WAKO过氧化氢特异性荧光探针

WAKO过氧化氢特异性荧光探针

品牌: Wako(和光纯药)
货号: 028-17811
CAS号: 728912-55-8
供应商: 和光纯药株式会社
规格: 1mg
过氧化氢特异性荧光探针BES-H2O2-Ac / BES-H 2O2
• 比二氯荧光黄 (DCFH) 有更高的特异性
• 可动态监测活细胞内的过氧化氢
• BES-H2O2-Ac 可穿透细胞膜,无需打孔
• 极易溶于水,可制成水溶液使用
• 可用于荧光显微镜、流式细胞仪

BES-So-AM:使用举例

图1)是Jurkat T细胞在含33μM BES-So-AM的培养基中37°C培养1小时,使探针进入细胞,然后添加4mM丁酸(O2•-诱导剂),37°C培养1小时;图2)是Jurkat T细胞在含33μM BES-So-AM的培养基中37°C培养1小时,使探针进入细胞,然后不添加丁酸,37°C再培养1小时;图3)是Jurkat T细胞在含33μM BES-So-AM的培养基中37°C培养1小时,然后添加5mM的丁酸,继续培养一个小时。参考文献
1) Maeda, H. et al.: Angew. Chem. Int. Ed., 43, 239 (2004).
2) Maeda, H. et al.: Chem. Pharm. Bull., 49, 294 (2001).1. Features
•Much higher selectivity compared to conventionally-used DCFH probes•Responds specifically to hydrogen peroxide, enabling detection of intracellular hydrogen peroxide activity•BES-H2O2-Ac is cell membrane permeable•Superior water solubility allows use with aqueous solutions•Can be used in flow cytometry

2. Application


H2O2-produced stimulation No H2O2-produced stimulation
Fluorescent images
Phase-contrast images
Fluorescent images of Jurkat T cells with BES- H2O2 -Ac and the same-fi eld phase-contrast images
Jurkat T cells were cultured in a medium with 50μM BES-H2O2-Ac for 1 hour. Then, one group of them was cultured in a medium with 5 mM butyric acid (H2O2-produced stimulation), whereas the other in a medium without butyric acid (No H2O2– produced stimulation), each for 1 hour. (Courtesy: Professor Hatsuo Maeda, PhD., School of Pharmacy, Hyogo Univ. of Health Sciences)

 

3. References


  1. “Fluorescent probe for hydrogen peroxide based on a non-oxidative mechanism”, Maeda, H. et al.: Angew. Chem. Int. Ed., 43, 2389-91 (2004).
  2. “Hydrogen peroxide-induced deacetylation of acetyl resorufin as a novel indicator reaction for fluorometric detection of glucose using only glucose oxidase”, Maeda, H. et al.: Chem. Pharm. Bull., 49, 294-8 (2001).

4. Products List


< All products are for Cellbiology;   Keep at room temperature >

Cell Permeability Product Name Package Size Wako Catalog No.
Thiol/Selenol
selective probe
x
BES-Thio
1 mg
025-15481
H2O2 Probes
o
<Detection of
cell-derived H2O2
BES-H2O2-Ac
1 mg
028-17811
x
BES-H2O2   (Cell-impermeant)
1 mg
021-16201
Superoxide
selective probe
o
<Detection of
cell-derived superoxide>
BES-So-AM
1 mg
021-17801
x
BES-So   (Cell-impermeant)
1 mg
028-16211

说明书下载:

http://www.wako-chem.co.jp/english/labchem/product/life/BES-H2O2/pdf/WPUb1_p15-7.pdf

抗DNA-PKcs抗体[ 393 ](ab32566)

种属反应性

与反应:小鼠、大鼠、人、亚美尼亚仓鼠
  • 应用 AB评论 说明 WB 1 / 1000 – 1 / 10000。检测到的频带的约460 kDa(预测分子量:469 kDa)。

    对于未纯化,使用1 / 1000 – 1 / 2000。

    ihc-p 1 / 50。

    对于未纯化,使用1 / 5。

    国际商会/如果 1 / 100。

    对于未纯化,使用1 / 10。

  • 应用说明不适合Flow Cyt或IP。
  • 靶标

    • 功能丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,作为DNA损伤的分子传感器。参与DNA非同源末端连接(NHEJ)双链断裂修复要求(DSB)和V(D)J重组。必须绑定到DNA表达的催化性能。促进处理发卡DNA结构的V(D)J重组的发夹核酸内切酶激活(Artemis DCLRE1C)。在DNA两端的DNA-PK复杂装配也是NHEJ结扎步骤。要保护和DNA断端对齐。还可以作为支架蛋白帮助DNA修复蛋白损伤部位的定位。染色体末端,提示端粒稳定性和染色体末端融合的预防维修进一步的作用。还参与调节转录。识别组蛋白变体H2AX / H2AFX底物序列[圣] -问:“ser-139磷酸化,从而调节DNA损伤应答机制。磷酸化DCLRE1C,c-Abl / ABL1,组蛋白H1,Hspca,c-Jun/Jun、p53、TP53、PARP1、pou2f1,DHX9,SRF,XRCC1,XRCC1,XRCC5、XRCC6,XRCC4,WRN,myc和RFA2。能磷酸化C1D不仅在线性DNA的存在而且在超螺旋DNA的存在。磷酸化p53 / TP53的超螺旋DNA的存在的能力依赖于矿物。
    • 序列相似性属于PI3 / P14激酶家族。含有脂肪1域。包含1个培训领域。包含2个热重复。包含1个PI3K/PI4K域。包含3个TPR重复。
    • 翻译后修饰磷酸化后,DNA损伤,可能是通过ATM、ATR。自身磷酸化thr-2609,thr-2638和thr-2647。thr-2609是DNA损伤诱导的磷酸化位点(诱导与电离辐射、红外)。磷酸化诱导的构象变化,导致的DNA-PK复杂的重构,有效的处理和DNA修复的必要。以GAPDH S-亚硝基。
    • 细胞定位核。
    • 以上信息来自:UniProt加入目标p78527UniProt协会通用蛋白质资源(UniProt)2010
      核酸研究38(2010):d142-d148

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    液体活检中又添新成员cfDNA

    核心提示:日前,《Cell》中的新研究揭示了克服液态活检检测范围局限性的新方法,开发出了依赖于核小体中DNA折叠的新型血液检测技术,可扩大液态活检的诊断范畴。血浆游离DNA(cfDNA)存在于循环血浆、尿液和人类的其它体液。cfDNA包括双链DNA片段,绝大多数……
    日前,《Cell》中的新研究揭示了克服液态活检检测范围局限性的新方法,开发出了依赖于核小体中DNA折叠的新型血液检测技术,可扩大液态活检的诊断范畴。

    血浆游离DNA(cfDNA)存在于循环血浆、尿液和人类的其它体液。cfDNA包括双链DNA片段,绝大多数是短链,而且通常浓度很低。在健康人体中,血浆cfDNA被认为来自于正常的造血细胞。cfDNA的循环半衰期很短,这提示它需要在细胞凋亡时被持续的释放。在特定的生理条件或疾病过程中,有相当一部分cfDNA会与在健康的时候不同,基于这一结果,近年来cfDNA已被用于无创性诊断。在孕妇中,约有10%-15%的cfDNA来自于胎盘滋养层,现在cfDNA多用于在高危孕妇中筛查胎儿的遗传缺陷,这就是是当前火热的无创唐氏筛查的基础!在肿瘤病人中,通过cfDNA的量化突变来检测肿瘤已被越来越多的人认可。而在移植方面,移植排斥反应也与供体移植器官中的cfDNA水平相关。


    cfDNA碎片示意图
    研究人员们假设,cfDNA是细胞死亡的碎屑,在细胞死亡的过程中,DNA被酶切成很多块(切断核小体之间连接脆弱的DNA片段),先前研究指出,人类基因组核小体容易被切断的位置总共有1300万个。cfDNA的片段对应着染色体,其中还包含了很多蛋白质的损伤。

    通过对血浆中的游离DNA进行深度测序,研究人员制成了有机体内核小体的全基因组图谱,同时发现cfDNA碎片蕴藏了转录因子的印迹。cfDNA核小体包含率与细胞中核体结构、基因结构与表达密切相关,并可揭示细胞类型的起源。每个细胞中含有大量的通过反复折叠的DNA。DNA盘旋缠绕着核心组蛋白八聚体形成了核心蛋白。核小体如珠子随着基因组延伸。人体内每个细胞的DNA折叠方式都有差异,这些差异可使cfDNA带上标记。不仅不同癌症有不同的核小体DNA标记,通过这些标记还能鉴别出肿瘤的解剖源。这还与5%的起源未知的转移性癌症尤其相关,这种测试可有助于诊断未知癌症的类型并给与治疗指导。利用癌症患者的血液样本,不同的癌症类型可以在游离DNA上产生不同的核小体标记,对于某些癌症患者而言,研究者就可以鉴别出肿瘤的解剖学来源。

    那这cfDNA与之前说的ctDNA又有什么区别和联系呢?

    ctDNA是来源于肿瘤细胞的cfDNA,属于cfDNA的一种类型。两者为包含关系,ctDNA仅为cfDNA很小的一部分。ctDNA来自肿瘤细胞的体细胞突变,不同于遗传突变的是其存在于体内每个细胞。往往在提到循环肿瘤DNA的时候,大家往往简单的将它认为是肿瘤患者外周血中游离的DNA。其实不然,虽然ctDNA所占cfDNA的比例波动范围非常大,约0.01%~90%,但实际上,大多数ctDNA在cfDNA中的占比约为0.2%。

    大多数的液体活检技术都会寻找机体中不同细胞间的特殊DNA错配,比如存在于肿瘤细胞但不存在于健康细胞的突变等,研究者认为这种新型检测技术的优势就在于其甚至可以对遗传特性相当的两个细胞进行有效区分;目前这种新技术可以对液体活检不能诊断的一系列疾病进行检测,而研究者希望新型检测技术可帮助进行诸如心脏疾病、中风及自身免疫等疾病的诊断。

    Hampton 24孔悬滴板 VDX Plate with sealant(带密封剂)

    Hampton 24孔悬滴板 VDX Plate with sealant(带密封剂)
    VDX Plate with sealant
    Applications

    Hanging drop crystallization
    Sitting drop crystallization with Micro-Bridges® or Glass Sitting Drop Rods™
    Dialysis crystallization with Dialysis Buttons™
    Features

    24 well plate with raised cover
    Sealant applied to 24 wells, ready to seal with cover slides
    Compatible with 22 mm diameter square and circle cover slides
    Optically clear plastic
    Extremely versatile and cost-effective crystallization platform
    Compatible with UV crystal imaging when used with HR3-231 and HR3-233 – 22 mm x 0.22 mm Siliconized circle cover slides and HR3-215 and HR3-217 – 22 mm x 0.22 mm Siliconized square cover slides

    Description
    24 well crystallization plate for hanging drop or sitting drop vapor diffusion crystallization (when used with Micro-Bridges or Glass Rods), or dialysis crystallization (when used with Dialysis Buttons). Stackable, optically clear plastic 24 well plates with raised covers (to allow room for cover slides) and flat bottoms for exceptional optics. Raised, wide rings around each reservoir (well) minimize cross contamination and allow each well to be individually sealed with 22 mm diameter circle or square cover slides. Plates are individually wrapped and supplied with applied sealant. 15.0 cm x 10.8 cm plate footprint is convenient for manual pipetting and well access while at the same time compatible with some automated liquid handling systems. Approximate dimensions: 15.0 cm x 10.6 cm x 2.2 cm. Approximate well size: 1.7 cm x 1.6 cm. Typical well volume: 500 to 1,000 µl. Well capacity: 3.5 ml.

    CAT NO NAME DESCRIPTION
    HR3-172 VDX邃「 Plate with sealant 24 plate case
    HR3-170 VDX邃「 Plate with sealant 100 plate case

    23andMe开放API,准备好和开发者一道探讨自己的基因了吗?

    网络、软件是奇妙丛生的地方,以大量数据为基的巨大平台上,个体不过一跬,产出却能是一蓦。基因解密公司23andMe决定今起对一切开发者开放他们的应用编程接口(API),欢迎大家共同构筑宝器。

    事关基因时,道德争论往往在所难免,不过公司对此问题早有准备。23andMe希望帮助分析发现个人基因信息,公司在技术和各种衍生问题上考虑都较为周全。用户绝无隐私尽失之虞,这一弊端已经被绕开了,所有数据均不足以让开发者定位到用户头上的。

    该创业公司创于2006年,起步时候就雄心勃勃:他们要做人们基因信息的定位专区,人们可以在23andMe查阅自己的基因组。公司利用DNA分析技术和基于网络的交互工具创造了“个人基因组服务”,任何人都可以称为其用户,运用该项服务了解自己的基因数据包括自己的血统以及将来可能患上什么疾病。23andMe的个人DNA测试技术曾荣获时代杂志年度最佳发明奖。

    23andMe出手如此特立不凡,他们的梦想得来于科幻小说,他们的价值不止于猎奇淫巧。用户能从23andMe这里看到超过200条信息,包括自己的身体信息、特质报告、祖先信息等,一个人的健康、家世、生活方式和表型数据在此解析尽致。这些可以安全地直接称为基因科研的宝贵资料。今年7月,公司获得了第一项专利,那是用于帮用户检测罹患帕金森综合征几率一项技术。由于23andMe的基因搜索资源为众包型集群驱动,其结果的有效性受到一致认可。公司蒸蒸日上,收购了时年4岁的同行公司CureTogether,后者带着自己超过25000名的用户和关于576种健康问题的400多万条数据,使23andMe如虎添翼。

    23andMe联合创始人之一的Anne Wojcicki女士在声明开放API后表示,API为用户深究自己的基因提供了广阔的可能。公司同时还有一系列其它突破性工具,都旨在帮助用户探查自己的基因。API的推出在基因科技之外也洞开了门扉,它是外部群体共同开发基于网络的交互工具的范例。

    摆在十年前,任谁也想不到,开发工作的“共同参与、群策群力”可以致于这个程度。今天开始开发者就可以与23andMe熟悉起来、步入创作了,详见https://api.23andme.com

    wako适合用于羟甲基化DNA分析5-hydroxymethylcytosine antibody

    适合用于羟甲基化DNA分析!5-hydroxymethylcytosine antibody

    本品是对应5-hydroxymethylcytosine的单抗,能用于Hydroxymethylated DNA IP (hMeDIP)分析。

    免疫动物

    大鼠

    类型

    单克隆

    交叉性

    人、鼠等(适用范围广)

    适用

    hMeDIP、hMeDIP-seq、Dot blotting、 Immunofluorescence

    背景

    5-hydroxymethylcytosine是最近发现的修饰碱基,由于oxygenase的运动,从5-methylcytosine(5-mC)被转换成5-hydroxymethylcytosine(5-hmC)。

        5-hmC作为第六个碱基在生物体内有什么作用还不明朗,但是,普遍认为它与5-hmC起不同的重要作用。使用普通的硫酸氢钠法不能区别5-mC和5-hmC,所以急需找到可以特异性检测5-hmC的方法。要分别5-mC、5-hmC的序列,利用抗体反应亲和性的技术比较有效,还可以作为特异性的浓缩方法。2

    イメージ

    1

    【辨别Dual MeDIP:5-mC和5-hmC】

    把基因组DNA用超声波处理,片段化到300 ~ 500 bp,用5-hydroxymethylcytosine antibody (5-hmC抗体:本品)进行羟甲基化DNA IP分析(hMeDIP)。同时对hMeDIP的非结合分层部分,用5-methylcytosine antibody(5-mC抗体)进行甲基化DNA IP分析(MeDIP)。

    イメージ

    2

    【和其他公司产品比较】

    对5-hydroxymethylcytosine使用2种抗体:“Diagenode公司的单抗(本品)”和“其他公司产品的多抗”进行羟甲基化DNA IP分析(hMeDIP)。在hMeDIP里使用了Diagenode公司的hMeDIP kit。

    イメージ

    橙字:Diagenode公司产品单抗

    黑字:其他公司单抗

    3

    【对单链DNA和双链DNA进行羟甲基化DNA IP分析(hMeDIP)的有效性】

    使用5-hydroxymethylcytosine抗体,进行hMeDIP。作为阴性对照,使用小鼠IgG。使用1μg 由hMeDIP kit(Diagenode公司)的GenDNA module制备的ES细胞(E14)的DNA,经BioruptorR进行超声波处理,片段化到300-500bp。

    而经免疫沉淀得到的DNA,可使用Sfi1 (splicing factor 1) gene的引物对进行定量PCR的分析。

    4

    【用点印迹法时Diagenode公司的5-hmC抗体的特异性】

    用5-hmC(1)和5-hmC(2)、C(3)作为各自的底物的PCR产物,经2~200ng(各自含有0.1~10pmol的C碱基)的膜进行点印迹。

    在5-hmC抗体里(4μg/ml(稀释倍率1:500))孵育膜。膜暴光30秒。

    イメージ

    数据资料

    5-hydroxymethylcytosine antibody (diagenode社英語版)

    产品编号

    品名

    包装

    313-81061

    5-hydroxymethylcytosine antibody

    50μg

    刊登的试剂只使用于试验·研究目的,不能作为“医药品”、“食品”、“家庭用品”等使用。

     

    T细胞尼龙毛柱分离法

    上海金畔生物科技有限公司提供T细胞尼龙毛柱
    简单介绍
    在研究体内及体外的免疫系统时,分离淋巴细胞群是一个关键步骤。因为现在市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清,所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用
    了尼龙毛对B细胞的亲和力,从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。
     
    T细胞尼龙毛柱分离法的详细介绍
    T细胞尼龙毛柱分离法
    在研究体内及体外的免疫系统时,分离淋巴细胞群是一个关键步骤。因为现在市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清,所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用
    了尼龙毛对B细胞的亲和力,从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。因为这个方法不像流式和磁珠费用昂贵,而且操作简便,所需要的条件也不高,是一种非常实用的方法

    (在此我向各位解释一下,现在分离T细胞的方法主要是三种,流式,磁珠法,尼龙毛法。与前两种方法相比,尼龙毛法的优势在于无需特定的设备仪器,一般的实验室均有条件操作;价格相
    对低廉;可以进行大量样本操作。)
    首先要指出的是实验中所使用的是分离T细胞专用的尼龙毛(Nylon Fiber),不是化工上的尼龙纤维,曾经有人问过我这种问题,如果你买错了,可是做不出来的!其次,现在市面上的尼龙毛
    也是良隽不齐,也有同仁反应买到的尼龙毛加入缓冲液以后成了一团糨糊,根本没法使用,这个问题就要靠各位的慧眼了。
    现在市面上有尼龙毛填料,也已经有了商品化的尼龙毛柱子,这两者的区别主要是以下两点:
    1.       商品化的柱子的填料量是已经定好的,有一个确定的上样量范围。而自己买填料装柱可以控制填料量,也就是可以控制上样量,这对于样本量非常少,或是样本量非常大的实验需求
    非常合适。
    2.       商品化的柱子已经经过了无菌处理(一般是辐射灭菌),而自己装柱当然就要自己灭菌了。
    3.       商品化的柱子在实验的重复性上有着绝对的优势。自己装的柱子在填料的处理和装柱的松紧等方面不容易控制,差异性的控制就看你的实验技巧了。
    操作方法:
    1.秤取1.5g尼龙毛装入20-30ml玻璃或一次性注射器内(要可以灭菌的),填料的体积控制在15毫升左右(注射器上有标记,所以还是比较好控制的),因为尼龙毛的松紧关系到T细胞的回收率,
    所以要特别注意。注射器下端配接5厘米左右长的带有弹簧夹的橡皮管。
    2. 加入大量的PBS平衡柱子后,用铝箔包裹,并置于适当的容器内,高压灭菌15分钟。
    (商品化尼龙毛柱以上步骤可以省略,经过无菌PBS平衡后直接进行下列步骤。)
    3. 灭菌的尼龙毛柱垂直固定后放于超净台内,顶部以铝箔覆盖,避免污染。
    4. 橡皮管,弹簧夹用无水酒精消毒后接注射器下端,打开弹簧夹调节流速在大约3-4ml/min。
    5.首先,加入3-4倍柱体的无血培养基平衡;随后,之后加入相同体积的含有血清的培养基平衡(上述培养基都要预热),最后等培养基页面接近柱填料页面时,关闭弹簧夹。
    6. 样本细胞悬浮液浓度控制在5×108cells/ml的,上样量一般是1/3-1/5柱体积(商品化的柱子一般都有推荐上样量)。样品加入之后,再加入少量培养液,然后关闭弹簧夹。
    7. 柱上覆盖铝箔,移置于消毒过的容器中,37℃孵育1小时。此过程中柱子必须要保持垂直状态。
    8. 从培养箱中拿出柱子,置于超净台内,除去铝箔。接上按照4.中的方法消毒的弹簧夹和橡皮管,加入适当体积经37℃预热的培养基,打开弹簧夹控制流速在3-4 mL/min,流出约5ml之后,
    流出的培养液基变得不透明,此时其中含有T细胞,收集这一部分培养基。
    9. 基本上何时结束收集取决于流出液体中细胞的浓度,实际上,收集的量达到一个柱体积时就可以停止收集,因为即使收集更多的量,回收率几乎不会增加。
    10 。参考数据:
    样本:小鼠脾脏(T细胞含量在30-40%,B细胞含量在55-60%)
    细胞回收率:13-25%
    B细胞污染率:小于15%
     
    样本:大鼠脾脏(T细胞含量在30-35%,B细胞含量在55-65%)
    细胞回收率:大于25%
    B细胞污染率:小于15%
     
    样本:人或兔外周血
    细胞回收率 : 20-30% (人);25-35% (兔)
    B细胞污染率:小于5% (人、兔)
     
    (注)收集粘附于尼龙毛上的细胞时,将T细胞收集完毕后的尼龙毛在无菌操作的状态下取出,转移到适当的容器中,用镊子小心的将尼龙毛松开,粘附的细胞可以洗到培养基中。或者将注射
    器芯插入注射器内,通过压力使的粘附的细胞随着液体流出。
     
    产品信息
    品牌     品名                   规格
    Wako  T细胞尼龙毛柱          0.5g*10  (推荐用于小鼠脾脏)
    Wako  T细胞尼龙毛柱L型      1g*10   (推荐用于大鼠脾脏、人或兔子的外周血)
    Wako  T细胞尼龙毛            2g*5   (可按照自己的需要装柱,控制上样量)
    Wako  小鼠淋巴细胞分离试剂  30mL*5  用于从小鼠脾脏,淋巴结,淋巴结悬浮液中分离淋巴细胞
    Wako  人淋巴细胞分离试剂  100ml*6  用于从人血中提取淋巴细胞
    Wako  铁粉(羰基铁)Iron Powder, from Iron Carbonyl  25g   直径25um,用于清除巨噬细胞
    Wako  κ-卡拉胶κ-Carrageenan  25g
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    上海金畔生物科技有限公司
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