内切糖苷酶

– 内切
糖苷酶从清洁制剂中的糖蛋白 – 高度稳定的酶切割完整的聚糖 – 不含甘油，NaCl或其他添加剂，如EDTA。
– 测试所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

内切糖苷酶是用于分析糖蛋白的广泛使用的酶。这些酶从糖蛋白释放完整的聚糖，而外切糖苷酶释放单个单糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙酰基葡糖胺，甘露糖等）。

PNGase F通常包含在酶组中，因为其切割完整的N-连接聚糖的活性相似，尽管它实际上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-连接聚糖的壳二糖核心的个β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之间切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之间切割N-连接的聚糖，留下带电荷的残基，其有助于增加去糖基化蛋白质的溶解度，降低蛋白质聚集体沉淀的可能性。PNGase F切割所有N-连接的聚糖，而Endo H和Endo F酶切除特定类型的N-连接聚糖。

酶的这种分类还包括O-糖苷酶，其从丝氨酸或苏氨酸氨基酸中除去核心1O-连接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）。O-连接的聚糖通常含有在分支和线性连接中与半乳糖连接的另外的单糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶来除去额外的糖。

qa-bio E-PNG01说明书

PNGase F.

PNGase F从糖蛋白切割N-连接（天冬酰胺连接的）寡糖。

产品编号 – 酶的量
E-PNG01 – 60μLs¹E 
-PNG01-20 – 20μLs¹E 
-PNG01-200 – 200μls²（以前的E-PNG05）
   ¹包括缓冲液，变性剂和Triton- 
   X²仅含酶

PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-聚糖酶

PNGase F从糖蛋白切割N-连接（天冬酰胺连接的）寡糖。该酶将天冬酰胺脱氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。变性增加了解理速率。大多数天然蛋白质仍然可以*N-去糖基化，但必须增加孵育时间。酶在反应条件（37℃）下保持*活性至少96小时。PNGase F不会去除通常在植物糖蛋白上发现的含有α-（1,3） – 连接的核心岩藻糖的寡糖; 为此目的，使用肽N-糖苷酶A.

有许多替代酶可用于去除N-聚糖，特别是Endo F家族的酶和Endo H.这些酶切割寡糖核心中的两个N-乙酰氨基葡萄糖残基，产生截短的糖在天冬酰胺上残留一个N-乙酰氨基葡萄糖残基的分子。这留下带电荷的糖，其可以帮助将蛋白质保持在溶液中，所述溶液在用PNGase F去糖基化后沉淀，其去除了完整的寡糖。Endo F1切割高甘露糖和一些杂合型N-聚糖。Endo F2将去除双触角和高甘露糖（降低40倍速率）。Endo F3释放出triantennarry和岩藻糖基化的双触角N-聚糖。远藤H. 去除杂交或高甘露糖聚糖。

来源 Elizabethkingia miricola（是Chryseobacterium meningosepticum）

EC 3.5.1.52 
PDB 1PGS 
UniProt Q9XBM8

内容
PNG酶的F的20mM的Tris-HCl，pH 7.5中

包含20μL和60μL包装尺寸：
5x反应缓冲液7.5 – 250 mM磷酸钠，pH 7.5 
变性溶液 – 2％SDS，1Mβ-巯基乙醇
Triton X-100 – 15％溶液

比活力 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道尔顿

pH范围 6-10，宜7.5

方案
1.在Eppendorf管中加入高达200μg的糖蛋白。用去离子水调节至35μl终体积。
2.加入10μl5x反应缓冲液7.5和2.5μl变性溶液。在100°C加热5分钟。
很酷。加入2.5μlTritonX-100并混合。
4.向反应中加入2.0μl酶。在37°C孵育3小时。

特异性切除所有天冬酰胺连接的复合物，杂交或高甘露糖寡糖，除非α（1-3）核心岩藻糖基化; 天冬酰胺必须在两个末端肽结合，Endo F游离

比活性定义为在37℃，pH7.5下在1分钟内催化从1微摩尔变性的RNase B释放N-连接的寡糖所需的酶量。通过SDS-PAGE监测切割（切割的RNase B迁移更快）。

储存在4°C储存酶。

Sigma去糖基化试剂盒

Sigma-Aldrich 的天然蛋白去糖基化试剂盒（Native Protein Deglycosylation Kit，货号NDEGLY）可在天然条件下去除糖蛋白上的N连接寡糖。糖基化蛋白修饰通常位于折叠蛋白中不容易接近的位置，因此在未变性的情况下，不大可 能通过标准的肽N- 糖苷酶 F（PNGase F）处理来去除。如果您的下游分析需要折叠蛋白（如酶学分析或蛋白相互作用分析），那么这个试剂盒也许适合您。

此试剂盒包含了内糖苷酶F1、F2和F3，以及相应的反应缓冲液。与PNGase F相比，这些内糖苷酶对蛋白构象没那么敏感，更适合在蛋白未变性的情况下去除各种N连接寡糖。这三种内糖苷酶有着不同的连接特异性。F1能够去除低聚甘露 糖和混合寡糖结构，而F2和F3则分别能去除两个分支和三个分支的结构。

此试剂盒在去糖基化上的效果如何呢？美国西北大学的博士生A. Caulfield介绍了他的使用心得。

据Caulfield介绍，他们想要确定目的蛋白在去糖基化之后的生物学活性。糖基化的 去除可通过Western blot来评估，即蛋白条带的分子量减少。他们的目的蛋白包含N连接糖基化。此蛋白在HEK 293细胞中产生，并利用其N端的FLAG标签来纯化。之前他们试过PNGase，但无法让目的蛋白去糖基化。

在这一实验中，他们将2 ug目的蛋白与0.02个单位的内糖苷酶F1、F2或F3及其相应的缓冲液混合，在37°C孵育4小时。之后通过标准的SDS-PAGE和Western blot来评估去糖基化的程度。

正如他们预计的那样，蛋白被去糖基化，且各个样品之间的结果相当一致。有趣的是，内糖苷酶F1对他们的蛋白起作用，而F2和F3则*没效果。Caulfield认为，了解哪种酶能使蛋白去糖基化，将带来一些有关寡糖链性质的信息。

Caulfield认为这一试剂盒简单易用，适用于所有研究蛋白糖基化的研究人员。当然，随着蛋白底物不同，反应条件可能也需要调整。

Sigma-Aldrich提供了多种去糖基化试剂盒，包括GlycoProfile I In-Gel Deglycosylation Kit、GlycoProfile II Enzymatic In-Solution Deglycosylation Kit、GlycoProfile IV Chemical Deglycosylation Kit等，适用于溶液或PAGE胶中的糖蛋白，与下游多个分析（如质谱分析或功能研究）兼容。

内切糖苷酶

– 内切
糖苷酶从清洁制剂中的糖蛋白 – 高度稳定的酶切割完整的聚糖 – 不含甘油，NaCl或其他添加剂，如EDTA。
– 测试所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

内切糖苷酶是用于分析糖蛋白的广泛使用的酶。这些酶从糖蛋白释放完整的聚糖，而外切糖苷酶释放单个单糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙酰基葡糖胺，甘露糖等）。

PNGase F通常包含在酶组中，因为其切割完整的N-连接聚糖的活性相似，尽管它实际上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-连接聚糖的壳二糖核心的个β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之间切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之间切割N-连接的聚糖，留下带电荷的残基，其有助于增加去糖基化蛋白质的溶解度，降低蛋白质聚集体沉淀的可能性。PNGase F切割所有N-连接的聚糖，而Endo H和Endo F酶切除特定类型的N-连接聚糖。

酶的这种分类还包括O-糖苷酶，其从丝氨酸或苏氨酸氨基酸中除去核心1O-连接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）。O-连接的聚糖通常含有在分支和线性连接中与半乳糖连接的另外的单糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶来除去额外的糖。

内切糖苷酶有以下几个品牌产品：

（一）qa-bio E-PNG01

PNGase F.

PNGase F从糖蛋白切割N-连接（天冬酰胺连接的）寡糖。

产品编号 – 酶的量
E-PNG01 – 60μLs¹

E -PNG01-20 – 20μLs¹

E -PNG01-200 – 200μls²（以前的E-PNG05）
   ¹包括缓冲液，变性剂和Triton- 
   X²仅含酶

¥ 1,313.38 – ¥ 9,806.55

PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-聚糖酶

PNGase F从糖蛋白切割N-连接（天冬酰胺连接的）寡糖。该酶将天冬酰胺脱氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。变性增加了解理速率。大多数天然蛋白质仍然可以*N-去糖基化，但必须增加孵育时间。酶在反应条件（37℃）下保持*活性至少96小时。PNGase F不会去除通常在植物糖蛋白上发现的含有α-（1,3） – 连接的核心岩藻糖的寡糖; 为此目的，使用肽N-糖苷酶A.

有许多替代酶可用于去除N-聚糖，特别是Endo F家族的酶和Endo H.这些酶切割寡糖核心中的两个N-乙酰氨基葡萄糖残基，产生截短的糖在天冬酰胺上残留一个N-乙酰氨基葡萄糖残基的分子。这留下带电荷的糖，其可以帮助将蛋白质保持在溶液中，所述溶液在用PNGase F去糖基化后沉淀，其去除了完整的寡糖。Endo F1切割高甘露糖和一些杂合型N-聚糖。Endo F2将去除双触角和高甘露糖（降低40倍速率）。Endo F3释放出triantennarry和岩藻糖基化的双触角N-聚糖。远藤H. 去除杂交或高甘露糖聚糖。

来源 Elizabethkingia miricola（是Chryseobacterium meningosepticum）

EC 3.5.1.52 
PDB 1PGS 
UniProt Q9XBM8

内容
PNG酶的F的20mM的Tris-HCl，pH 7.5中

包含20μL和60μL包装尺寸：
5x反应缓冲液7.5 – 250 mM磷酸钠，pH 7.5 
变性溶液 – 2％SDS，1Mβ-巯基乙醇
Triton X-100 – 15％溶液

比活力 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道尔顿

pH范围 6-10，适7.5

方案
1.在Eppendorf管中加入高达200μg的糖蛋白。用去离子水调节至35μl终体积。
2.加入10μl5x反应缓冲液7.5和2.5μl变性溶液。在100°C加热5分钟。
很酷。加入2.5μlTritonX-100并混合。
4.向反应中加入2.0μl酶。在37°C孵育3小时。

特异性切除所有天冬酰胺连接的复合物，杂交或高甘露糖寡糖，除非α（1-3）核心岩藻糖基化; 天冬酰胺必须在两个末端肽结合，Endo F游离

比活性定义为在37℃，pH7.5下在1分钟内催化从1微摩尔变性的RNase B释放N-连接的寡糖所需的酶量。通过SDS-PAGE监测切割（切割的RNase B迁移更快）。

储存在4°C储存酶。

（二）ludger

酶（内切和外切糖苷酶）包括LudgerZyme™（LZ）产品

内切糖苷酶：

从糖蛋白切割聚糖的酶

• PNGase F（肽N糖苷酶F）

  E-PNG01

  PNGase F（QABio）。足以进行多达60次反应。

  0.3 U /60μl。试剂盒包括酶加反应缓冲液。

  酶学委员会编号：EC 3.5.1.52

• E-PNG05

  PNGase F（QABio）。足以达到200次反应。

  1 U /200μl。仅含酶。

  酶学委员会编号：EC 3.5.1.52

• 重组PNGase F.

  E-rPNG01

  重组PNGase F（QABio）。足以进行多达60次反应。

  0.3 U /60μl。试剂盒包括酶加反应缓冲液。

  酶学委员会编号：EC 3.5.1.52

• LZ-rPNGaseF-kit *新产品*

  LudgerZyme重组PNGase F试剂盒（New England BioLabs）。足以进行多达150次反应。

  150μl。试剂盒包括酶加反应缓冲液。

  酶学委员会编号：EC 3.5.1.52

（三）neb 

P0704S

浓度

500,000单位/毫升

尺寸

15,000个单位

价格表

$ 180.00

P0704L

浓度

500,000单位/毫升

尺寸

75,000个单位

价格表

$ 718.00

PNGase F.

PNGase F是从糖蛋白中去除几乎所有N-连接的寡糖的有效的酶促方法。PNGase F是酰胺酶，其在高甘露糖，杂合和复合寡糖的内部GlcNAc和天冬酰胺残基之间切割。 

• 通过SDS-PAGE和完整的ESI-MS测定，纯度≥95％
• 非重组，没有可检测的内切糖苷酶F1，F2或F3污染
• 储存在50％甘油中; 适活动和稳定性长达24个月
• 可在天然或变性条件下使用
• 优化糖蛋白的去糖基化; 使N-聚糖核心寡糖保持完整，适合进一步分析

（四）promega

PNGase F

Catalog number selected: V4831

PNGase F( 肽N- 糖苷酶F) 是一个重组糖苷酶，从Elizabethkingia miricola 克隆

• 用于测定蛋白糖基化状态和位置
• 可在N- 连糖蛋白的高甘露糖、杂合和复合寡糖部分内侧的 N- 乙酰葡萄糖胺(GlcNAc) 和天冬酰氨残基之间进行切割。
• 不会去除常见植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 岩藻糖连接的寡糖。
• 产品以10u/μl浓度提供

PNGase F, 重组糖苷酶

PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）是一个重组糖苷酶，从 Elizabeth-kingia miricola 克隆，并在大肠杆菌中过表达获得。PNGase F 的分子量为 36kDa,  可以在 N-连糖蛋白的高甘露糖、杂合和复合寡糖部分内侧的 N- 乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间进行切割（图1）。PNGase F 不会去除常见植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 岩藻糖连接的寡糖。

单位定义：一单位 PNGase F 指在 37℃可以 1 分钟内催化 1nm 变性核糖核酸酶 B（RNase B）去糖基化所需 PNGase F 的量。1 Promega 单位等于 1 IUB 毫单位。

分子量：PNGase F 分子量约为 36kDa 。

物理形态：PNGase F 溶于 20mM Tris-HCl（pH 7.5，25℃），50mM NaCl和 5mM EDTA缓冲液中，浓度为10,000u/ml。

应用：

• 蛋白是否被糖基化的特征

• 确定蛋白的糖基化位点

• 聚糖结构特征

• 蛋白运输

Cleavage specificity of PNGase F on N-Glycans.

Cleavage specificity of PNGase F on N-Glycans.

Recombinant PNGase F deglycosylates multiple substrates.

Recombinant PNGase F deglycosylates multiple substrates.

Schematic illustrating the use of PNGase F and mass spec analysis of N-glycosylation.

Schematic illustrating the use of PNGase F and mass spec analysis of N-glycosylation.