异性检测拥有特定抗原表位的抗原。

双抗夹心法ELISA中捕获抗体与检测抗体（不论多抗还是单抗）的配对很有讲究。我们不希望捕获抗体与检测抗体竞争抗原上的同一位点，为此我们就需要确 保捕获抗体和检测抗体所识别的抗原表位不存在重叠。如果捕获抗体和检测抗体之间发生了冲突，就会对实验结果产生较大影响。要避免这一问题，我们可以选择购 买“matched pair”的捕获/检测抗体对，这些打包在一起的抗体是商家经过验证才推荐的好组合。

3. 交叉反应

如果抗体间发生冲突或交叉反应就会影响整个实验的特异性。其中抗体来源所带来的兼容性就 是交叉反应的一个因素。尽管现在购买源自动物的抗体越来越容易，我们仍有必要确认一下是否会产生交叉反应的问题。在用双抗夹心法进行ELISA检测 时，检测用的二抗必须特异性针对检测一抗，而不能与捕获抗体起反应。如果检测用二抗与捕获抗体结合，实验特异性就会大打折扣。通常我们选用源自不同宿主的 捕获抗体和检测一抗，来避免上述问题。

与此同时，了解试剂盒中提供的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），以免这些buffer含有可能影响抗原抗体相互作用的组分，使检测结果收到影响。

4. 检测方式

如今检测ELISA有许多途径，我们可以根据自己的偏好进行选择。一般ELISA检测的 是酶促反应的可溶性产物，抗体上结合有相应的酶（例如通常使用的辣根过氧化物酶HRP），而反应体系中添加有相应的底物（如3，3-二氨基联苯胺 DAB）。这种酶促反应生成具有特征性的颜色，可以通过分光光度计进行检测，碱性磷酸酶AP也是一种常用酶。酶可以结合在一抗上，也可以结合在二抗上，还 可以使用链霉亲和素标记的酶与亲和素标记的一抗结合。此外ELISA的结果检测还包括放射性检测、荧光检测、化学发光或显色法检测等。

上述四点展开来讲都足以大做文章，因此如果您对考虑购买的ELISA试剂盒还有任何疑问，都可以直接向商家咨询。各大商家的上也有相应的技术资料提供，您可以从中获取有价值的产品信息。

EUROIMMUN microplate ELISA

EUROIMMUN微孔板ELISA

测试原理

• 涂有纯化，生化特性已鉴定的抗原的聚苯乙烯微孔板条用作包含结合抗原的固相。
• 如果样品呈阳性，则稀释的血清样品中的特异性抗体会附着在与固相偶联的抗原上。
• 第二步，用过氧化物酶标记的抗人抗体检测附着的抗体。
• 第三步，使用能够促进显色反应的色原/底物溶液使结合的抗体可见。产生的颜色强度与血清样品中抗体的浓度成正比。
• 单特异性ELISA（具有单个抗原的酶免疫测定）为检测抗体提供了定量的体外测定。“ Profile ELISA”提供了一种半定量体外测定法，用于检测单个微孔板条上的不同抗体。
• “ Pool ELISA”的固相涂有抗原混合物，用于半定量检测抗体，其特异性必须随后通过单特异性测定进行研究。

可靠，经济的校准/评估

• 在定量ELISA的情况下，通常使用三个校准血清进行校准。

-校准血清1：测量范围的上限
-校准血清2：正常范围的上限（临界值）
-校准血清3：阴性

• 无需孵育空白值或重复测定。
• 仅使用一个校准器即可进行半定量ELISA。在某些ELISA中可找到扩展的校准曲线，用于免疫测定或CSF诊断。
• 以相对单位（RU / ml）进行校准，如果存在参考血清，则以单位（IU / ml）进行校准。
• 可以选择使用测试套件中包含的阳性或阴性对照血清来执行每个测试。提供了每种校准物和对照血清的试剂盒特定参考范围。
• 使用常规ELISA软件可以轻松执行所有校准方法。

简单，快速，经济的处理

• 含有断裂孔的微孔板条（Profile ELISA除外）。
• 为避免混淆，微孔板条或试剂孔上印有抗原缩写。
• 准备使用的试剂（洗涤缓冲液：浓缩液）。
• 颜色编码可以清楚地识别试剂。

– 暗红色：校准血清1 
– 红色：校准血清2 
– 淡红色：校准血清3 
– 深蓝色：阳性对照血清
– 绿色：阴性对照血清
-样品缓冲液和抗人Ig POD缀合物：不同的颜色

• 传染性血清学ELISA（检测IgM类抗体）的样品缓冲液已经包含IgG / RF吸收剂。
• 与所有商用洗衣机和阅读器系统兼容。

低抗体抗体的测定

• 通过研究抗体的亲和力已经建立了新鲜感染的血清学诊断的替代原理。
• 感染后免疫系统的一个反应是低抗体的形成。随着感染的进行，越来越多的抗原适应性IgG形成，并且亲和力增加。只要尚未在血清中检测到高亲和力的IgG，就可以认为感染仍处于早期阶段。
• 为了鉴定患者血清中的低抗体抗体，平行进行了两次酶标板ELISA：一项以常规方式进行测试，另一项包括在患者血清与过氧化物酶标记的抗人IgG孵育之间进行尿素处理，结果低抗原性抗体与抗原的分离。
• 如果通过尿素处理显着降低ELISA的灭绝率，则存在低抗体抗体。为了客观地解释，可以在有和没有尿素孵育的情况下，从测量值中计算出相对亲和力指数（RAI）。
• 血清稀释度1：100，共轭类抗人IgG，POD标记。
• 3点校准，定量（IgG）。
• 可以使用以下检测试剂盒来确定亲和力：弓形虫，CMV，麻疹病毒，风疹病毒，VZV，TBE病毒，EBV-CA。

脑脊液中的抗体测定

• 适应症：大脑局部感染。
• CSF稀释度1：2，血清稀释度1：404。缀合类别抗人IgG或IgM，POD标记。
• 易于操作：即用型试剂。
• 4点校准，定量。相同的孵育条件和时间（室温； 60分钟/ 60分钟/ 15分钟）：用于CSF诊断的所有EUROIMMUN ELISA可以毫无困难地组合在一块相同的微孔板上。
• 在一块相同的微孔板上平行于CSF中的抗体浓度确定患者血清中的抗体浓度。CSF /血清商CSQ _路径。从两个测量值计算得出。
• 如果特异性抗体CSQ _路径的CSF /血清商数存在，则存在鞘内特异性抗体的合成_。显着高于整个IgG的CSF /血清商（CSQ _total）或CSQ _lim（如有必要）_。。这两个值的关系表示相对CSF /血清商CSQ _rel。（同义词：抗体特异性指数，ASI）。
• 结果解释（根据Reiber教授的建议）：
• CSQ _rel。<0.6：结果不可靠，请检查
  CSQ _rel是否存在错误_。0.6-1.3：标准范围
• CSQ _rel。1.3-1.5：边界范围
  CSQ _相对。> 1.5：指示中枢神经系统中病原体特异性抗体的产生
• 用于CSQ _rel的自动计算_。EUROIMMUN免费提供特定的Excel表。
• 高的灵敏度，特异性和可重复性。血清和脑脊液中的抗体浓度可以在整个线性测量范围内确定。
• 提供以下用于CSF诊断的测试试剂盒：伯氏疏螺旋体，弓形虫，HSV-1，HSV-2，HSV-1 / 2池，CMV，风疹病毒，麻疹病毒，腮腺炎病毒，VZV，TBE，EBV-CA。
• 所有用于CSF诊断的测试系统也只能用于血清学。
• *适合于孵化设备中的自动孵化。
•  

孵化

微孔板ELISA孵育

移液器：
每孔100 µl

孵育：
30分钟

移液器：
每孔100 µl

孵育：
30分钟

移液器：
每孔100 µl

孵育：
15分钟

移液器：
每孔100 µl

评估：

波长为450 nm的光度测量

另请参阅自动化选项。

执行测试时，将使用当前有效的测试指令。