CordenPharma脂质体产品简介

CordenPharma 的垂直整合供应链模型提供跨越完整 cGMP 供应链的开发和制造专业知识 > 从受监管的原材料到中间体、API、商业规模的药物产品制造、成品剂型、包装、临床试验服务和制药物流 > 结果减少开发和制造时间和成本。

CordenPharma脂质体产品简介

脂质体:定义和结构

脂质体是同心自组装脂质双层的球形囊泡。脂质体可作为车辆管理的药品或营养成分。脂质体通常由生物相容性和可生物降解的脂质赋形剂组成,例如鞘磷脂、磷脂酰胆碱、甘油磷脂和胆固醇,但也可能包括其他脂质赋形剂,只要它们与脂质双层结构相容。胆固醇,另一种药物添加剂,可以增加脂质体的稳定性并防止双层泄漏,因为它的羟基可以与磷脂双层的极性头相互作用。

根据脂质双层的结构和囊泡的大小,脂质体通常分为大单层囊泡(LUV)、小单层囊泡(SUV)、多层囊泡(MLV)和多囊泡(MVV)。

用于药物递送的脂质体

自 1964 年 Bangham 和 Horne 发现脂质体以来,磷脂在制药和生物技术行业中用作关键赋形剂/药物添加剂或活性药物成分 (API) 是一个不断扩大的领域。脂质体作为药物递送载体的潜力已经通过多种给药途径进行了广泛的探索,例如肠胃外、口服、肺、鼻、眼和经皮。1974 年,两性霉素 B 的一种制剂AmBisome ®成为第一个获得许可的注射脂质体产品。

磷脂由一种或多种脂肪酸(氢和碳分子的长链)组成,它们与甘油“头部”相连。

由于其药物活性增强功能,磷脂作为 API 或高度受控的药物关键赋形剂受到严格的质量规范监管。磷脂分子,尤其是磷脂酰胆碱 (PC),已被充分证明具有药物优势,包括增加溶解度、防止降解、延长循环时间和被动/主动靶向递送。

然而,原始的肠胃外脂质体有一个严重的缺点:它们总是很快从血液中清除并最终进入网状内皮系统(RES,例如肝、脾和肺)的器官和组织中。通过血浆调理作用和随后的循环隔离发生清除。通过聚乙二醇化,一种用长链聚乙二醇 (PEG) 包被的过程,脂质体被一层亲水性包衣所掩盖,以逃避 RES 的清除,并在体内实现长期循环。Doxil ®是一种聚乙二醇化脂质体多柔比星产品,其成功上市代表了肠胃外脂质体开发的一个里程碑。

衍生磷脂产品

脂质目录

CordenPharma 的专业脂质制造商已经掌握了从数克到数千克规模的复杂磷脂衍生物的化学全合成,并以其合同脂质和磷脂分子制造专业知识而闻名。我们的大规模专有 cGMP 制造工艺从 (S)-1,2-异亚丙基甘油 ((S)-IPG) 开始,并扩展到一系列优化和*可扩展的转化,从而产生广泛的磷脂示例,例如,但不限于:

 

衍生磷脂制造

  • >>高效、优质的辅料

  • >>遵守国际药用辅料委员会 (IPEC) 的最新指南

  • >> cGMP认证的优质脂质体辅料添加剂供应商

  • >>助力靶向递送药物研发

  • >>强调质量源于设计 (QbD) 和过程分析技术 (PAT) 以控制原材料和降低净成本

  • >>符合药典标准:USP、BP、EU 和 IP(建立专论的地方)

  • >>符合 GMP API 要求(Eudralex Vol 4, part II)

  • >>牛海绵状脑病 (BSE) 和传染性海绵状脑病 (TSE) 免费认证

  • >>完善的规格表、质量控制和测试程序

  • >>具有批次间一致性的功能

包裹在脂质纳米颗粒 (LNP) 中的 mRNA

MPEG 共轭脂质制造商

CordenPharma 还开创了 MPEG 结合磷脂的化学和大规模制造,可通过相同的合成级联进行访问,使其成为敏感脂质体配方过程中优质磷脂的例子。

 


脂质


CAS号


结构


二甲基甲酰胺
MPEG-2000-DMPE 384835-59-0
MPEG-750-DSPE 147867-65-0
MPEG-2000-DSPE 147867-65-0
MPEG-5000-DSPE 147867-65-0
MPEG-2000-DPPE 205494-72-0

此外,DODMA 和 DOTAP 等标准阳离子磷脂可提供 cGMP 和研发级质量。

可电离脂质和脂质纳米颗粒:像 C12-200 这样的倡议允许降低剂量

已经付出了巨大的努力来发现和开发可以引导小干扰 siRNA 通过保护靶细胞内部的许多屏障的载体。需要提高递送效率才能发挥 RNA 干扰疗法的*泛潜力。通过组合合成和筛选不同类别的材料,确定了一种配方,可以在低于 0.01 mg∕kg 的剂量下在小鼠中实现 siRNA 指导的肝脏基因沉默。这种配方的潜力在非人类灵长类动物中得到了进一步验证,在低至 0.03 mg∕kg 的剂量下观察到临床相关基因转甲状腺素蛋白的高水平敲低。

对不同尾部和胺基团的筛选进行了评估,报告了有趣的结构活性结果。关于尾长,大多数表现结构都拥有由 14 个碳组成的尾长。此外,没有长度小于 12 个碳的尾部化合物介导的沉默大于 30%。

关于胺头基,叔胺存在于表现最佳的化合物中。使用前 3 种脂质,将 siRNA 体内递送至小鼠的肝细胞并获得剂量依赖性基因沉默。与 LNP01 相比,特别是一种化合物 C12-200 表现出超过两个数量级的效力。

我们为C12‑200开发了一种制造工艺,现在可供寻求在 LNP 和 IP 游离脂质载体方面取得突破的潜在客户进行评估。C12‑200 具有高纯度和足够稳健的工艺,可用于 GMP 活动。

有多种适合研究和发现的现成衍生磷脂可供选择,有方便的 1 g 和 10 g 包装(请参阅我们的脂质列表了解更多详情)。

CordenPharma 具有额外的能力,可以沿着价值链提供复杂碳水化合物的开发和制造,范围从临床活动到工艺开发、放大和 GMP 制造,适用于广泛的应用。

脂质除去用电泳槽使脑部透明化 Electrophoresis Chamber For Lipid Extraction

脂质除去用电泳槽使脑部透明化
Electrophoresis Chamber For Lipid Extraction

  • 产品特性
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  • Q&A
  • 参考文献

脂质除去用电泳槽使脑部透明化脂质除去用电泳槽使脑部透明化                              Electrophoresis Chamber For Lipid Extraction

Electrophoresis Chamber For Lipid Extraction

          新型电泳槽使脑部透明化!!NA-1880 型电泳槽,可用于去除脂质

2013 年4 月11 日的自然杂志(Nature)电子版里介绍了组织透明化技术 CLARITY 法电泳去除脂质的方法,斯坦福大学的 Karl Deisseroth 教授等因此受到关注。这个方法的步骤是,向样品灌注并使其结合丙烯酰胺后,37℃电压 10 V~40 V 通电3小时引发聚合, 40℃ 10 V–60 V 电压电泳2天,循环含4%SDS 的硼酸盐缓冲液,去除脂质,使样品透明化。透明化的样品可用于后续的免疫染色分析。



脂质除去用电泳槽使脑部透明化                              Electrophoresis Chamber For Lipid Extraction

Nature 论文中的电泳装置:

样品使用 18 mm 的小鼠脑,电泳槽是电极间距 20 mm,高度20mm,内部直径为 40 mm 的圆筒状密闭循环型装置。为了安全,电泳槽上部还连接了硅胶密封的螺纹出口。

外连装置:

缓冲液循环泵(推荐使用 100 mL/min 以上的型号),能用于高电流的电泳电源(3860 型、3870 型等)、保温范围在 37~50℃的恒温水槽、加热器和 5 L 缓冲液槽。

脂质除去用电泳槽使脑部透明化                              Electrophoresis Chamber For Lipid Extraction

规格:

主要材料:亚克力;

电极部分:铂金线、引线;

内置下槽(接续部分防水处理),附接续循环软管、滚动夹1个、异型软管接头2个

尺寸:70 mm x 70 mm x 90 mm;

重量:0.2 kg;

槽内部直径 40 mm 电极间距 20 mm;

耐热温度 65℃ * 铂金线直径 0.3 mm;

规格、尺寸等有可能变更。如有需要可订做电泳置,也可咨询直径 0.5 mm 型铂金线。

组织透明化辅助试剂

VA-044(聚合物引发剂)

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
631-26271 Electrophoresis Chamber For Lipid Extraction
脂质除去用电泳槽
1 台 免疫化学用

ozbiosciences转染试剂

ozbiosciences转染试剂

ozbiosciences染试剂: 

磁转/脂质转染/ Polyfection

 

磁转染将核酸或其他载体与涂有阳离子分子的可生物降解的磁性纳米粒子相关联此方法非常适合于原始细胞和难以转染的细胞。

-Lipofection,一种基于脂质的转染技术,属于生化方法。脂质转染的主要优点是高效,可在多种细胞类型中转染所有类型的核酸,可重复性和低毒性。 

 Polyfection,基于聚合物的转染技术,新颖的设计和合成Ç ationic ħydroxylatedmphipilic中号ULTI块P olymer(CHAMP优越的转染效率的优化系统中的细胞类型的具有低广谱得益于改进的递送机制,细胞压力增加。

 

Helix-IN转染试剂

新的!

Helix-IN  DNA转染试剂为解决经典转染技术问题开辟了新的可能性。
OZ Biosciences公司革命性Polyfection与螺旋-IN™的新颖的设计Çationic ħ ydroxylatedmphiphilic中号ULTI块P olymer(CHAMP 技术)。这种新型的双功能共聚物具有生物相容性,可离子化,pH响应性和可生物降解性。

减少细胞压力,保留活力并提高效率。

 

主要优点

  • 适用于细胞系和难转染细胞的广谱转染试剂
  • 即使DNA量少,转染效率也高,转基因表达提高
  • 高细胞内蛋白质产量,同时保持活力
  • 高分泌蛋白生产,同时减少细胞压力
  • 可生物降解-避免二次效应
  • 兼容任何培养基

HELIX-IN™翻译试剂

尺寸

  • 100µL:24孔板中多达100-200个测定
  • 500µL:24孔板中多达500-1000个测定
  • 1000 µL: 24孔板中多达1000-2000个测定
 每个试剂盒包含一小瓶Helix-IN试剂+一小瓶HIB Enhancer试剂

 

储存: -20°C

运输条件:室温

 

 

HX10100

100微升

68,00€ 

HX10500

500微升

248,00€ 

HX11000

1毫升

429,00€ 

  • 应用
  • 结果
  • 引文数据库
  • 技术资源

Helix-IN™转染试剂:

  • 用于将DNA传递到许多细胞系的高分子试剂
  • 对于永生的细胞系,优先粘附的细胞有HEK-293,NIH-3T3,CHO,COS,HeLa等。
  • 共转染的理想选择

 

推荐:基因表达水平高的贴壁细胞系转染(见细胞转染数据库和引文数据库

roarbiomedical RB-LCFC说明书

Roar Biomedical成立于1997年,位于纽约市哥伦比亚大学奥杜邦生物医学中心。Roar通过将新技术推向市场以及各种其他研发工作来支持药物发现和临床研究。

 

有价值的新颖技术

Roar开发,制造和销售新颖的基于荧光的方法。此外,Roar与MilliporeSigma联合品牌了许多产品。

脂质转移测定

Roar专长于测量直接参与脂质代谢的酶活性的技术。这些蛋白质在心血管疾病和其他疾病的发展中起着核心作用。Roar已向数家制药公司授予化验许可,并与75多家学术机构签订了非商业许可协议。

支持临床试验

Roar的创新产品包括不受内源脂蛋白浓度影响的血浆胆固醇酯转移蛋白(CETP)活性测定法。我们的CETP和卵磷脂:胆固醇酰基转移酶(LCAT)分析已用于人类临床试验,以监测药物对这些蛋白质的作用。其他研究领域包括呼吸系统疾病。

 

roarbiomedical RB-LCFC说明书

 

测量血浆或血清中的LCAT酰基转移酶活性

Roar LCFC LCAT Activity Assay Kit

 
 
 
货号 RB-LCFC
单元 100次检测
描述 均相荧光测定法可用于通过非酶促手段测量LCAT的酰基转移酶活性。因此,该测定不受碘乙酸盐或其他LCAT抑制剂的影响(Harris WS,Rayford A,LCAT抑制剂干扰胆固醇和甘油三酸酯的酶法测定。Lipids.1990; 25:341-43。)。
 
 

roarbiomedical RB-LCAT说明书

Roar Biomedical成立于1997年,位于纽约市哥伦比亚大学奥杜邦生物医学中心。Roar通过将新技术推向市场以及各种其他研发工作来支持药物发现和临床研究。

Roar开发,制造和销售新颖的基于荧光的方法。Roar与MilliporeSigma联合品牌了许多产品。

脂质转移测定

Roar专长于测量直接参与脂质代谢的酶活性的技术。这些蛋白质在心血管疾病和其他疾病的发展中起着核心作用。Roar已向数家制药公司授予化验许可,并与75多家学术机构签订了非商业许可协议。

支持临床试验

Roar的创新产品包括不受内源脂蛋白浓度影响的血浆胆固醇酯转移蛋白(CETP)活性测定法。我们的CETP和卵磷脂:胆固醇酰基转移酶(LCAT)分析已用于人类临床试验,以监测药物对这些蛋白质的作用。其他研究领域包括呼吸系统疾病。

roarbiomedical RB-LCAT说明书

Roar LCAT Activity Assay Kit

LCAT活性测定试剂盒

测量血浆或血清中的LCAT磷脂酶活性

货号 RB-LCAT
单元 100次检测
描述 均相荧光测定试剂盒,可用于测定血浆或血清中卵磷脂:胆固醇酰基转移酶(LCAT)的磷脂酶活性。

LipiRADICAL Green(检测试剂)/OH-Pen(抑制物质) 脂质过氧化研究的新工具!脂质自由基检测试剂和抑制物质

LipiRADICAL Green(检测试剂)/OH-Pen(抑制物质)
脂质过氧化研究的新工具!脂质自由基检测试剂和抑制物质

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LipiRADICAL Green(检测试剂)/OH-Pen(抑制物质)                              脂质过氧化研究的新工具!脂质自由基检测试剂和抑制物质

LipiRADICAL Green(检测试剂)/OH-Pen(抑制物质)

脂质过氧化研究的新工具!脂质自由基检测试剂和抑制物质

LipiRADICAL Green是特异性荧光检测脂质过氧化反应的上游因子脂质自由基的试剂。可用于活细胞成像、样品中脂质自由基含量的相对定量以及样品中脂质自由基的结构分析和全面鉴定。另外,OH-Pen还可作为脂质自由基特异性中和剂使用。


※ 本产品基于九州大学大学院药学研究院 生命物理化学领域 山田健一教授的研究结果商品化并销售。

※ 本产品仅供研究用,研究以外不可使用。


LipiRADICAL Green(检测试剂)/OH-Pen(抑制物质)                              脂质过氧化研究的新工具!脂质自由基检测试剂和抑制物质

本试剂的概要图和活细胞成像示例


脂质自由基发生特异性反应产生绿色荧光的LipiRADICAL Green原理示意图(左),以及用药物刺激Hepa1-6细胞时的活细胞成像示例(右)。

◆什么是脂质过氧化反应(LPO)和脂质自由基(Lipid radical)?


脂质过氧化反应(lipid peroxidation; LPO)是指由于氧化应激脂质被氧化分解的反应,是脂质分解的过程之一。以含有多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acid; PUFA)的脂质为起点,目前已提出两种脂质过氧化反应的发生过程:

1.氧化应激引起的脂质自由基产生

2. Lipoxygenase引起的过氧化脂质生成和铁离子依赖性过氧化脂质自由基的产生

 

第1种发生过程是由含PUFA的脂质暴露于氧化应激(活性氧ROS)时产生脂质自由基(L.;Lipid radical)开始。脂质自由基容易被氧化并转化为过氧化脂质自由基(LOO・; Lipid peroxyl radical),诱导自由基连锁反应。在第2种发生过程中,含PUFA的脂质被过氧化催化酶lipoxygenase转化为过氧化脂质(LOOH),并在存在大量的铁离子Fe2+ 时会诱导产生过氧化脂质自由基(LOO・)。过氧化脂质自由基与其他脂质反应,诱导自由基连锁反应。

两种过程所产生的过氧化脂质自由基(LOO・)都会在与其他脂质发生自由基反应并扩大自由基连锁反应,同时产生各种过氧化脂质(LOOH)。该自由基连锁反应直至被抗氧化剂聚合前会持续进行,并生成各种脂质结构或醛,最终产生复数的反应活性醛,如acrolein、malondialdehyde(MDA)、4-hydroxy-2-nonenal (4-HNE)等。以这些下游活性物质为起因,会对ER应激、细胞毒性和诱导铁死亡等产生各种影响。

脂质自由基(以及过氧化脂质自由基)被认为是脂质过氧化反应中最重要的最上游因子,虽然其检测方法备受期待,但直到现在,也仅有电子自旋共振(ESR)法等需要特殊设备的方法。LipiRADICAL Green和OH-Pen是由九州大学大学院药学院研究院生命物理化学系的山田健一教授等人开发的、具有新型氮氧化物骨架的脂质自由基响应性荧光试剂(原著名称为NBD-Pen)和抑制剂,它们不与活性氧自由基反应,实现特异性响应脂质自由基。由于LipiRADICAL Green可通过荧光检测来观察/分析脂质自由基,因此可用作以脂质自由基为中心的脂质过氧化反应的新工具。OH-Pen是从LipiRADICAL中去除荧光基团NBD的化合物,与一般的自由基中和剂(TEMPO等)不同,对脂质自由基显示高选择性,可作为脂质过氧化反应的特异性抑制剂使用。


LipiRADICAL Green(检测试剂)/OH-Pen(抑制物质)                              脂质过氧化研究的新工具!脂质自由基检测试剂和抑制物质



◆原理


LipiRADICAL Green是向稳定自由基化合物的氮氧化物衍生物中添加荧光色素NBD的化合物。由于氮氧化物对脂质自由基显示高特异性,所以导入了戊基。LipiRADICAL Green此时处于消光状态,但通过脂质自由基与自由基-自由基偶联形成共价键后,显示绿色荧光。通过观察该绿色荧光强度,可相对定量样品中脂质自由基含量。

LipiRADICAL Green(检测试剂)/OH-Pen(抑制物质)                              脂质过氧化研究的新工具!脂质自由基检测试剂和抑制物质

OH-Pen是LipiRADICAL Green的NBD转化为羟基的化合物,显示相同的脂质自由基选择性以及拥有相同的脂质自由基中和作用。因此可将其用作脂质过氧化反应的抑制剂。


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概述:对使用LipiRADICAL Green的脂质自由基进行全面分析

通过使用LipiRADICAL Green的荧光检测LC/MS-MS法可全面分析脂质自由基和过氧化脂质自由基。原著论文5中,已成功地从5种类型的PUFA中鉴定出共计132种脂质自由基。以下为流程概述,详细的实验方案、LC/MS-MS设置方法/分析方法,请参阅原著论文5。


■概述

步骤1

 添加本试剂至含脂质的自由基样品中,并荧光标记脂质自由基。

  若是动物实验,将本试剂施药于小鼠等动物并在动物体内荧光标记脂质自由基后,马上摘除器官并提取脂质组分。

步骤2

 通过荧光检测LC/MS进行绿色荧光标记产物的质量分析。

步骤3

 减去所得质量值中LipiRADICAL Green的分子量(理论值389.2068),并推断结构。

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◆特点

LipiRADICAL Green

● 本试剂为消光状态,与脂质自由基/过氧化脂质自由基特异性反应,发出绿色荧光。

● 检测波长标准:激发470 nm /荧光520-600 nm(最大~540 nm)。 

※ 详情请参阅数据。

● 对脂质自由基和过氧化脂质自由基具有特异性,在活性氧(H2O2、ClO・、O2・、・OH)中不发出荧光。

● 可通过荧光强度相对定量体外样品中的脂质自由基含量。

● 施药于动物个体后,可在组织水平上进行染色以及相对定量活体内的自由基含量。

※ 由于脂质自由基非常不稳定且会迅速分解,需要对实验方法和条件设置进行验证。详情请参阅原著论文1。

● 可用于评价任意化合物的脂质自由基诱导活性和抗氧化活性。

※ 详情请参阅原著论文4。

● 通过用荧光检测LC/MS可全面结构分析脂质自由基和过氧化脂质自由基。

※ 脂质自由基和过氧化脂质自由基的结构分析方法,请参考原著论文5。

OH-Pen

● 与脂质自由基和过氧化脂质自由基发生特异性反应以抑制自由基连锁反应,可用作脂质过氧化反应信号上游的抑制剂。

● 虽然是自由基化合物,但非常稳定,可体外施药至动物个体。

● 肝细胞癌的动物实验模型(diethylnitrosamine(DEN)给药模型)中显示,可抑制DEN诱发的脂质过氧化反应信号和组织损伤标志物。

注意:LipiRADICAL Green和OH-Pen的区别在于有无荧光基团(请参阅“原理”),对脂质自由基的反应性相同,同时使用时,可能会引起对

注意:脂质自由基的竞争性反应,因此需注意使用方法。

原著论文

1) Yamada Nat. Chem.Biol.,12,608~613(2016)Fluorescence probes to detect lipid-derived radicals.

2) Enoki et al., Chem.Commun.,53,10922~10925(2017)Lipid radicals cause light-induced retinal degeneration.

3) Ishida et al., Free Radical Biol.Med.,113,1487~493(2017)Detection and inhibition of lipid-derived radicals in low-density lipoprotein.

4) Mishima et al., J.Am. Soc.Nephrol.,31,280~296 (2020)Drug Repurposed as antiferroptosis agents suppress organ damage, including AKI, by functioning as lipid peroxyl radical scavengers.

5) Matsuoka et al.,Anal. Chem.,92,6993~7002(2020)Method for Structural Determination of Lipid-Derived Radicals.


参考数据

脂质自由基特异性荧光光谱

添加花生四烯酸(AA)和Lipoxygenase(LOX)至LipiRADICAL Green,观察470 nm的激发荧光。在未添加LOX的条件下,几乎没有观察到荧光,而添加LOX并产生脂质自由基后,可观察到500-650 nm范围内的荧光(最大540 nm附近)(左)。由此看出,荧光强度取决于添加的LOX浓度(右)。


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自由基特异性

观察在以下条件中添加各试剂至LipiRADICAL Green的荧光强度(激发470 nm/荧光530 nm)。可观察到活性氧中的荧光几乎没有变化,而通过LOX酶或氧化诱导物质(AAPH和MeO-AMVN)的3种脂质产生的脂质自由基产生时的荧光强度有所上升。

H2O2, ClO , KO2(O2・),・OH :0.5 mM Lipids 0.5 mM (LA: linoleic acid, ALA: α-linoleic acid, AA: arachidonic acid ) + LOX 2.5 μg/mL or AAPH 10 mM or MeO-AMVN 50 μM


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◆应用数据

活细胞成像

添加LipiRADICAL Green(1 μM)至Hepa1-6细胞培养20 min后,追加致癌性亚硝胺化合物DEN(30 mM)培养20 min,然后每隔2 min用激光共聚焦荧光显微镜进行活细胞成像(激发458 nm/荧光490-674 nm)。经DEN处理的细胞在添加试剂后,荧光强度立即随培养时长的增加而增加,这表明DEN是按顺序产生脂质自由基的。荧光显微镜图像为添加试剂后20 min内的数据。


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体外检测LDL来源的脂质自由基

用氧化诱导物质Hemin或AAPH处理纯化的低密度脂蛋白LDL(20 μg protein/mL),添加LipiRADICAL Green(10 μM)并观察1 h内的荧光强度(激发470 nm/荧光530 nm),可检测到Hemin、AAPH随时间推移和试剂浓度依赖性荧光强度的增加,出现了不同的增加趋势。


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脂质自由基结构分析

1)评价由氧化诱导剂(AAPH + Hemin)产生的自由基

体外添加LOX(10 μg/mL)和氧化诱导物质AAPH+Hemin(10 μM)至花生四烯酸(AA)中,诱导脂质自由基后添加LipiRADICAL Green并进行检测反应。之后通过Bligh&Dyer法纯化脂质成分,并用荧光LC/MS-MS对AA产生的自由基进行全面分析。


上图:荧光LC色谱(激发470 nm/荧光530 nm)。检测出多个峰,对各个峰进行MS-MS分析。

下图:用MS-MS分析比较经鉴定的各种脂质自由基生成量(注:用各自由基种类的LC峰面积的相对定量)。鉴定8种类型的AA过氧化脂质自由基(圆图中的红线),此外还鉴定了由AA裂解产生的29种脂质自由基(条形图、绿线)。

有关详细的实验方案和分析方法,请参阅原著论文5。


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2)DEN诱导时内源性产生的脂质自由基检测

向小鼠施以致癌性亚硝胺化合物DEN,分别在1 h、4 h、24 h后进行麻醉,向腹腔内施以LipiRADICAL Green,之后切除肝脏并压碎,用Bligh&Dyer法制备脂质提取液。并用荧光LC/ MS对各提取物进行各脂质自由基的鉴定以及相对定量。另外,NBD-Pen给药前15 min先施以脂质自由基抑制剂OH-Pen。可观察到左图所示的荧光LC色谱图,用MS/MS分析鉴定出共计11种类型的脂质自由基。随时间观察各脂质自由基种类(右图为C5H11的检测结果),可观察到DEN给药4 h后质谱峰面积大幅增加,而24 h后减少。LipiRADICAL Green给药前,经OH-Pen处理的小鼠脂质自由基被明显抑制。

有关详细的实验方案和分析方法,请参阅原著论文5。


LipiRADICAL Green(检测试剂)/OH-Pen(抑制物质)                              脂质过氧化研究的新工具!脂质自由基检测试剂和抑制物质

3)使用本试剂进行体外鉴定脂质自由基

使用本试剂从5种PUFA【亚油酸(LA),α-亚麻酸(ALA),花生四烯酸(AA),二十二碳六烯酸(DHA),二十碳五烯酸酯(EPA)】中经LOX、AAPH以及Hemin处理后鉴定的脂质自由基列表如下(摘自原著论文5)。


LipiRADICAL Green(检测试剂)/OH-Pen(抑制物质)                              脂质过氧化研究的新工具!脂质自由基检测试剂和抑制物质

通过OH-Pen抑制亚硝胺诱导肝细胞癌

向大鼠施以致癌性亚硝胺化合物DEN后,1 h后再施以OH-Pen。分别切除慢性模型12周后和急性模型24 h后的大鼠肝脏。


上图:慢性模型的肝癌。DEN给药使恶性肿瘤亢进,而施以OH-Pen可明显抑制该反应。

中图:急性模型LPO代谢产物的定量评价。发现OH-Pen抑制了DEN引起的MDA、4-HNE及Acrolein这三种LPO下游产物的增加。

下图:急性模型组织损伤标记物的定量评价。发现OH-Pen抑制了DEN引起的8-OHdG、ALT及细胞凋亡量的增加。


这些结果显示,DEN引起LPO亢进并产生脂质自由基后会诱导各种毒性信号,但OH-Pen可通过抑制初期脂质自由基连锁反应来抑制癌变。


LipiRADICAL Green(检测试剂)/OH-Pen(抑制物质)                              脂质过氧化研究的新工具!脂质自由基检测试剂和抑制物质


※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。


◆常见问题FAQ


问:ES-Buffer可以与非FUJIFILM Wako生产的鲎试剂一起使用吗?

答:是的。该缓冲液不限所搭配的鲎试剂品牌,可与其他品牌非特异性鲎试剂配合使用,阻断(1→3)-β-D-葡聚糖与

  鲎试剂反应,从而将鲎试剂转化为内毒素特异性试剂。

 

问:如何使用ES-Buffer?

答:只需按照包装中的鲎试剂说明书,用ES-Buffer代替LRW(鲎试剂用水)来溶解和制备鲎试剂,即可制备内毒素

  特异性鲎试剂。之后按照鲎试剂制造商的说明书进行操作即可。


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
FDV-0042 LipiRADICAL Green 0.1 mg
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脂质过氧化传感器C11-BODIPY 581/591说明书

脂质过氧化传感器C11-BODIPY 581/591说明书


产品详情

货号

规格

价格

78EA10007-0.5mg

0.5mg

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产品描述

一、 化学结构:

 

二、 检测原理:

C11-BODIPY 581/591 是一种新型的对 Lipid ROS 高选择性、高灵敏的脂质过氧化传感器,与其他 ROS 捕获探针不同之处在于,C11-BODIPY 581/591 具有好的亲脂性可以快速入膜,随后可以选择性的对细胞内和细胞膜中的脂质过氧化(Lipid ROS)进行捕获,并在氧化后仍保持亲脂性,不会离开脂质膜,该过程同时伴随荧光信号变化。多用于荧光显微镜、流式细胞分析等对 Lipid ROS 的可视化监测。C11-BODIPY 581/591 结构中多不饱和丁间二烯基在 Lipid ROS 催化氧化后,其荧光发射峰从 590 nm偏移至 510 nm

实验步骤

1. 样品溶解:

商品开封后,离心机轻甩;随后加入适量 DMSO 进行溶解,溶解度至少可达 25mg/mL。溶解后建议分装-20℃避光保存,尽量避免反复冻融,防止吸潮。

【注】:样品轻甩目的是为了避免痕量的探针吸附管壁损失样本。

2. 样品使用:

1流式细胞分析:

悬浮细胞:800 g 离心 5 min 收集细胞沉淀;随后 PBS 洗涤细胞两遍。贴壁细胞:弃培养液,用常温 PBS 或培养液轻洗细胞 次,随后胰酶消化,800g 离心 5 min 收集细胞沉淀,随后 PBS 洗涤细胞两遍,每个样本收集 1~5 ×105 个细胞。(注意:操作过程中轻柔吹打细胞, 消化时间不宜过长,剧烈吹打或胰酶消化过度会影响实验结果)

C11-BODIPY 581/591 用于脂质过氧化检测的推荐浓度为终浓度 5μM;配制方法:用新鲜空白培养液配制终浓度为 5μM C11-BODIPY 581/591 染色液待用,DMSO 含量5‰。(注意:该步操作建议在消化细胞前准备好,以免细胞消化后久置影响实验结果)

将事先配置好的脂质过氧化染色液加入收集的细胞沉淀中,推荐体积为 500μL,随后置于 37℃孵箱, 染色 30min,期间 5-10min 间隔轻弹细胞使其悬浮保证染色更充分。

染色结束后,800 g 离心 5 min,弃上清,随后用PBS 清洗细胞 次,加入 200μLPBS 重悬细胞用于流式分析。

2) 原位成像:

接种适当密度的细胞于 20mm 规格的盖玻片上(也可用共聚焦小皿替代),给予实验药物处理适当时间后,吸去培养液,用 PBS 洗涤细胞一遍加入 500 μL 配制好的脂质过氧化染色液,于 37℃染色 30min;(配制方法参考流式分析中的染色液配制)弃培养液,PBS 洗涤细胞两遍后荧光显微镜或激光共聚焦下进行成像检测。细胞在染色后应在 1 h 之内完成检测。

 

3)检测条件:

该分子探针在还原状态下最佳激发波长为 581 nm, 发射为 591nm;被 Lipid ROS 氧化后最佳激发波长为 500 nm,发射在 510nm。因此,在流式分析中检测通道为 FL1-A;激光共聚焦检测:氧化态激发波长可选488nmFITC)通道;还原态激发波长可选 561 nmTRITC)通道。

 

 

实验案例分析

流式分析实验范例:

使用本试剂检测 10 μM RSL3(铁死亡经典诱导剂)处理 A549 细胞 24 h 后的细胞脂质过氧化水平的流式检测

 

 

原位成像实验范例:

下图为 RSL310 μM)处理A549 细胞 24 h 后,使用本试剂(5μM)对活细胞中脂质过氧化水平进行原位染色后激光共聚焦成像结果。

 

 

 

 

注意事项

1. 此试剂盒仅供科研使用。

2. 使用前小心离心数秒取用,需佩戴手套操作,注意避免与皮肤、眼睛和黏膜接触。

3. 本试剂盒可用检测活细胞中 Lipid ROS 水平,用于评价细胞铁死亡状态。