大量现货alstembio VB100说明书

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上海金畔大量现货alstembio VB100说明书

ViralBoost Reagent: #VB100

ViralBoost试剂:#VB100

描述

ViralBoost试剂(500X)是一种新型的小分子混合物,可以增强病毒的产生,并且是有效包装病毒的强大,广泛适用的试剂。ViralBoost试剂在转录水平上稳定地调节病毒RNA的包装,可将逆转录病毒或慢病毒颗粒的产量提高多达10倍。易于使用的协议使ViralBoost试剂非常适合各种规模的病毒包装。

 

图1.来自GFP反转录病毒转导的HEK 293T细胞的流式细胞仪数据,GFP反转录病毒在不存在ViralBoost试剂的情况下包装。

 

 

图2. GFP慢病毒转导的HEK 293T细胞,有和没有ViralBoost包装

 

 

产品名称 病毒助推器
目录 # VB100
尺寸 1毫升
运输 环境温度
储存和稳定性 储存在4℃。按说明存放该产品可稳定12个月。
质量控制 使用人类胚胎肾293T细胞在转染测定中对每批ViralBoost试剂进行了功能测试。
用法 用逆转录病毒或慢病毒包装质粒混合物转染人胚胎肾(HEK)293T细胞后6-14小时,用新鲜的DMEM培养基代替培养基,该培养基补充有10%热灭活的胎牛血清和0.5%青霉素-链霉素,并添加将1/500体积的ViralBoost试剂加入一体积的新鲜培养基中,并继续在37°C的CO2孵育箱中孵育。
限制使用 仅供研究使用。不适用于诊断或治疗程序。

ViralBoost试剂是一种新型的小分子混合物,可用于高滴度病毒生产,并且是有效包装病毒的强大,广泛适用的试剂。它在转录水平上稳定地调节病毒RNA的包装,可以极大地提高逆转录病毒或慢病毒颗粒的产量,多可提高10倍。易于使用的协议使ViralBoost试剂非常适合各种规模的病毒包装。

 

 

使用流程:

一天:转染前一天,

1.用1x明胶涂板/盘子30分钟。吸出明胶,并每100 mm平板接种约3-4 X 10 6个 HEK 293T细胞。每个板使用10 ml培养基。

注意:拥有良好的单细胞悬液(胰蛋白酶消化良好)并均匀分布细胞非常重要。

 

第二天:转染

注意:按照制造商的规程准备转染。

2.准备两个试管,然后向每个试管中加入0.5 ml DMEM。在一个试管中加入DNA混合物(包含病毒载体和包装混合物),并通过轻敲试管将其充分混合。在另一个管中,添加NanoFect(目录号NF100)。通过互联管混合。

注意:在室温(20–25°C)下孵育不超过5分钟。

3.将NanoFect-DMEM混合物转移到DNA管中,上下吸移2-3次。涡旋5-10秒,充分混合。

4.在室温下孵育约15分钟,以使NanoFect / DNA复合物自组装。

5.滴加NanoFect / DNA混合物到板中,轻轻摇动板并将板放回培养箱中

 

第三天:更换培养基并添加ViralBoost

6.用10 ml新鲜培养基代替上清液,并补充20 µl ViralBoost(500X)。将板返回细胞培养箱。

 

第四天:收集病毒

!注意小心处理病毒材料,避免溢出。使用漂白剂对危险液体进行消毒(终浓度为10%,持续30分钟)。

7.将上清液收集在50 ml锥形管中,并置于冰上。离心机中以千克上清液10分钟,以除去细胞碎片。(将离心机预设为4°C)

8.通过0.45 µm过滤器过滤上清液。将已过滤的上清液转移至无菌容器中,并每隔4体积的含病毒上清液添加1体积的冷逆转录病毒/慢病毒沉淀溶液(4°C,目录号VC100和VC200)。(例如:5毫升逆转录病毒/慢病毒沉淀溶液和20毫升病毒上清液)。

9.充分混合并冷藏过夜。

 

第五天:浓缩病毒

10.将混合物在4°C下以1500g离心30分钟。离心后,病毒颗粒可能在容器底部呈米色或白色沉淀。

11.丢弃上清液。通过以1500g离心5分钟来旋转残留溶液。抽吸去除所有液体,注意不要扰乱沉淀中沉淀的病毒颗粒。

12.使用冷的无菌PBS或DMEM在4°C下以原始体积的1/10至1/100重悬病毒沉淀。分装在低温小瓶中,并在-80°C下储存直至准备使用。

注意:可以使用病毒浓缩/纯化程序除去ViralBoost试剂。当直接用于转导HEK 293T细胞时,尚未检测到带有ViralBoost试剂的病毒颗粒粗品对目的基因表达的副作用,但不同细胞系之间可能存在差异。建议事先测试ViralBoost对靶细胞的作用。